作者：馮志毅 趙獻敏 王彥志 魏悅 郭永慧 張冰 鄭曉珂

【摘要】 目的研究不同產地卷柏中總黃酮的含量測定方法。方法以阿曼托雙黃酮為對照品，繪制標準曲線，將卷柏95％乙醇回流提取液，在337 nm波長下測定吸收度。結果總黃酮含量為1.52%，平均回收率為99.90 %，RSD=1.35%(n=6)，線性范圍1.92～11.52 μg·ml-1，r=0.999 8。結論該法測定卷柏總黃酮含量，簡單、迅速、準確，可用于卷柏的質量控制。

【關鍵詞】 卷柏 阿曼托雙黃酮 總黃酮

卷柏為卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Sping.或墊狀卷柏Selaginella pulvinata(Hook. et Grev.) Maxim.的干燥全草，具有活血通經功效。主要用于經閉痛經、跌打損傷等［1］病癥。現代藥理學研究證實，卷柏所含的阿曼托雙黃酮、新柳杉雙黃酮［2～4］等黃酮類化合物，具有抗脂質過氧化和清除自由基的作用，對溶血性磷脂酰膽堿(LPC)誘導的血管內皮細胞損傷有保護作用［5］。本研究采用紫外分光光度法測定了全國10批不同產地卷柏中總黃酮的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器島津UV-2201紫外分光光度計；AB204-N萬分之一電子天平；AE240十萬分之一電子天平；DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業儀器有限公司），旋轉蒸發器SB-1000(上海愛朗儀器有限公司)。

1.2試藥卷柏藥材產地分別為安徽、北京、河南、新疆、山東、云南、湖北、河北、江西、甘肅，共收集10批樣品，經過河南中醫院藥學院生藥學科陳隨清教授鑒定為卷柏科卷柏屬卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.) Sping.的全草。阿曼托雙黃酮為本實驗室自制，純度達到99%以上，水為超純水，乙醇等試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1供試品溶液及對照品溶液的制備

2.1.1 供試品溶液精密稱取卷柏藥材（過3號篩）粉末約4.00 g，置100 ml圓底燒瓶中，加95％乙醇40 ml，85 ℃回流2 次，2 h/次，提取液濃縮，真空干燥。精密稱取干燥恒重的提取物約3.00 mg，置100 ml容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液精密稱取干燥恒重的阿曼托雙黃酮2.00 mg，置25 ml容量瓶中，加95%乙醇超聲溶解，定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2測定波長的選擇取對照品溶液及供試品溶液，在190～800 nm波長范圍內測定吸收光譜。結果見圖1～2。

圖1 對照品阿曼托雙黃酮溶液吸收光譜圖（略）

圖2 供試品溶液吸收光譜圖（略） 對照品阿曼托雙黃酮溶液和供試品溶液在270 nm和337 nm處均有較大吸收。由于270 nm靠近溶劑末端吸收，容易對樣品測定造成干擾，故選337 nm為測定波長。

2.3 線性關系的考察精密取配置好的對照品溶液0，1，2，3，4，5，6 ml置25 ml容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，搖勻，在337 nm處測定其吸收度(Y)值，并以吸收度(Y)對濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程Y = 52.147 X + 0.028，r=0.999 9 (n=7)。結果表明，對照品在1.92～11.52 μg·ml-1范圍內線性關系良好。

2.4精密度實驗精密吸取對照品溶液6份，每份0.5 ml，分別置25 ml容量瓶中，95%乙醇定容至刻度，于337 nm處測定吸收度，由標準曲線按外標法計算供試品溶液中總黃酮含量，求得RSD為0.88％，顯示精密度良好。

2.5重復性實驗精密稱取同一樣品（產地：河南）適量，按“2.1”項下方法制備供試品溶液6份，于337 nm處測定吸收度。由標準曲線按外標法計算供試品溶液中總黃酮含量，求得RSD為0.70％，表明本測定方法的重復性良好。

2.6穩定性實驗取同一樣品(產地：河南) 適量，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，室溫下放置0，2，4，6，8，12，24，48 h測定吸收度，計算總黃酮含量，結果RSD為0.21％，說明供試品溶液在48 h內穩定。

2.7回收率實驗 照“2.1”方法制備供試品(產地：河南)乙醇提取物，精密稱取已知含量的卷柏乙醇提取物6份，每份約100.00 mg，分別精密加入對照品溶液適量，按“2.1”項下供試品溶液的制備方法配制回收率供試品溶液，于337 nm處測定吸收度，由標準曲線按外標法計算總黃酮含量，計算回收率。結果見表1。

表1 回收率考察（略）

2.8樣品測定分別精密稱取10批不同產地卷柏藥材粉末各4.0 g，按“2.1”方法制備供試品溶液，于337 nm處測定吸收度，由標準曲線按外標法計算總黃酮平均含量達1.52%。結果見表2。

表2 不同產地樣品中總黃酮含量測定結果（略）

3 討論 在制備樣品溶液時，比較水煮、超聲、回流等不同提取方法，發現回流提取得到的阿曼托雙黃酮的含量較高，故采用回流提取的方法對樣品進行處理。 在實驗過程中參照滿山紅中總黃酮含量測定方法［1］，以AlCl3為顯色劑，利用可見分光光度法測定卷柏總黃酮的含量，結果表明所選波長及其顯色方法很不穩定，誤差較大；進而參照半枝蓮和淫羊藿總黃酮含量測定的紫外比色法［1］，以阿曼托雙黃酮為對照品，根據黃酮類成分在337 nm下具有紫外吸收的特點，采用紫外分光光度法在337 nm下測定卷柏總黃酮的含量。本研究方法操作簡便，穩定性好，可用于卷柏總黃酮的含量測定。 測定了10批不同產地卷柏藥材中總黃酮的含量，結果平均含量為1.52%，最低為云南產含量只有0.87%，最高為山東產含量為2.21%，不同產地卷柏藥材中阿曼托雙黃酮的含量有差異，說明卷柏中總黃酮的含量受地質、環境、氣候的影響，這為環境因子與藥材含量之間的相關性研究提供了良好的基礎。