作者：張洪娟，張妍妍 隋軍，徐鵬

【摘要】 目的建立獨角蓮中肉桂酸的高效液相含量測定方法；比較不同產地獨角蓮中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色譜法。色譜柱為迪馬-Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇∶0.1%磷酸=49∶51為流動相；流速為1ml/min；檢測波長為280nm。結果肉桂酸在0.2～1 μg范圍內線性關系良好，r=0.999 5，平均回收率為99.58%，RSD為0.95%。結論不同產地獨角蓮肉桂酸的含量范圍為5.247 0～43.677 6 μg/g，差異較大。該方法測定準確，重復性好，可作為獨角蓮藥材的質量控制方法。

【關鍵詞】 獨角蓮 肉桂酸 高效液相色譜法

獨角蓮為天南星科梨頭尖屬植物獨角蓮Typhonium giganteum Engl.的塊莖，具有祛風痰、定驚搐、解毒散結止痛的功能。臨床應用于治療腦血管病、面神經麻木、頸淋巴結核、慢性支氣管炎等［1］，此外還用于美容祛斑方面。近年來有報道獨角蓮對瘤細胞具有細胞毒作用。本文以肉桂酸為考察指標，采用高效液相色譜法測定獨角蓮中肉桂酸含量，可有效控制獨角蓮藥材質量。

1儀器和試藥

1.1 儀器島津LC-10AS泵，島津SPD-10A檢測器，島津UV-160A紫外分光光度儀，昆山KQ-250B型超聲儀，Sartorius BP211D型電子天平。

1.2 藥品肉桂酸對照品，購于中國藥品生物制品檢定所；獨角蓮藥材（均為鮮品，切片后自然干燥至水分符合規定），購于各產區，經黑龍江省藥品檢驗所初東君主任藥師鑒定符合《中國藥典》2005版規定標準［2］。

1.3 試劑甲醇為色譜純（迪馬公司）；磷酸為色譜純，天津市科密歐化學試劑開發中心；水為超純水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1 色譜條件［3］色譜柱為迪馬-Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇∶0.1%磷酸=49∶51；流速1 ml/min；檢測波長280 nm；柱溫為室溫。按上述色譜條件，理論塔板數按肉桂酸峰計算應不低于2 500。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取肉桂酸對照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成濃度為0.03 mg/ml的肉桂酸對照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制與測定 取獨角蓮藥材粉末（過3號篩）2 g，精密稱定，加5%鹽酸溶液1 ml攪拌均勻，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶液20 ml，室溫下浸泡30 min，濾過，精密吸取續濾液10 ml，揮干，殘渣用甲醇溶解并定容至5 ml，即得供試品溶液。

2.4 檢測波長的測定取肉桂酸對照品溶液，在200～400 nm波長進行光譜掃描，結果表明，肉桂酸在280 nm處有最大吸收。確立肉桂酸檢測波長為280 nm。

2.5 供試品提取條件的確定

2.5.1 溶劑的選擇根據肉桂酸溶解度擬選擇甲醇、50%甲醇、三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙醚以及三氯甲烷-甲醇不同比例混合溶劑為提取溶劑。實驗方法：取獨角蓮藥材粉末（過3號篩）2 g，9份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml，攪拌均勻。分別加入不同溶劑20 ml，于室溫下浸泡30 min，濾過，精密吸取續濾液10 ml，揮干，殘渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作為供試品溶液。分別注入色譜儀，記錄峰面積，計算含量（見表1）。結果顯示，以三氯甲烷-甲醇（2∶1）為提取溶劑時，提取率最高，且無雜質干擾，故選擇氯仿-甲醇（2∶1）作為提取溶劑。

圖1 肉桂酸對照品HPLC圖（略）

圖2 獨角蓮藥材HPLC圖（略）

2.5.2 提取方法篩選取獨角蓮藥材粉末（過3號篩）2 g，3份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml，攪拌均勻，加入氯仿-甲醇（2∶1）20 ml。分別采取超聲處理30 min、室溫浸泡30 min和加熱回流30 min 3種方法，濾過，精密吸取續濾液10ml，揮干，殘渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作為供試品溶液。分別注入色譜儀，記錄峰面積（見表2）。結果顯示，室溫浸泡30 min，得肉桂酸含量最高，重復性較好，且方法簡單易操作。

表1 溶劑的選擇結果（略）

表2 提取方法篩選結果（略）

2.5.3 提取時間的考察取獨角蓮藥材粉末（過3號篩）2 g，5份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml，攪拌均勻，精密加入三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶劑20 ml，室溫下分別浸泡10，20，30，45，60 min，濾過，精密吸取續濾液10 ml，揮干，殘渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作為供試品溶液。分別注入色譜儀，記錄峰面積，計算含量（見表3）。結果顯示，提取時間為30，45，60 min時，肉桂酸含量最高，且無明顯差異，故選擇提取時間為30 min最佳。

表3 提取時間的考察結果（略）

2.6 線性關系考察精密量取肉桂酸對照品適量，加甲醇制成濃度為1 mg/ml的對照品溶液，搖勻，再精密吸取1 ml置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀釋至10 ml，再分別注入高效液相色譜儀各10 μl，按上述色譜條件測定其峰面積積分值，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為Y=4 860.9X + 31 936，r=0.999 5，線性范圍0.2～1μg，峰面積RSD=1.20％。

2.7 精密度實驗精密吸取同一份供試品溶液10 μl，重復進樣6次，測定供試品中肉桂酸峰面積積分值。結果見表4。

表4 精密度實驗結果（略）

2.8 重復性實驗精密稱取同一批獨角蓮藥材粉末（過3號篩）2 g，6份，分別制備供試品溶液。測定肉桂酸含量，結果見表5。

表5 重復性實驗結果（略）

2.9 回收率實驗取已知肉桂酸含量的獨角蓮藥材粉末（過3號篩）1 g，6份，精密稱定，分別加入6 μg/ml肉桂酸對照品1 ml，按照“2.3”項供試品溶液的制備方法操作。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl注入色譜儀。測得其峰面積，并計算回收率（見表6）。結果表明，平均回收率為99.58%，RSD為0.95%。

表6 回收率實驗結果（略）

2.10 樣品的含量測定（7個不同產地）取各產地獨角蓮藥材粉末（過3號篩）2 g，精密稱定，置于具塞瓶中，加5%鹽酸溶液1 ml攪拌均勻，加三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶劑20 ml，室溫下浸泡30 min，濾過，精密吸取續濾液10 ml，揮干，殘渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作為供試品溶液。測定，計算肉桂酸含量。結果見表7。

表7 樣品含量測定結果（略）

“-”：未檢出

3討論 在選用三氯甲烷-甲醇（2∶1）為提取溶劑時，未經過酸化處理時，峰面積較小。經過酸化處理后，提取液直接進樣，雖然峰面積增大，但峰形呈“饅頭峰”，保留時間提前，且有雜質峰。而以甲醇為提取溶劑時，雖然峰面積相對較小，但峰形較好，分離度高，且雜質峰少。所以在選擇方法時，考慮應先酸化處理藥粉，用三氯甲烷-甲醇（2∶1）溶劑提取，將提取液揮干，用甲醇溶解后進行測定。根據肉桂酸受熱時脫羧分解的性質，研究中考察了浸泡、超聲、加熱回流3種處理方法。結果顯示，浸泡處理得到的供試品溶液中肉桂酸含量較高，經過如此處理發現，不僅提取率提高，而且分離度很好，雜質峰較少。 實驗中選擇全國具有地域代表性的7個產地獨角蓮藥材，測得肉桂酸的含量范圍在5.247 0～43.677 6 μg/g之間。由此可知，肉桂酸在不同產地獨角蓮中含量差異極大，甚至個別產地藥材中未檢出，可能由于地域、采收季節、種植、加工過程等原因，導致了肉桂酸含量差異。本實驗通過對獨角蓮中肉桂酸含量測定方法的研究，建立了測定準確、重復性好的方法。本法可作為獨角蓮及其制劑質量評價和質量控制方法。