【摘要】 目的分析測定秦巴山區產細辛Aristolochia sieboldii Miq.和漢中防己A. heterophylla Hemsl.兩種藥材中馬兜鈴酸A的含量。方法色譜柱：Agilent ODS (5 μm， 4.6 mm×250 mm);流動相：甲醇-乙腈-1%冰乙酸（47∶17∶36）;流速1.0 ml/min；柱溫∶室溫；檢測波長315 nm。結果細辛中馬兜鈴酸A的平均含量為74.1 μg/g，漢中防己中馬兜鈴酸A的平均含量為2.14 mg/g。結論漢中防己中的馬兜鈴酸A含量是細辛中馬兜鈴酸A含量的30倍左右。

【關鍵詞】 細辛 漢中防己 馬兜鈴酸A 高效液相色譜法

細辛為馬兜鈴科植物北細辛Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var. mandshuricum（Maxim.）Kitag.，華細辛A.sieboldii Miq.的干燥全草，主要分布于遼寧、吉林、黑龍江、陜西、山東等省。臨床上用于祛風散寒，通竅止痛，溫肺化飲［1］ 。漢中防己為馬兜鈴科馬兜鈴屬異葉馬兜鈴 Aristolochia heterophylla Hemsl.的干燥根，生于山坡灌叢中，主產于陜西。原植物為纏繞藤本，高2～3 m，根圓柱形，長8～15 cm，直徑2～5 cm，有香氣，外皮黃棕色或灰褐色。性寒，味苦，能祛風，利濕，鎮痛，用于水腫、小便不利、風濕痹痛等癥。 近年來，馬兜鈴科植物體含有的馬兜鈴酸引起腎臟損害的臨床報道和毒理研究受到廣泛重視，許多研究報告對一些常用的含馬兜鈴酸藥材進行了分析 ［2～7］ ，為這些藥材的臨床使用提供科學依據。由于植物體內的化學成分含量與生長環境有密切的關系，不同產地的同一種藥材化學成分存在一定的差異，在現有的報道中，不同產地的細辛所含馬兜鈴酸A的量差異也較大［8～15］ 。秦巴山區有豐富的藥用植物資源，但含馬兜鈴酸藥材的分析研究還較少。本文選用產于秦巴山區的兩種含馬兜鈴酸的常用藥材細辛和漢中防己，分析其藥用部位馬兜鈴酸的含量，為藥用資源的開發利用以及常用藥材的安全使用提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

紫外分光光度計（TU-1221），高效液相色譜儀（Agilent 1200），微型植物試樣粉碎機（FZ102），電子天平，索氏提取儀，三用電熱恒溫水箱。

1.2 材料

本實驗所用實驗材料華細辛（原植物為華細辛A.sieboldii Miq.全草）和漢中防己（原植物為異葉馬兜鈴A. heterophylla Hemsl.干燥根）產自陜西漢中，均由陜西省漢中市藥品檢驗所提供。

1.3 試劑

馬兜鈴酸A對照品購自中國藥品生物制品鑒定所（批號：110746-200406）；乙腈為色譜純，甲醇，分析純，西安化學試劑廠；乙醚，分析純，天津市化學試劑六廠；水為純化水；3.6%硫酸溶液；0.5%氫氧化鈉溶液。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

高效液相色譜儀（Agilent 1200）；色譜柱：Agilent ODS（5 μm，4.6 mm×250 mm，Agilent）；流動相：甲醇-乙腈-1%冰乙酸（47∶17∶36）；流速1.0 ml/min；柱溫：室溫；檢測波長315 nm。進樣量：20 μl，保留時間：12 min。

2.2 實驗材料準備

用微型植物試樣粉碎機分別粉碎細辛和漢中防己兩種藥材，按照《中國藥典》操作，藥材粉末過40目篩，盛于潔凈干燥的廣口瓶中備用。

2.3 對照品溶液的制備

用電子天平精密稱取馬兜鈴酸A標準品7.5 mg，用甲醇定容至 25 ml的容量瓶中（C=0.3 mg/ml）。搖勻，再精密吸取0.5 ml置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，使其成為15 μg/ml的溶液，放于4℃冰箱儲存備用。

2.4 供試品溶液的制備

用電子天平精密稱取漢中防己藥材粉末1 g，置于150 ml索氏提取儀中，加入適量的甲醇，加熱回流5h。將提取液回收至干，用15 ml 0.5%NaOH溶液，使其完全溶解，轉至分液漏斗中，調pH=10，用乙醚萃取兩次，15 ml/次。萃取后的堿液，用3.6%的硫酸溶液調pH=2，再用乙醚萃取4次，15 ml/次，合并萃取液，水浴蒸干，用甲醇定容于150 ml容量瓶中備用。 用電子天平精密取細辛藥材粉末5 g，置于150 ml索氏提取儀中，用上述方法進行提取，純化后用甲醇定容至50 ml容量瓶中備用。

2.5 檢測波長的測定

取馬兜鈴酸A標準品儲備液，在200～400 nm波長范圍內掃描，在390，315 nm處有最大吸收峰。高效液相色譜實驗結果表明，在315 nm處干擾弱，靈敏度高，因此選擇315 nm作為檢測波長。

2.6 線性關系的考察

分別吸取濃度為15 μg/ml的馬兜鈴酸A標準品溶液5，10，15，20，25 μl進入高效液相色譜儀中進行分析。以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得標準曲線回歸方程為Y=28.804X-1.12，相關系數r=0.999 958，表明馬兜鈴酸A 在0.075～0.375 μg范圍內進樣量和峰面積值呈現良好的線性關系。見圖1。

2.7 精密度實驗

精密吸取濃度為15 μg/ml的馬兜鈴酸A標準品儲備液20 μl，注入高效液相色譜儀中分析。連續進樣5次，計算峰面積的RSD值為0.6%。

2.8 穩定性實驗

取細辛和漢中防己的均勻供試品溶液各一份，室溫放置，于0，2，4，6，8，10 h進樣20 ml測定，樣品在10 h內穩定。細辛和漢中防己供試品溶液的峰面積的RSD值分別為2.0%和0.28%。

2.9 重復性實驗

取同一批細辛和漢中防己藥材，按供試品溶液的制備方法平行制備5份供試品溶液，進樣20ml測定。計算其馬兜鈴酸A含量的RSD值分別為0.8％和3.7％。

2.10 回收率實驗

采用加樣回收率法，精密吸取質 量濃度已知的馬兜鈴酸A樣品及細辛、漢中防己供試液，將其等體積混合，然后注入高效液相色譜儀中分析，重復做5次，進行回收率測定。結果顯示，細辛的平均回收率為100.6%，RSD值為1.1％；漢中防己的平均回收率為99.6%，RSD值為1.81％。

2.11 樣品的測定

分別稱取細辛5 g和漢中防己1 g，按“2.4”方法制備供試品溶液，與對照品同樣色譜條件下測定。色譜圖見圖2～4。

2.1.2 藥材中馬兜鈴酸A的含量

經檢測實驗結果為：細辛中馬兜鈴酸A的平均含量為 74.1 μg/g，漢中防己中馬兜鈴酸A的平均含量為2.14 mg/g。結果見表1。表1 細辛和漢中防己中馬兜鈴酸A的含量（略）

在現有文獻中，不同產地細辛中馬兜鈴酸A的含量變化較大。姜旭等［7］報道其含量范圍在0～351 μg/g之間，其中華細辛平均含量為145 μg/g。在李琳等［2］的報道中，華細辛中的馬兜鈴酸A含量為0.178％。相比之下，本實驗檢測的產于秦巴山區的華細辛馬兜鈴酸A含量較低。

分析結果同時表明，產于秦巴山區的漢中防己中馬兜鈴酸A含量較高，其含量是華細辛中馬兜鈴酸A含量的30倍左右。

3 討論

3.1 實驗方法對含量測定的影響

細辛藥材中只含有微量馬兜鈴酸A，必須采用靈敏度高的方法才能檢測到。文獻中曾采用薄層色譜法，沒有檢測到馬兜鈴酸A，可能是由于靈敏度較低的緣故。為了提高靈敏度，采用吸光度較高的波長是有利的，馬兜鈴酸A在紫外區的兩個吸收峰，以390 nm為最靈敏，但是卻存在較大的干擾，本實驗兼顧靈敏度和專屬性，選用315 nm為檢測波長。

3.2 供試樣品制備法對含量測定的影響

在制備細辛和漢中防己供試樣品提取液時，由于藥材中含有木蘭堿、馬兜鈴內酰胺、青木香酸等多種雜質，會干擾實驗結果，因此，我們根據馬兜鈴酸A可溶于堿的原理，在堿液中用乙醚萃取除去雜質后，分離效果較好。堿化時堿性要達到pH=10，否則馬兜鈴酸A不能完全溶解，酸化時酸性要達到pH=2，否則馬兜鈴酸A不能完全析出，萃取不完全。

【參考文獻】 ［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：159. ［2］李琳，王智民，高惠敏 等.含馬兜鈴酸類中藥材中馬兜鈴總酸的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2006，12（2）：11. ［3］路軍章，孫艷，魏鋒.HPLC-MS用于中藥馬兜鈴中6 種馬兜鈴酸類成分的檢測［J］.解放軍藥學報，2005，21（3）：204. ［4］英錫相，袁昌魯，曲賢廣，等.11種中藥材及3種中成藥馬兜鈴酸的含量測定［J］.遼寧中醫雜志，2003，30（5）：404. ［5］張蘭桐，崔曉紅，袁志芳，等.RP－HPLC法測定中藥材及其制劑中馬兜鈴酸A的含量［J］.藥物分析雜志，2003，23（3）：215. ［6］趙輝，劉繡華.馬兜鈴屬藥用植物研究概況［J］.河南大學學報，2003，33（4）：73. ［7］姜旭，王智民，由麗雙，等.RP－HPLC測定不同產地青木香和細辛中馬兜鈴酸A的含量［J］.中國中藥雜志，2004，29（5）：408. ［8］高鈞，李偉，魏峰.高效液相色譜法測定華細辛中馬兜鈴酸A含量［J］.中國藥學雜志，2005，40（2）：1579. ［9］郝旭亮，倪艷，李先榮. HPLC測定不同產地和品種細辛藥材中馬兜鈴酸的含量［J］.中成藥，2006，28（8）：1209. ［10］何曙光，羅清，邵忙收，等.細辛中馬兜鈴酸的含量測定研究［J］.陜西中醫學院學報，2006，29（2）：60. ［11］吳艷蓉，賈凌云，高福坤，等.不同產地遼細辛中馬兜鈴酸的痕量檢測［J］.中藥研究與信息，2005，7（1）：9. ［12］吳艷蓉，王宇杰，孫啟時.遼細辛果實中馬兜鈴酸A的含量測定［J］.沈陽藥科大學學報，2007，24（5）：288. ［13］徐玫，敬永升，李景華.細辛中馬兜鈴酸含量測定［J］. 河南大學學報，2005，24（4）：31. ［14］徐玫，李景華.細辛不同部位的馬兜鈴酸及揮發油含量研究［J］.藥物研究，2007，16（10）：29. ［15］黃順旺.北細辛中不含馬兜鈴酸的薄層色譜法鑒別［J］.安徽醫藥，2003，7（4）：299.