作者：陳新菊，利家平，袁海銘，吳迪，曾憲儀

【摘要】 目的建立毛冬青藥材中Ilexgenin A的高效液相色譜-蒸發光散射檢測（HPLC-ELSD）的含量測定方法。 方法采用Lichrospher-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流動相為乙腈－0.1%醋酸溶液（60∶40），流速1 ml/min，蒸發光散射檢測器：漂移管溫度96℃，氣體流速2.1 L/min。結果Ilexgenin A在0.7～14.5μg濃度范圍內線性關系良好，r = 0.999 7（n = 6）。平均回收率為100.32 %，RSD = 1.38 % (n = 6)。結論本法操作快速、準確，可作為毛冬青藥材中IlexgeninA的質量控制方法。

【關鍵詞】 毛冬青 Ilexgenin A 高效液相色譜-蒸發夾散射檢測

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for the determination of content of Ilexgenin A in Ilex Pubescens .MethodsLichroshper-C18 (4.6 mm×250 mm，5μm) column was used in HPLC with mobile phase Acetonitrite-0.1%Acetic acid (60∶40). The flow rate was 1ml／min， an evaporative light-scattering detector was used and the parameters were set as follows: drift tube temperature was 96℃ and gas flow rate was 2.1 L/min .ResultsThe linear range of Ilexgenin A is from 0.7 ～ 14.5μg， r=0.9997（n=6）.The average recovery is 100.23%，RSD = 1.38% (n = 6).ConclusionThis method is rapid and accurate. It can be used for quality control on Ilexgenin A of Ilex Pubescens.

Key words：Ilex Pubescens ; Ilexgenin A ; HPLC-ELSD ; Determination of content 毛冬青藥材為冬青科冬青屬植物毛冬青Ilex pubescens Hook et Arm 的干燥根。功能清熱解毒，活血通脈，消腫止痛。用于治療風熱感冒、肺熱咳喘、冠心病、血栓閉塞性脈管炎。其生長在南方地區，為江西省道地中藥材的一種，含有大量皂苷活性成分物質［1，2］。在毛冬青藥材的質量標準研究中，我們首次用高效液相色譜-蒸發光散射檢測器的分析方法對其中的一個成分（Ilexgenin A）進行了含量測定［3，4］。

1 儀器和試藥

島津LC-10AD泵，Alltech 500 ELSD檢測器，Sepu3000色譜工作站；Ilexgenin A對照品（批號：050804，含量100% HPLC法）自制；毛冬青藥材：江西省各地采挖；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果 2.1 色譜條件色譜柱為Lichrospher -C18 (4.6 mm×250 mm，5μm)；流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（60∶40）；流速1ml／min；蒸發光散射檢測器飄移管溫度為96℃，氣體流速為2.1 L/min。

2.2 測定方法

2.2.1 對照品溶液的制備

取Ilexgenin A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含65μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取毛冬青藥材粉末（過4號篩），約1.5 g，精密稱定，置250 ml回流瓶中，加100 ml的乙醇，回流1 h，取下，濾過，然后用乙醇洗滌數次，濾液蒸干，殘渣用甲醇溶解到10 ml量瓶中，搖勻，即得。

2.2.3 測定法

分別精密吸取對照品溶液5 μl和10 μl及供試品溶液5～10 μl注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計算，即得。

2.3 專屬性實驗取對照品和供試品溶液按上述方法進行測定，結果在Ilexgenin A對照品相應的保留時間處有一相同的峰，周邊無其它雜質峰干擾。保留時間在8 min左右，理論板數以Ilexgenin A峰計大于8 000。結果見圖1～2。

2.4 蒸發光散射檢測器的條件考察

2.4.1 漂移管溫度的選擇在上述色譜條件下，固定漂移管的氣流量為2.1 L/min，改變漂移管溫度，用Ilexgenin A對照品溶液進樣，測定其峰面積及信噪比（S/N），選擇峰面積和信噪比兩者均為最大值時的溫度，得到最優化的漂移管溫度為96℃。

2.4.2 漂移管中氣流量的選擇在上述色譜條件下，固定漂移管的溫度為96℃，改變漂移管的氣流量，用Ilexgenin A對照品溶液進樣，測定其峰面積及信噪比（S/N），選擇峰面積和信噪比兩者均為最大值時的氣流量，得到最優化的漂移管氣流量為2.1 L/min。

2.5 標準曲線的制備

取Ilexgenin A 對照品約15 mg置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，從中吸取0.5，1，2.5，5，7.5 和10μl注入色譜儀中進行測定，結果在0.7 ～14.5 μg的范圍內，濃度與峰面積的對數值成一直線，回歸方程為lgA = 1.481 1 lgC+ 6.174 7 ， 相關系數 r = 0.999 7（ n = 6 ）。

2.6 溶液的穩定性實驗取樣品溶液一份，在不同的時間點測定，結果在24 h內穩定性好。

2.7 重復性實驗取同一批毛冬青藥材，分別制配6份相同濃度的供試品溶液進行測定，計算平均含量為0.217%，RSD為1.23%。2.8 回收率實驗分別稱取同一批已知含量的毛冬青藥材（含量：0.217%）適量，加入一定量的Ilexgenin A對照品，共6份，制成供試品溶液，進行測定，計算平均回收率為100.32%，RSD為1.38%。結果見表1。表1 回收率實驗結果（略）

2.9 藥材的測定對從不同地方、不同時間采集的毛冬青藥材，經干燥粉碎，過4號篩，分別取1.5 g，精密稱定，按上述方法操作，測定。結果見表2。表2 毛冬青藥材中Ilexgenin A 的測定結果（略）

3 討論

毛冬青藥材中的大部分皂苷類物質沒有紫外吸收，我們采用蒸發光散射檢測器對其中的皂苷類物質進行檢測，得到滿意的結果。 本實驗采用不同濃度的乙醇進行不同時間的超聲和回流提取試驗，結果表明，毛冬青藥材采用95%乙醇100ml，回流1 h，其中的Ilexgenin A 提取比較完全，含量最高。

在實驗過程中，使用過甲醇-水，乙腈-水和乙腈-0.1%醋酸水溶液作流動相，乙腈-水作流動相較好，在水中加少許冰醋酸，對峰形能得到更好的改善，因此，本法選用了乙腈-0.1%醋酸溶液（60∶40）作為流動相。

本法中濃度和峰面積的對數值曲線為一良好的直線，此直線未過原點，因此在本方法中應采用外標兩點對數方程來進行計算。 本方法經實驗證明，準確性高，重復性好，簡便快速，可對毛冬青藥材的質量進行有效的控制。