作者：霍務貞，吳燕紅，袁旭江，李苑新，朱盛山

【摘要】 目的通過對多個產地不同批次麻黃藥材質量進行分析比較，確定符合課題需要的麻黃藥材，保證制劑療效穩定和質量可控，并為該新藥質量控制提供檢測方法。方法 采用薄層法對藥材進行初步篩選，用液相法對互為差向異構體的兩成分麻黃堿、偽麻黃堿進行含量測定。結果不同產地不同批次麻黃藥材中麻黃堿及偽麻黃堿含量差異較大，麻黃堿與偽麻黃堿含量不是成正比關系。結論根據中醫辨證論治理論使用麻黃藥材的方劑，應根據不同需求選用不同產地的麻黃。該實驗經過系統的方法學考察，所建立的含量測定方法具有操作簡便、穩定、專屬、可重復的特點，可用于麻黃藥材及含麻黃復方制劑的質量控制。

【關鍵詞】 麻黃 麻黃堿 偽麻黃堿 質量控制

喘平復方制劑是廣東藥學院中藥開發研究所自主研發的新藥，主治支氣管哮喘、喘息性支氣管炎。方中主藥麻黃，具有發散風寒、宣降肺氣及平喘止咳作用。據現代藥理研究，麻黃主要有效成分為麻黃堿，具有興奮呼吸中樞及舒張支氣管平滑肌、解除支氣管痙攣的作用［1］。在研究中發現，麻黃藥材按照《中國藥典》2005年版Ⅰ部麻黃含量測定項下檢測合格后使用，但是不同產地麻黃對藥效影響較大。大量文獻報道表明麻黃草中含有兩種主要生物堿——麻黃堿和偽麻黃堿，它們化學結構互為差向異構體，但藥理作用有所不同，作用強度也有差異［2］。為了保證喘平復方制劑療效穩定，質量可控，本課題組用薄層色譜法和高效液相色譜法對不同產地麻黃藥材的質量進行了系統的研究，篩選符合喘平復方制劑功效要求的麻黃藥材。

1 儀器與試藥

麻黃藥材從廣州市藥材公司、清平市場、藥店等采購，經廣東藥學院李書淵教授鑒定為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf. 的草質莖。鹽酸麻黃堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：171241200404），鹽酸偽麻黃堿購自國家麻醉品實驗室（批號：1237200103）。甲醇為色譜純試劑，水為三蒸水，其它試劑均為分析純。薄層色譜用硅膠G（浙江臺州路橋四甲生化塑料廠），高效液相色譜儀（美國Agilent 1100 型組合式全自動取樣），色譜柱phenomenex C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），電子分析天平(Sartorius BP211D)。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液制備取鹽酸麻黃堿對照品、鹽酸偽麻黃堿對照品，精密稱定，分別加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品1，2溶液。 2.2 供試品溶液制備取麻黃藥材，粉碎，過40目，取粉末1 g，加濃氨水數滴，再加三氯甲烷10 ml，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 ml充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.3 薄層層析取對照品溶液和供試品溶液各5 μl，點于同一硅膠G薄層板(10 cm ×10 cm)上，以醋酸乙酯甲醇正丁醇濃氨試液（10∶1∶0.5∶0.5）為展開劑，展開至約9 cm 時，取出，晾干，噴茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點清晰。于可見光下檢視。色譜圖見圖1。 《中國藥典》2005版Ⅰ部麻黃項下的展開系統是：三氯甲烷甲醇濃氨試液（20∶5∶0.5）。結果見圖2。該展開條件麻黃堿和偽麻黃堿的Rf值非常接近，溫度和濕度對其影響較大，有些條件下麻黃堿和偽麻黃堿Rf值有重疊，不利于分析。本課題經過反復摸索，得到以醋酸乙酯甲醇丙酮濃氨試液（10∶1∶0.5∶0.5）展開條件下展開，兩成分完全分開，且不易受溫度影響。結果見圖1。

2.4 含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：phenomenex C8柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：甲醇 0.01 mol·l-1磷酸二氫鉀溶液（磷酸調pH2.5）（5∶95），檢測波長：210 nm，流速：1.0 ml·min-1。在上述色譜條件下，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿可達基線分離，分離度大于1.5，且無其它峰干擾。結果見圖3。

2.4.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品0.025 g、0.025 g，置100 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過（0.22 μm），即得每毫升分別含0.25 mg，0.25 mg的對照品混合儲備液。

2.4.3 供試品溶液的制備

取麻黃細粉約0.2 g，精密稱定，用13，10倍量0.05%鹽酸水溶液提取兩次，第1次1.5 h，第2次1 h，合并煎液，濾過，濾液取1 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置30 min后過濾，取續濾液，即得。

2.4.4 線性范圍的考察

精密吸取上述混合對照品儲備液0.5，1，2，3，4，5 μl進樣，測定其峰面積積分值，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，鹽酸麻黃堿回歸方程為：A＝2 203.900 87C+39.962 83，r＝0.999 97；鹽酸偽麻黃堿回歸方程為：A＝2 019.135 67C+35.564 85，r＝0.999 97。結果表明鹽酸麻黃堿在0.125 5～1.255 μg范圍內、鹽酸偽麻黃堿在0.125～1.25 μg范圍內具有良好的線性關系。

2.4.5 精密度實驗

精密吸取供試品溶液，重復進樣6次，按“2.4.1”項色譜條件，測定其峰面積積分值，RSD均小于2％，精密度合格。

2.4.6 穩定性實驗

精密吸取混合對照品溶液，按上述色譜條件，于0，1，2，4，6，8，10 h時進樣，測定峰面積積分值，麻黃堿和偽麻黃堿色譜峰峰面積RSD均小于2％，結果10 h內測定結果穩定。

2.4.7 重復性實驗 按“2.4”項含量測定方法，取同一批樣品平行制備6份，按上述色譜條件，測定其峰面積積分值，RSD均小于3％。表明本方法重復性較好。

2.4.8 回收率實驗

精密稱取已知含量的同一批樣品（麻黃堿含量為0.8039%，偽麻黃堿含量為0.6485%），分別精密加入麻黃堿對照品溶液（0.212 mg·ml-1），偽麻黃堿對照品溶液（0.193 mg·ml-1）各1 ml，按“2.4.3”項下操作，最后定容為10 ml，平行操作6份，按上述色譜條件測定峰面積，計算回收率。麻黃堿、偽麻黃堿回收率均在95.1%～100.5%，RSD分別為0.65％，1.8％，顯示該方法準確穩定。

2.4.9 不同產地、批次麻黃藥材含量測定

取各不同產地，不同批次麻黃藥材，按“2.4.3”項下操作，每批樣品平行操作3份，按上述色譜條件測定峰面積，計算含量。結果見表1～2。表1 不同產地麻黃藥材含量測定（略）表2 不同批次麻黃藥材含量測定（略）

從表1～2 可見，不同產地不同批次的麻黃藥材，除兩主要生物堿總量相差較大外，兩個主要成分麻黃堿含量和偽麻黃堿含量比例相差較大。6組麻黃藥材中，有4組符合《中國藥典》規定的麻黃堿限量要求，但是偽麻黃堿的含量差異較大：第1組、第5組偽麻黃堿含量約為麻黃堿含量的50%，第2、第3組偽麻黃堿含量竟然達到麻黃堿的兩倍，第4組麻黃堿和偽麻黃堿含量相當。同一產地不同批次藥材，質量相對比較穩定。

3 討論

現代藥理對麻黃堿和偽麻黃堿的研究表明，麻黃堿在體內大部分是與腎上腺素能受體結合而產生直接作用，提高機體應激反應，同時激動β受體，舒張氣管平滑肌，故有中醫理論的發汗解表，宣肺平喘的功效。而偽麻黃堿主要通過刺激交感神經末梢釋放去甲腎上腺素，以間接作用方式起擬交感神經作用，突出的特點是選擇性地收縮呼吸道血管，并可選擇性收縮鼻黏膜血管，目前主要用于感冒初期的打噴嚏流鼻涕等癥狀［2，3］。所以不同的使用目的對麻黃藥材的要求不一樣，如根據中醫辨證論治使用麻黃的方劑麻黃湯、麻杏石甘湯等，應采用麻黃堿含量高的麻黃藥材，以達到方劑中采用麻黃堿發汗解表，宣肺平喘的功效［4，5］；而像越婢湯，小青龍湯，防風通圣散等方劑具有疏散水濕、消炎止痛之功效［6～8］，則應采用偽麻黃堿含量高的藥材。而本課題研究的喘平復方制劑，采用的是麻黃堿宣肺平喘功效。所以在麻黃藥材篩選中，一定要保證麻黃堿的含量達到要求。本文的意義在于對中醫藥理論指導辨證用藥理論的進一步發展，不同癥狀不僅要選擇不同藥物而且對同一種藥物還要對其不同藥理活性成分進行選擇。 本課題對麻黃的質量從鑒別和含量兩個方面建立了新的控制方法，定性研究方面通過對展開系統的篩選，使麻黃堿和偽麻黃堿得到很好的分離，溫度、濕度對其影響不大，可以快捷有效的對不同產地麻黃藥材做出評價，定量研究方面建立了HPLC方法同時對麻黃堿、偽麻黃堿進行含量分析，結果可靠，方法簡便，回收率及靈敏度高。質量控制的研究為本課題麻黃藥材的質量穩定提供了保證。

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