作者：楊玉琴 ，張麗艷，李健，周萍

【摘要】 目的采用薄層色譜掃描法測定不同產地天花粉中瓜氨酸的含量，建立瓜氨酸的含量測定方法。方法展開劑:正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(9.5∶2∶3.5∶3)；顯色劑：1%茚三酮試液;檢測波長:λS=510 nm，λR=700 nm。結果瓜氨酸在0.200 8～2.008 μg時，與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999）；平均回收率為99.12% ，RSD =1.12%。結論該方法操作簡便，快速，準確，可用于瓜氨酸的含量測定。

【關鍵詞】 天花粉 瓜氨酸 薄層色譜掃描法

Abstract：ObjectiveTo develop an TLC method for the determination of trichosanthin Citrullin content from different habitats.MethodsButanol-ethanol-acetic acid-H2O (9.5∶2∶3.5∶3) was used as the mobile phase， 1% ninhydrin test solution was used as reagent， the detection wavelength was λS=510 nm， λ R = 700 nm .ResultsThere was a good linear relationship within the range of 0.2008～2.008 μg. The average recovery was 99.12%， RSD=1.12%.ConclusionThe proposed method is simple，rapid and accurate.It can be used to determine the contents of Citrullin in Radix Trichosanthis..

Key words：Radix Trichosanthis.； Citrulline； TLC 天花粉為葫蘆科植物栝樓Trichosanthes KiriLowii Maxim.或雙邊栝樓Trichosanthes rosthornii Harms的干燥根［1］，性微寒，味甘，微苦，歸肺、胃經。有清熱生津，消腫排膿，抗癌之功效。用于熱病煩渴，肺熱燥咳，內熱消渴等病證。本實驗采用薄層掃描法［2］對不同產地天花粉進行測定，建立瓜氨酸的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CS-9301雙波長薄層掃描儀(日本島津)；REPROSTAR3薄層色譜數碼相機系統(瑞士卡瑪)；AE240電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；超聲波清洗器（北京醫療設備廠）。

1.2 試藥

瓜氨酸對照品（ 中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號0875-200205）；硅膠G機制板（山東青島海洋化工廠）；正丁醇、無水乙醇、冰醋酸等試劑均為分析純。

1.3 藥材天花粉藥材為市售（購自重慶、貴州、廣西、廣東等地）及采集的野生樣品（采自貴州省惠水、龍里、貴陽、清鎮、高坡等地），經我院付志明老師鑒定為雙邊栝樓Trichosanthes rosthornii Harms的干燥根。

2 方法與結果

2.1 實驗條件

2.1.1 掃描條件

掃描方式：雙波長反射式鋸齒掃描；掃描波長：λS=510 nm，λR=700 nm；狹縫寬度：0．4 mm×0．4 mm；線性參數：Sx=3。按掃描條件下操作，其薄層掃描圖見圖1。

2.1.2 色譜條件

展開劑：正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水(9.5∶2∶3.5∶3)；顯色劑：1%茚三酮試液。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取瓜氨酸對照品適量于50 ml容量瓶中，加50%乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，制成0．502 mg/ml的溶液。精密吸取上述溶液2 ml于5 ml容量瓶中，加50%乙醇溶液稀釋至刻度，制成0.200 8 mg/ml，即得對照品溶液，備用。 2.3 供試品溶液的制備

精密稱取天花粉藥材粉末（過60目篩）約0.12 g，于25 ml三角燒瓶中，精密加入50%乙醇溶液10 ml，稱定重量；超聲提取40 min，放冷，用50%乙醇補足減失重量，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 標準曲線的制備

分別精密吸取對照品溶液1，2，4，6，8，10 μl分別點于同一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件項下展開，顯色掃描。以峰面積積分值為縱坐標，點樣量為橫坐標，繪制工作曲線。計算回歸方程Y=3 581.8X-200.95，r= 0.996；瓜氨酸在0.200 8～ 2.008 μg范圍內呈良好線性關系。

2.5 精密度實驗精密吸取同一供試品溶液2 μl，點于一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件展開，測定5次，結果表明，精密度良好，RSD=0.26%。

2.6 穩定性實驗精密吸取同一供試液2 μl，點于一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件展開，顯色掃描。每隔0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 h測定1次，結果表明在3.0 h內穩定。

2.7 重復性實驗

2.7.1 同板重復性分別精密稱取同一樣品5份，照“2.3”供試品溶液的制備項下制備供試液；分別精密吸取每份供試液各2 μl，點于同一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件展開，顯色掃描，結果RSD=0.23% 。 2.7.2 異板重復性 分別吸取“2.7.1”同板重復性項下的供試液各2 μl，點于5塊不同的硅膠G薄層板上，按上述色譜條件展開，顯色掃描。結果RSD=2.23% 。

2.8 加樣回收率實驗精密稱取已知瓜氨酸含量的同一樣品5份，每份約0.060 g。分別精密加入對照品液(0.200 8 mg/ml)5 ml，再進入50%乙醇溶液5 ml，照“供試品溶液”項下制備。分別吸取供試液2 μl點于同一硅膠G薄層板上，按“標準曲線”項下操作。結果見表1。表1 加樣回收率實驗（略）

2．9 樣品含量測定

精密稱取各個產地樣品約0.12 g，分別照“2.3”項下制備樣品溶液。分別精密吸取樣品溶液及對照品溶液點于同一硅膠G薄層板上，展開，顯色；在掃描條件下測定，用外標兩點法計算。結果見表2。表2 天花粉樣品含量測定（略）

3 討論 曾用展開劑為正丁醇∶無水乙醇∶冰醋酸∶水（8∶2∶2∶3）［1］，分離效果不好，后展開劑改為正丁醇：無水乙醇：冰醋酸：水（9.5∶2∶3.5∶3），各斑點完全分開，分離效果較好。 瓜氨酸無紫外吸收，用高效液相色譜法測定一般均需衍生化，用薄層掃描法測定瓜氨酸的含量具有操作簡便、快速、結果準確的優點。 本實驗對15個不同產地的天花粉藥材進行瓜氨酸含量測定，在含量上有一定差異，但貴州天花粉中瓜氨酸含量較高，且生長周期越長瓜氨酸含量就越高。

【參考文獻】 ［1］國家藥典委員會.中國藥典Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005:38. ［2］岳瑞，歧琳，傅強.雙波長薄層掃描法測定天花粉中瓜氨酸的含量［J］.西北藥學雜志，2002， 17（3）：107.