作者：肖小華，朱令元，徐麗瑛，丁琦，郭晟，方鋁

【摘要】 目的觀察小鼠和大鼠分別灌胃給予定喘顆粒的急性毒性作用和長期毒性作用。方法采用Bliss法測定小鼠灌胃定喘顆粒的LD50以及大鼠連續(xù)灌胃定喘顆粒60 d，觀察給藥60 d的生長、發(fā)育，血液學(xué)，血液生化學(xué)，組織病理變化及停藥21 d時上述指標的變化。結(jié)果昆明種小鼠灌胃定喘顆粒的LD50為171.09 g/kg。定喘顆粒大鼠給藥60 d的毒性試驗，劑量分別為72.6，36.3，18.2 g/kg（指含生藥量，下同）（相當于臨床50 kg人用量的52.6，26.3和13.2倍），給藥期間各組大鼠毛色、活動、二便均無異常變化，但給藥組大鼠攝食、飲水、體重以及部分血液學(xué)、血液生化學(xué)指標和臟器系數(shù)有異常變化，停藥后，上述異常變化指標均已恢復(fù)正常。給藥期和恢復(fù)期重要臟器病理組織檢查均未發(fā)現(xiàn)明顯異常變化。結(jié)論定喘顆粒小鼠灌胃的LD50為171.09 g/kg；長期毒性研究表明，長期大劑量灌胃給予定喘顆粒對大鼠有一定毒性，但停藥后均已恢復(fù)。

【關(guān)鍵詞】 定喘顆粒 急性毒性實驗 長期毒性實驗

Abstract:Objective To observe the acute toxicity of Dingchuan granule (DCG) in mice and the long-period toxicity in rats，respectively.MethodsLD50 of DCG were tested in mice by Bliss methods.Rats were administered with repeated gastric infusion of DCG for 60 days and body weight，hematological and hematobiochemical parameters，coefficient and histomorphological figure of organs were examined in 60 days and 21 days after the cessation of DCG. ResultsThe LD50 of KM mice was 171.09g/kg .In the long-period toxicity test， DCG was administered repeatedly for 60 days， the dose were 72.6，36.3，18.2 g/kg respectively(It refered to the dose of material，which amounted to 52.6，26.3，13.2 times of 50 kg human clinic use). There is no other abnormal changes about color patem，action，urine and stool，but cibation， hydroposia， body weight and index part of hematological and hematobiochemical parameters，coefficient and histomorphological figure of organs were examined during administration phase.The rats were examined in 21 days after the cessation of DCG， the abnormal changes of index was completely recovered. After administered repeatedly for 60 days and in 21 days after stopping the drug， there had no obvious abnormality for the important organ pathology examination. ConclusionThe LD50 of mice is 171.09 g/kg. DCG administration by long-period large dose has a certain effect on rats ，but the changes can completely recovery after drug withdrawal.

Key words:Dingchuan granule; Acute toxicity test; Chronic toxicity test

定喘顆粒是在明《攝生眾妙方》中定喘湯基礎(chǔ)上改變劑型的新藥，由白果、麻黃、蘇子、甘草、款冬花、杏仁、桑白皮、黃芩、半夏等中藥組成。其功能宣肺清熱、祛痰定喘，在臨床上廣泛地用于風(fēng)寒外束、痰熱內(nèi)壅、痰多氣急、咳嗽哮喘等證。本次實驗?zāi)康氖怯^察小鼠灌胃給藥的急性毒性反應(yīng)以及大鼠連續(xù)給藥60 d所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和嚴重程度，以及停藥后的發(fā)展和恢復(fù)情況，為臨床安全用藥提供依據(jù)［1，2］。

1 器材與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

Wistar大鼠，清潔級，體重100～120 g，雌雄各半，由中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供，合格證號：中科動管第99-004號。昆明種小鼠，清潔級，體重18～22 g，雌雄各半，由中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供，合格證號：中科動管第99-006號。

1.1.2 藥物

定喘顆粒 由本所制劑室提供，批號：990515。實驗前用蒸溜水配成不同濃度的溶液供灌胃使用。

1.1.3 儀器

BT-224半自動生化分析儀，意大利產(chǎn)；BT-2100血細胞分析儀，意大利產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠LD50測定

動物按體重隨機分為6組，每組10只，雌雄各半，按0.7 ml/20 g灌胃給定喘顆粒，一天內(nèi)共灌胃3次，每次間隔6 h。劑量分別為76.49，101.98，135.96，181.26，241.65，322.17 g/kg，連續(xù)觀察14 d，記錄小鼠毒性反應(yīng)和死亡情況，死亡動物進行尸檢，記錄病變情況，按Bliss法計算半數(shù)致死量（LD50）和95%可信限。

1.2.2 大鼠長期毒性實驗

取80只大鼠，雌雄各半，按體重均勻隨機分為對照組，定喘顆粒18.2，36.3 g/kg和72.6 g/kg劑量組，每組20只，雌雄各半，每天分別灌胃給藥，空白對照組給予等體積蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)60 d。在給藥期間每天觀察動物行為、毛色、二便等一般情況，每周測體重和攝食量、飲水量1次，給藥結(jié)束后每組各取雌雄各5只大鼠，測其凝血時間、血常規(guī)、血小板計數(shù)、血液生化指標（ALT，AST，ALP，BUN，CRE，TP，TCHO，GLU，ALB，TRIL），然后拉斷頸椎處死動物，進行尸檢，取其心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、睪丸、子宮、卵巢、腦，用電子天平稱其重量，并計算其臟器系數(shù)，同時取其心、肝、脾、前列腺、氣管、胃作病理切片，記錄其組織學(xué)改變情況，并攝下彩色圖片，各項測得數(shù)據(jù)分別按性別分組進行統(tǒng)計學(xué)處理，用t值法進行組間對比。 留下的動物停藥觀察21 d后，重復(fù)上述檢查。

2 結(jié)果

2.1 小鼠的急性毒性實驗

各組死亡小鼠均為灌胃24 h內(nèi)死亡，死亡前小鼠小便較黃，大便溏稀，少動，死亡后大體解剖見胃、腸道膨脹充氣外，其他臟器如心、肝、脾、肺、腎、胸腺等無異常變化，其余存活小鼠色澤、外觀、攝食、二便均正常，無異常發(fā)現(xiàn)。用Bliss法計算定喘顆粒灌胃給藥小鼠的（LD50）和95%可信限，結(jié)果為LD50是171.09 g/kg，LD5095%的可信限為143.21～204.38 g/kg。

2.2 大鼠的長期毒性實驗

2.2.1 一般情況

各組大鼠給藥期間行為、步態(tài)、毛色、糞便性狀與空白組相比，未見異常變化，停藥觀察21 d亦無改變。高劑量雄性大鼠在給藥期間攝食量比空白組減少。高劑量組雄雌大鼠飲水量與空白組比較有所增加。

2.2.2 體重情況

高劑量雄性大鼠在給藥期間體重增長明顯降低，與空白組比較，差異有非常顯著性意義（P<0.01），高劑量組雌性大鼠在給藥第4、5周體重增長與空白組比較也顯著減慢（P<0.05），其他組體重增長均正常。見表1。表1 定喘顆粒對雄性大鼠體重的影響(略)

2.2.3 血液學(xué)檢查

給藥組給藥后，進行血液學(xué)檢查，其中Hb，RBC，WBC值與對照組比較，均無顯著差異。高劑量雌性大鼠凝血時間顯著延長，高劑量雌雄性大鼠PLT數(shù)顯著減少，與空白組比較差異有顯著性差異（P<0.05）。見表2。停藥21 d后檢查，除高劑量雄性大鼠凝血時間明顯縮短，與空白組比較差異有顯著性意義（P<0.05）外，其余各給藥組凝血時間，WBC，RBC，PLT，Hb與空白組比較均無明顯差異（見表3）。表2 定喘顆粒對大鼠給藥末期血液學(xué)指標的影響(略)表3 定喘顆粒對大鼠恢復(fù)期血液學(xué)指標的影響(略)

2.2.4 血液生化學(xué)指標檢查

在給藥結(jié)束后，低劑量雄性大鼠GLU下降，低劑量雌性大鼠TCHO增加；中劑量雌性大鼠GLU值增加，高劑量組雄性大鼠ALT，AST值增加，高劑量ALT增加，與對照組比較差異有顯著性意義（P<0.05和P<0.01），其他組與空白組比較均無顯著差異（見表4）。停藥21 d后，除低、中劑量組雌雄性大鼠GLU值均下降，高劑量雄性大鼠TBIL值下降，與空白組比較差異有顯著性和非常顯著性意義（P<0.05和P<0.01），其余各組各項檢查與空白組比較均無顯著差異（見表5）。表4 定喘顆粒對大鼠給藥末期血液生化學(xué)指標的影響(略)表5 定喘顆粒對大鼠恢復(fù)期血液生化學(xué)指標的影響(略)

2.2.5 主要臟器檢查

在給藥結(jié)束后，解剖各組大鼠，肉眼檢查，除少量動物肺部有淤血現(xiàn)象外，其余各組動物均未見異常，各組臟器系數(shù)比較，高劑量組雌性大鼠腎系數(shù)，子宮系數(shù)增加，與空白組比較差異有顯著性和非常顯著性意義（P<0.01和P<0.05）。高劑量組雄性大鼠肝系數(shù)增大，與對照組差異有顯著性意義（P<0.01）（見表6）。停藥21 d后，高劑量組雌性大鼠脾、肺系數(shù)增加，中劑量雌性大鼠肺系數(shù)增加，與空白組比較差異有顯著性和非常顯著性意義（P<0.01和P<0.05），雄性大鼠與空白組比較無顯著差異（P>0.05）。見表7。表6 定喘顆粒對大鼠給藥末期臟器系數(shù)的影響(略)表7 定喘顆粒對大鼠恢復(fù)期臟器系數(shù)的影響(略)

2.2.6 重要臟器病理組織學(xué)檢查

在給藥結(jié)束后，處死大鼠，取心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、腎上腺、胸腺、甲狀腺及性腺等組織用10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟切片，HE染色觀察結(jié)果如下：實驗組（高劑量組、中劑量組和低劑量組）實質(zhì)性臟器（心、肝、腎、腦）的實質(zhì)性細胞無損傷；氣管及肺未見明顯異常，消化管道和胃未見損傷。性腺及子宮未見損傷；內(nèi)分泌腺（腎上腺、甲狀腺、胸腺）未見損傷，脾未見異常。停藥21 d后，各組大鼠組織同樣行病理組織學(xué)檢查，除少數(shù)動物肺臟有出血外，未見其它發(fā)現(xiàn)。

3 討論

3.1 小鼠的急性毒性實驗

定喘顆粒灌胃給藥小鼠的（LD50）和95%可信限，結(jié)果為LD50是171.09 g/kg，LD5095%的可信限為143.21～204.38 g/kg。

3.2 大鼠的長期毒性實驗

從大鼠的長期毒性實驗結(jié)果中分析，定喘顆粒大劑量（有相當于人日用量的52.6倍）長期給藥（60 d）對大鼠的影響主要有體重減輕、血小板數(shù)降低、凝血時間延長、ALT、AST升高，但停藥后均可恢復(fù)，其余如膽固醇、血糖值和總膽紅素的異常變化與給藥無關(guān)；病理檢查各給藥組無明顯器質(zhì)性病變，表明在相當于人用量52.6倍（72.6 g/kg）以下的劑量組，未出現(xiàn)上述明顯毒副反應(yīng)，提示該藥是安全的。