作者：劉建國韓秋菊尉繼偉

【摘要】 ［目的］ 觀察外照射（teletherapy）、局部熱療（local hyperthermia）、超激光（super lizer，SL）對荷VX2瘤兔的治療作用，及其細胞因子的改變。 ［方法］ 將健康雄性3年的新西蘭大白兔80只，分成四組，外照射組（外放組）、體外高頻熱療組（熱療組）、超激光治療組（激光組）和對照組各20只。觀察腫瘤直徑、生存期，同時檢測白細胞介素，2、6、8（IL，2、IL，6、IL，8）在VX2瘤移植前、后以及治療1、3、4周后的變化情況。［結果］ 經治療腫瘤直徑從大到小和生存期從長至短依次為激光組、對照組、熱療組、外放組；VX2瘤移植成功后細胞因子的變化為IL，2、IL，8降低，IL，6增高，治療4周后IL，2、IL，8逐漸降低，IL，6逐漸增高；IL，2、IL，6的變化程度外放組與熱療組比較有顯著性差異（P＜0.05)，激光組各細胞因子與對照組差異無顯著性（P>0.05）。［結論］ VX2種植成功后對宿主細胞免疫產生明顯的抑制作用。外照射對其療效明顯好于熱療，且較明顯地扭轉其免疫過程。超激光治療對VX2瘤無效。

【關鍵詞】 外照射高溫療法超激光VX2瘤細胞因子

Abstract: ［Purpose］ To investigate the effect of teletherapy， local hyperthermia and super lizer cytokines in VX2，bearing rabbits and the compact on cytokines. ［Methods］ Eighty white health male rabbits were pided into four groups (teletherapy group， local hyperthermia group， super lizer group and control group， 20 rabbits for each group). Tumor diameter， time of survival changes of IL，2， IL，6， IL，8 before and after VX2 carcinoma transplantation and 1， 3， 4 weeks after treatment were observed. ［Results］ The tumor diameter and time of survival after treatment in descending order were as following: super lizer group， control group， hyperthermia group and teletherapy group. The levels of IL，2 and IL，8 increased and the level of IL，6 decreased. After 4 weeks of treatment the levels of IL，2， IL，8 were getting lower and the level of IL，6 was getting higher gradually in all groups. There was significantly difference between teletherapy group and hyperthermia group in the levels of IL，2 and IL，6（P＜0.05). There was no significant difference with cytokines between super lizer group and control group.［Conclusion］The bearing of VX2 carcinoma obviously inhibited host immunity. The treatment effect of teletherapy was better than that of hyperthermia. Teletherapy can obviously improve the host immunity.Super lizer has no effect on VX2 carcinoma.

Key words: teletherapy; hyperthermia; super lizer; VX2 carcinoma; cytokine VX2瘤是Shope病毒誘發的乳頭狀瘤惡變后經兔傳代而取得的實驗性腫瘤，近似于人的實質器官原發惡性腫瘤，將其接種于兔的各個部位進行動物實驗研究模型的制作[1，2]。關于外照射、熱療及超激光對荷VX2瘤大白兔治療作用的對比性觀察在國內未見報道，現將我們的實驗情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物模型及其制作

選用動物品種為健康雄性3年的新西蘭大白兔80只，實驗動物由山西醫科大學大同醫學院動物飼養中心提供，體重5kg(5±0.35)，隨機分為外照射組（外放組）、熱療組、激光治療組（激光組）、對照組各20只。中國醫學科學院細胞中心提供VX2瘤大白兔，斷頸處死荷瘤兔，在無菌條件下取出腫瘤，機械勻漿制備成單細胞懸液（每毫升含108個細胞），選擇大白兔的右后肢肌肉內注射已制備好的單細胞液1ml。接種后10～12d，實驗動物均可觸及2.5cm～3cm的腫瘤，為種植成功。

1.2 治療與方法

⑴外照射采用SIEMENS PRIMUS，M直線加速器產生的6MV，X射線，將野中心對準兔右腿處腫瘤采用SSD照射，野邊界在腫瘤邊緣外放3cm~5cm，照射劑量200cGy/F，DT2000cGy/10F，共20d。常規分割治療，將動物固定于木板之上。

⑵熱療采用珠海產的HG，2000型體外高頻熱療機，輸入電壓220V，溫度控制在42.5℃～43.0℃，機控輸入功率在90%～95%，計算機控制其與溫度相關，大于此值溫度達45℃，小于此值溫度低于42℃。每次熱療10min，1次/d，共15d。

⑶超激光設備為日本產SUPER LIZER HA，550（SL）直線偏振光近紅外線治療儀。照射方法直接接觸病變處皮膚，輸出功率90%，選用C型鏡頭，照射周期8:1即照射8s停1s，隔日1次，每次5min，15次。

⑷放射免疫監測：分別于移植前24h、種植成功后（移植后）、治療后1、3、4周空腹狀態下抽耳緣靜脈血分離血清，檢測：IL，2、IL，6、IL，8。

⑸放免測定藥盒及設備：細胞因子放免測定試劑由九鼎醫學生物有限公司提供；使用上海原子能研究所日環儀器一廠SN，695B型智能放免γ，測量儀，測定均嚴格按照試劑說明書進行操作。

⑹對照組未行任何治療。

1.3 統計學方法

計量資料以均數±標準差(x±s)表示，結果采用t檢驗、F檢驗和q檢驗。計數資料采用卡方檢驗。

2 結 果

2.1 腫瘤大小

治療前各組腫瘤直徑大小無顯著性差異（P>0.05），治療結束比較各組腫瘤直徑。外放組腫瘤直徑2.23±0.54cm，其中有6/20例形成纖維硬結，破潰4/20例。熱療組腫瘤張力比較高，中心有液化，其直徑為7.65±2.78cm。對照組腫瘤直徑10.23±3.01cm，腫瘤張力比較高。激光組腫瘤直徑12.23±2.56cm，破潰8/20例，四個組中該組腫瘤最大、破潰最多。各組腫瘤直徑比較，差異有顯著性（F=4.31，P＜0.01）。

2.2 生存及轉移情況

外放組生存天數為68.58±5.35d；熱療組生存天數58.51±5.23d；對照組生存天數為45.23±3.56d；激光組生存天數38.35±3.26d。各組生存時間比較有顯著性差異（F=17.12，P＜0.01)。

外放組肺轉移1/20例，肝轉移1/20例；熱療組肺轉移3/20例，肝轉移1/20例；對照組肺轉移16/20例，肝轉移3/20例；激光組肺轉移11/20例，肝轉移2/20例。各組肝、肺轉移發生率比較有顯著性差異（χ2=37.89，P＜0.01）。激光組、對照組死因以肺轉移、肝轉移為主，外放組、熱療組死因以惡液質為主。

2.3 細胞因子變化情況

2.3.1 IL，2變化

外放組IL，2降低的程度較熱療組、對照組、激光組低（P＜0.01），IL，2在血清中的含量從低至高依次為：激光組/對照組＜熱療組＜外放組，且與各組生存期呈正相關關系（r=0.481，P＜0.01 ），降低的幅度越大生存期越短。熱療組好于對照組，對照組與激光組無差異。治療4周后外放組與熱療組比較兩組之間IL，2濃度有顯著性差異（q=3.26，P＜0.05）。

2.3.2 IL，6的變化

IL，6在血清中的含量從低至高依次為外放組＜熱療組＜對照組/激光組，差異有顯著性（P＜0.01），與各組生存期比較呈負相關（r=-0.297，P＜0.01），其增高的幅度越大，生存期越短。治療4周后外放組與熱療組比較IL，6濃度有顯著性差異（q=7.39，P＜0.01）。

2.3.3 IL，8的變化

IL，8在血清中的含量依次為：激光組/對照組＜熱療組＜外放組，且與各組生存期呈正相關（r=0.359，P＜0.01）。降低的幅度越大生存期越短。

各組移植前各細胞因子血清含量比較無顯著性差異（P>0.05），移植后各組各細胞因子亦無差異（P>0.05），移植前后各細胞因子比較則差異有顯著性（P＜0.01）。在各階段中對照組與激光組比較無差異（P>0.05）。外放組、熱療組、激光組、對照組在移植前和治療前（VX2種植成功后）所觀察的細胞因子變化表現在IL，2、IL，8降低，IL，6增高。

3 討 論

兔VX2瘤模型是一個成熟、穩定且應用廣泛的腫瘤實驗模型，種在兔大腿上的VX2瘤，一般用作傳種之瘤株。兔大腿肌肉血運豐富，VX2瘤易于成活和觀察，因此選擇在兔大腿處接種。移植前后IL，2、6、8的變化說明VX2瘤的生長對肌體細胞因子的正常應答產生了影響。IL，2主要由T細胞或T細胞系產生，能直接增強單核細胞的細胞毒作用，具有獨特的促進T細胞抗腫瘤和殺傷腫瘤細胞的作用[3]。VX2種植成功后IL，2降低對宿主細胞免疫產生明顯的抑制作用，特別是對T細胞的抑制[4]，IL，6可促進或抑制腫瘤細胞增殖[5]。IL，8是目前已知的最強的中性粒細胞趨化和激活因子[6]。由此產生一系列的損傷性病理過程，即所謂的“瀑布效應(cascade) ”。在本實驗中外放組IL，2、IL，8高于其它組，降低幅度小于其它組。降低的幅度越大，其生存期越短。IL，6在外放組中最低，也可能與對照組/激光組轉移比例高有關，其在各組之間增高的幅度越大，生存期越短。這只是我們在實驗中觀察到的現象，其確切的機制還有待于進一步的研究。

全身熱療導致機體免疫的抑制，局部熱療則能提高免疫力，表現在增強T 淋巴細胞、NK細胞和巨噬細胞的功能，從而阻止腫瘤的擴散[4]。在本次實驗中觀察到外放組、熱療組肺轉移均較對照組/激光組輕，與文獻報道相同[4]。外照射我們用的是6MV，X射線，直接損傷細胞的DNA鏈，也通過間接作用對腫瘤細胞產生殺傷作用。常規分割符合放射生物學“4R”原則，與現行臨床治療模式一致。腫瘤得到很好的控制，實驗中外放組腫瘤DT2000cGy/10F，共20d，直徑明顯小于其它兩組，提示VX2瘤對放射治療高度敏感。

SL產生600～1600nm波長的近紅外線，與普通的紅外線相比不易被反射分散和被機體吸收，治療時紅外線可達深部組織50mm，激光照射后神經細胞膜電位超極化，血管擴張致局部血流改善抑制神經傳導而起到很好的鎮痛作用[7，8]，對IL，2、IL，6、IL，8影響與對照組比較無顯著性差異，提示超激光對腫瘤沒有治療作用。激光組腫瘤直徑大、破潰比例高，可能與超激光促進血液循環，細胞通透性增高以及局部的加熱作用有關。

綜上所述，可以認為VX2種植成功后對宿主細胞免疫產生抑制作用。外照射、熱療對IL，2、6、8的變化有逆轉的作用，外照射對于熱療在治療4周后 IL，2、IL，6比較差異有顯著性，其意義有待于進一步闡明。

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