作者：薛恒躍， 王玉蘭， 于黎明， 胡 榮， 王文珍

【關(guān)鍵詞】 中藥

摘要：目的考察抗癲癇類中藥制劑中添加化學(xué)藥品苯巴比妥的檢測(cè)方法。方法建立化學(xué)官能團(tuán)專屬性鑒別方法和高效液相色譜法進(jìn)行初步確認(rèn)，用高效液相色譜―質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以對(duì)照品比對(duì)做最終確認(rèn)。結(jié)果與結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

關(guān)鍵詞：苯巴比妥； 中藥制劑； 薄層色譜； 高效液相色譜； 高效液相色譜質(zhì)譜

Determination Methods of Phenobarbital in Traditional Chinese Medicinal Preparation

Abstract:ObjectiveTo identify a method for the test of phenobarbital mixed in traditional Chinese medicine(TCM)preparations.MethodsChemical method and HPLC method were established for the determination of the organic extract of TCM preparations， and phenobarbital was last identified by comparation of samples with standards in HPLC-MS.Results and ConclusionThe samples were determined and contained phenobarbital.The method is simple， accurate and reliable.

Key words:Phenobarbital; Traditional Chinese medicine(TCM) preparations; TLC; HPLC; HPLCMS

抗癲癇類藥物目前的種類很多。其中苯巴比妥類屬于苯巴比妥酸的衍生物，主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不同層面，具有非特殊性抑制作用。一些自制中藥制劑為增加療效非法添加了苯巴比妥類治療藥物，由于對(duì)其劑量沒有進(jìn)行控制，臨床應(yīng)用時(shí)易產(chǎn)生肝、腎毒性，給患者造成傷害甚至危及生命。因此建立一個(gè)有效的方法檢測(cè)此類藥物，以便及時(shí)查處制假行為是十分必要的。本文對(duì)檢測(cè)方法操作進(jìn)行了探討。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1100型高效液相色譜儀(二級(jí)管陣列檢測(cè)器)；Agilent 1100LC-MSD高效液相色譜―質(zhì)譜聯(lián)用儀。試劑：均為分析純。苯巴比妥對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)17222-200303)。樣品為個(gè)體醫(yī)療診所自制中藥制劑。

2 檢測(cè)方法

首先采用化學(xué)官能團(tuán)專屬性鑒別對(duì)添加的西藥類別進(jìn)行篩選，用薄層層析法進(jìn)一步篩選確認(rèn)，然后采用高效液相色譜法對(duì)樣品與對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間進(jìn)行比對(duì)，并在二級(jí)管陣列檢測(cè)器上測(cè)定色譜峰的純度及紫外圖譜的相似性。最終用高效液相色譜―質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)確定具體藥物的成分。

2.1 樣品提取取樣品10粒傾取內(nèi)容物，加氯仿30 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液中加入活性炭0.5 g，搖勻，過濾。濾液水浴上蒸至近干，得白色粉末(測(cè)試樣品)。

2.2 專屬性化學(xué)鑒別反應(yīng)取測(cè)試樣品10 mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5 mg，搖勻，溶液生成橙黃色沉淀，漸變橙紅色。證明測(cè)試樣品可能屬于苯環(huán)取代基的苯巴比妥類藥物［1］。

2.3 薄層層析取測(cè)試樣品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取苯巴比妥對(duì)照品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，作為對(duì)照品溶液。分別吸取上述兩種溶液各5 μl，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上。分別用正己烷氯仿甲醇(5∶3∶1)、氯仿甲醇(9∶1)、氯仿環(huán)己烷甲醇(5∶4∶1)3種不同的系統(tǒng)展開，檢視。結(jié)果表明：測(cè)試樣品色譜圖中均有一暗紫色的主斑點(diǎn)，與苯巴比妥對(duì)照品色譜中相應(yīng)位置上的斑點(diǎn)顏色相一致。

2.4 高效液相色譜法測(cè)定

2.4.1 儀器與色譜測(cè)定條件色譜柱：Diamonsil C18，4.6 mm×200 mm，5 μm；流動(dòng)相：甲醇10 mmol/L磷酸二氫鉀(58∶42)；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：30.0℃；進(jìn)樣量：10 μl［2］。

2.4.2 操作方法取測(cè)試樣品1 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取苯巴比妥對(duì)照品1 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。上述兩種溶液分別用微孔濾膜(0.2 μm)過濾，進(jìn)樣，即得。

2.4.3 結(jié)果測(cè)試樣品色譜圖中主峰保留時(shí)間與苯巴比妥對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致，而且兩者在色譜峰各位置處的紫外圖譜均相疊。見圖1~2。

圖1 供試品高效液相色譜圖

圖2 對(duì)照品高效液相色譜圖

2.5 高效液相色譜―質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定

2.5.1 儀器與色譜測(cè)定條件色譜柱：ZobaxC18 2.1 mm×250 mm，5 μm；干燥氣體流量：10 L/min；溫度：350℃；噴霧壓力：25～30 Psi。

2.5.2 供試品溶液制備操作方法同2.4.2操作方法。

2.5.3 結(jié)果對(duì)測(cè)試樣品中保留時(shí)間為11.7 min的峰進(jìn)行ESI-MS分析，結(jié)果顯示，在正離子模式下質(zhì)譜圖上出現(xiàn)準(zhǔn)分子離子峰［M＋H］＋(m/E 233.3)，加合離 子［M＋Na］＋(m/E 255.3)及［IM＋H＋H2O］＋(m/E 484.4)；在負(fù)離子模式下質(zhì)譜圖上顯示準(zhǔn)分子離子峰［M-H］-(m/E 231.3)，加合離子［M＋Cl］-(m/E267.1)。測(cè)試樣品顯示與苯巴比妥對(duì)照品分子量及峰位相同的分子離子碎片峰，證實(shí)樣品中添加了苯巴比妥。見圖3~4。

圖3 供試品質(zhì)譜圖

圖4 對(duì)照品質(zhì)譜圖

3 討論

中藥制劑中非法添加化學(xué)藥品是近年來出現(xiàn)在中藥制劑領(lǐng)域中的一種高科技制假手段，這種手段具有隱蔽性，但對(duì)患者的身體具有傷害性，是藥品質(zhì)量管理中的薄弱環(huán)節(jié)。由于缺乏相應(yīng)的檢測(cè)手段和方法，制約了藥品監(jiān)督管理部門對(duì)制假者的及時(shí)查處工作。本文嘗試并研究了抗癲癇類中成藥中添加化學(xué)藥品苯巴比妥的檢測(cè)方法。用本文的實(shí)驗(yàn)思路和方法，可以進(jìn)一步擴(kuò)大研究的領(lǐng)域和范圍，及時(shí)掌握和監(jiān)督市售更多中藥制劑的品種。致謝：高效液相色譜―質(zhì)譜由大連理工大學(xué)國家精細(xì)化工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典，Ⅱ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:362.

［2］ 劉文英，馮 芳，李好枝，等.藥物分析，第5版［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:95.