【摘要】 目的 建立硝酸咪康唑搽劑微生物限度檢查法。方法 測定硝酸咪康唑搽劑對大腸埃希菌等5種試驗菌的回收率，對2個控制菌（銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌）的檢查方法進行驗證。結果 用薄膜過濾法和0.1%吐溫80-pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液作沖洗劑檢查本品的細菌總數、真菌及酵母菌計數，其試驗菌回收率均達到70%以上。同樣用該方法檢查本品的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌，其試驗組呈陽性反應，陰性菌對照組呈陰性反應。結論 用薄膜過濾法聯用0.1%吐溫80-pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液作沖洗劑可以消除硝酸咪康唑搽劑在試驗條件下的抑菌作用，從而順利檢出該品種所污染的各種微生物。 【關鍵詞】 硝酸咪康唑搽劑；微生物限度檢查；方法學驗證 Abstract:Objective To establish a method of microbial limit test for miconazole nitrate liniment. Methods Centrifugal sedimentation and culture medium diluted method were used to validate the accuracy and feasibility of microbial limit test.Results The recovery of bacteria， yeast and mould were above 70%. P. aeruginosa and S.aureus were positive and Gramnegative organisms were negative. Conclusions Membrane filtration and the polysorbate 80 sodium chloridepeptone buffer can be used to test the total viable aerobic count and specifiedorganisms (include S. aureus and P. aeruginosa) for miconazole nitrate liniment. Key words:miconazole nitrate liniment；microbial limit test；method validation 微生物限度檢查法是檢查非規定制劑及原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項目包括細菌數、真菌數、酵母菌數及控制菌檢查［1］。但具有抑菌成分的藥品由于其抑菌活性的干擾，常規檢查結果不能真實地反映出藥品中污染微生物的情況，必須先消除供試品中的抑菌活性，再根據《中國藥典》規定的方法進行檢查，并必須對所采取的檢查方法進行驗證，以確認抑菌活性的消除和檢查方法的可靠性。具有抑菌作用的藥品，每個品種抑菌效果不同，因此適合各個品種的微生物限度檢查法也不同。 作者曾用常規法、培養基稀釋法及薄膜過濾法（用pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗）對硝酸咪康唑搽劑進行微生物限度檢查，結果均不能達到藥典要求。吐溫80是親水性表面活性劑，具有增溶作用，因此本文選擇用薄膜過濾法聯用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液做沖洗劑檢查該藥品的細菌、真菌、酵母菌數和控制菌，結果滿意，可為同類藥品的微生物限度檢查法提供科學依據。 1材料 1.1菌種大腸埃希菌(Escherichia coli)［CMCC(B) 44 102］， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］， 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)［CMCC（B）63 501］， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC(B)10 104］白色念珠菌(Candida albicans)［CMCC(F) 980011］， 黑曲霉(Asperg illus niger)［CMCC(F) 98003］，由廣東生物研究所提供，菌種代數均為第3代。 1.2培養基及試劑pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、營養肉湯、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、虎紅培養基、膽鹽乳糖培養基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂、二鹽酸二甲基對苯二胺試劑、PDP瓊脂培養基、三氯甲烷、甘露醇氯化鈉瓊脂培養基和革蘭氏染色劑。 1.3樣品硝酸咪康唑搽劑，阿特維斯（佛山）制藥有限公司，批號：0606950，成分：硝酸咪康唑、玫瑰麝香香精、乙醇、二甲基亞砜。 2方法與結果 2.1菌液制備［1］ 2.1.1取經37 ℃ 培養18～24 h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌與大腸埃希菌的肉湯培養物1 mL，加入9 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數50～100 cfu的菌懸液，做活菌計數。 2.1.2取經25 ℃培養18～24 h的白色念珠菌液體培養物1 mL，加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數50～100 cfu的菌懸液，做活菌計數。 2.1.3接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中，培養5～7 d，加入3～5 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含孢子數50～100 cfu的孢子懸液，做活菌計數。 2.2供試液的制備［2］取本品10 mL，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。 2.3驗證方法 2.3.1細菌、真菌和酵母菌計數法回收率的測定 薄膜過濾法聯用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑對各試驗菌的回收率進行實驗，3次獨立平行試驗結果的均值見表1［3］。

［2］ 馬緒榮，蘇德模.抑菌性供試品的供試掖制備方法［J］.藥品微生物學檢驗手冊，2001，2（2）：65.

［3］ 王剛林，周劍.含抑制菌成分中成藥固體制劑微生物限度檢查驗證方法的建立［J］.中華實用醫藥雜志，2006，6（2）:26.

［4］ 桑國衛.中國藥品檢驗標準操作規范［Ｍ］.北京：中國醫藥科技出版社，2005：325.

［5］ 林麗英，陳浩桉.大黃蟲蟅丸微生物限度檢查法的建立［J］.中藥新藥與臨床藥理，2006，17（7）：4.