【摘要】 目的觀察家兔灌胃給予生脈散后，其含藥血清對(duì)豚鼠離體工作心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響。方法家兔按分組灌胃分別給予生脈散5，10 ml·kg-1，2次/d，連續(xù)3 d，末次給藥后60 min取血，分離血清。制備豚鼠離體工作心臟，觀察含藥血清對(duì)心率(HR)、動(dòng)脈血壓(AP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張期末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升及下降速率(±dp/dtmax)的影響。結(jié)果含藥血清在給藥后不同時(shí)間具有減慢HR，降低AP，LVEDP，增高LVSP和±dp/dtmax的作用，且呈明顯的劑量依賴關(guān)系 (P<0.01)。結(jié)論 含藥血清具有正性肌力和負(fù)性頻率作用。

【關(guān)鍵詞】 生脈散; 血清藥理學(xué); 離體工作心臟

Effects of Shenmai San on Hemodynamics in Isolated Working Guinea Pigs Hearts by Serum Pharmacology

Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Shenmai San on hemodynamics in isolated working guinea pigs hearts. MethodsThe experiment was accomplished by serum pharmacology. Different ig dosages(5，10 ml·kg-1) were administered to rabbits twice a day for three consecutive days .The blood was taken at 60 min after the last administration and the serum was separated. The separated serum was added to the isolated working guinea pigs hearts. The effects of Shenmai San on heart rate (HR)，arterial blood pressure (AP)，left ventricular systolic pressure (LVSP)，left ventricular end-diastolic pressure (LVEDP)，and ±dp/ dtmax were observed. ResultsThe herbal Shenmai San serum slowed HR and reduced AP、LVEDP，increase LVSP and ±dp/ dtmax (P<0. 01) in a dose-dependent manner.ConclusionThe results suggest that the herbal Shenmai San serum may cause positive inotropic effect and reduce rhythum of the heart and blood pressure in isolated working heart in a dose-dependent manner.

Key words：Shengmai San ; Serum pharmacology ; Isolated working guinea pigs heart 生脈散又名生脈飲，是中醫(yī)益氣養(yǎng)陰的著名古方，由人參、麥冬、北五味子組成。方中人參補(bǔ)肺益氣以生津，為主藥;麥冬養(yǎng)陰、清熱以生津?yàn)檩o藥;五味子固表止汗而生津，為佐使藥。以人參、麥冬、五味子三藥一補(bǔ)一清一斂，益氣生津，斂陰止汗，使氣陰復(fù)而脈氣生，因而后世將其作為“益心復(fù)脈”的基礎(chǔ)方。近年來(lái)的眾多研究顯示其藥理作用相當(dāng)廣泛，尤其對(duì)心血管系統(tǒng)作用的研究報(bào)道頗多，如正性肌力、抗心律失常、改善頑固性心衰、雙向調(diào)節(jié)血壓以及降低心肌梗塞后的死亡率［1］等。但用血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法來(lái)研究生脈散對(duì)豚鼠離體工作心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在用豚鼠離體工作心臟模型，觀察生脈散對(duì)豚鼠離體工作心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響，以探討生脈散的藥理作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物豚鼠18只，雌雄不拘，體重300～350 g， 家兔，體重2.0～2.5 kg，家兔和豚鼠購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心。

1.1.2 儀器美國(guó)BIOPAC公司MP150型16道生理信號(hào)記錄分析儀及插件。恒溫循環(huán)水浴泵(北京醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.1.3 藥品與試劑生脈注射液由江蘇蘇中藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)（規(guī)格10 ml/支，每10 ml相當(dāng)于紅參、麥冬各1 g;批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z32021054;批號(hào)：20031203)，其余各試劑均為市售分析純。

1.1.4 含藥血清的制備家兔，體重2.0～2.5 kg，分成3組，每組5只。第1組為對(duì)照組，灌胃NS 10 ml·kg-1;第2組生脈注射液低劑量組（含藥血清低劑量組），灌胃劑量為5 ml·kg-1，第3組生脈注射液高劑量組（含藥血清高劑量組），灌胃劑量為10 ml·kg-1 。以上各組灌胃2次/d，連續(xù)3 d。家兔末次給藥前12 h禁食，不禁水。末次給藥后60 min從耳緣靜脈取血，3 000 r·min-1離心20 min，分離含藥血清， 50℃滅活30 min，于-40℃冷凍備用。

1.2 方法

1.2.1 制備豚鼠離體工作心臟［2］將豚鼠迅速脫臼處死，打開(kāi)胸腔，取出心臟，經(jīng)主動(dòng)脈插管，用K-H緩沖液(NaCl 118 mmol/L，KCl 4.7 mmol/L，CaCl2 2.5 mmol/L，MgSO4 1.2 mmol/L，KH2PO4 1.2 mmol/L，NaHCO3 25 mmol/L，Glucose 11 mmol/L，95%O2+5%CO2，37℃，pH 7.4)先以Langendorff模式逆行灌注，然后于肺靜脈行左房插管，以備順灌。再向左室插管，用美國(guó)BIOPAC公司MP150型16道生理信號(hào)記錄分析儀及插件記錄左室收縮壓(LVSP)、左室內(nèi)壓最大上升及下降速率(±dp/dtmax)、左室舒張期末壓(LVEDP)，主動(dòng)脈插管記錄動(dòng)脈血壓(AP)，于心房和心室安置電極以記錄心率(HR)變化。心臟搏動(dòng)穩(wěn)定后改以前負(fù)荷1.17 kPa，后負(fù)荷5.38 kPa恒定狀態(tài)順向灌流心臟，按給含藥血清后3，5和10 min的順序觀察藥物作用。

1.2.2 動(dòng)物分組3組， 每組9只動(dòng)物，① 對(duì)照組(A)：將家兔對(duì)照組采血分離的血清給予豚鼠的離體工作心臟（以下各組含藥血清在灌流液中的體積分?jǐn)?shù)為4%）連續(xù)灌流；② 含藥血清低劑量組(B)：將家兔生脈注射液低劑量組采血分離的血清給予豚鼠的離體工作心臟連續(xù)灌流；③含藥血清高劑量組(C)：將家兔生脈注射液高劑量組采血分離的血清給予豚鼠的離體工作心臟連續(xù)灌流。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用給藥前后配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果 在離體工作心臟搏動(dòng)穩(wěn)定后，按給含藥血清后3，5和10 min的順序觀察含藥血清作用。含藥血清在給藥后不同時(shí)間均可減慢HR，降低AP和LVEDP，增高LVSP和±dp/dtmax，與給藥前比較差異有顯著性(P<0.01)，且具有劑量依賴關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 含生脈散血清對(duì)豚鼠離體工作心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響（略）

與正常血清對(duì)照組比較，**P<0.01

3 討論 心臟的泵血功能取決于心肌的收縮性能以及前、后負(fù)荷的綜合效應(yīng)，反映心臟收縮性能的參數(shù)LVSP和±dp/dtmax在一定程度上反映心室壁肌張力變化，從而反映心肌纖維收縮成分的收縮程度，但這些參數(shù)在在體情況下，容易受前、后負(fù)荷以及神經(jīng)、體液的影響，因而很難正確評(píng)價(jià)藥物對(duì)心肌收縮性能的影響［3］。傳統(tǒng)的Langendorff離體心臟灌流法排除了神經(jīng)體液的調(diào)控作用，但不能同時(shí)控制前、后負(fù)荷［4，5］。而本實(shí)驗(yàn)則為順向灌流，在前負(fù)荷固定在1.17 kPa，后負(fù)荷固定在5.38 kPa的前提下，灌流液依靠離體心臟工作來(lái)維持循環(huán)，所以能夠在排除了前負(fù)荷和后負(fù)荷影響的條件下觀察離體心臟的泵血功能與心肌收縮性能的變化［6］。 LVSP和+dp/dtmax代表等容收縮期左心室內(nèi)壓力及最大變化速率，在一定程度上反映心室壁的肌張力變化，從而反映心肌纖維收縮成分的收縮速度［7］。生脈散可使LVSP和+dp/dtmax增高，表明其可提高心臟的收縮性，因而使心臟收縮更敏捷，心室腔殘留血量減少，心室壁張力降低，從而降低維持心室壁張力所需的耗氧量。-dp/dtmax代表等容收縮期左心室最大舒張速度，同時(shí)也是心肌早期舒張功能改變的敏感指標(biāo)［8］。生脈散可使-dp/dtmax增高，表明其可提高心臟的舒張功能，因而使回心血量增多，心輸出量增加。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 生脈散含藥血清對(duì)離體工作心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響表現(xiàn)為減慢HR，降低AP，LVEDP，增高LVSP和±dp/dtmax， 且具有劑量依賴關(guān)系， 表明含藥血清的藥理作用強(qiáng)度與動(dòng)物的給藥量呈顯著的量效關(guān)系，提示生脈散具有正性肌力作用和負(fù)性頻率作用， 結(jié)果與以前學(xué)者的研究相一致［9］。 另外，對(duì)生脈散正性肌力作用和負(fù)性頻率作用的報(bào)道至今均為體外實(shí)驗(yàn)或靜脈直接給藥所得結(jié)論。對(duì)有效成分并不十分確切的這一粗制劑經(jīng)口給藥后能否產(chǎn)生同樣的活性尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用生脈散給動(dòng)物口服，取其血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，這樣可排除其所含雜質(zhì)成分包括無(wú)機(jī)離子的干擾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，含生脈散血清與生脈散制劑直接給藥兩者對(duì)心肌的正性肌力作用基本相似。說(shuō)明其正性肌力作用和負(fù)性頻率作用的有效成分確能經(jīng)胃腸道吸收入血。 觀察復(fù)方中藥對(duì)器官的影響方法較多，但若用復(fù)方中藥直接接觸器官，其復(fù)雜的成分可影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。而給動(dòng)物灌服中藥一定時(shí)間后，取其血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的藥理學(xué)方法就具有一定的優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)許多中藥藥理實(shí)驗(yàn)即采用此方法［10］。任何新的方法學(xué)都需經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間，在探索的過(guò)程中得以建立，在研究過(guò)程中逐步加以完善，逐漸推廣應(yīng)用，血清藥理學(xué)方法作為一種新的方法也不例外，必然存在局限性及某些問(wèn)題。如:血清標(biāo)本采集時(shí)間的確定、含藥血清藥物濃度的測(cè)定與選擇、血清的處理、不能保證中藥全部通過(guò)血液而起作用以及中藥尤其是復(fù)方復(fù)雜的藥物代謝動(dòng)力學(xué)及血清化學(xué)等，以上存在的問(wèn)題在今后的研究過(guò)程中還有待逐步加以解決，以更好地促進(jìn)中藥藥理的研究。 鑒于生脈散的有效成分極其復(fù)雜，故對(duì)其確切作用機(jī)制仍不明確，尚有待進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】 ［1］ 吳紅彥. 生脈散防治心血管疾病的藥理研究與臨床應(yīng)用［J］.中成藥，1997，19(3)：39. ［2］ 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：493. ［3］ 楊為民，梁 翌，李緒蘭，等. 銀杏葉提取物對(duì)大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響［J］.中草藥，2001，32(5)：436. ［4］ 姜紅玉，睢大員，于曉風(fēng)，等.刺五加葉皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠血液流變學(xué)及血小板功能的影響［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2004，30(3)：384. ［5］ 于曉風(fēng)，曲紹春，徐華麗，等. 人參果皂苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞的保護(hù)作用［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2003，29(5)：573. ［6］ 曾敬天，李少如，王雨若.哺乳動(dòng)物離體心臟灌流及其心電圖生理學(xué)方法與技術(shù)(第二集)［M］.上海：上海科技出版社，1984：64. ［7］ 雷立權(quán)，韓啟德，高廣道，等.大鼠左心室心肌收縮性能指標(biāo)的測(cè)定［J］.生理學(xué)報(bào)，1982，34 (3)：360. ［8］ Weisfeldt MI，Seully HE，F(xiàn)rederikson J，et al. Hemodynamic determinants of maximum negative dp/ dt and periods of diastole［J］.Am J Physicol 1974，227 (3):613. ［9］ 李 麗，黃啟福.參麥注射液對(duì)大鼠急性心肌缺血再灌注損傷的影響［J］.中國(guó)病理生理雜志，2001，17：814. ［10］ 劉 紅.中藥復(fù)方藥理研究方法進(jìn)展-血清藥理學(xué)［J］.湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)·醫(yī)學(xué)版，2004，21（4）：38.