作者:侯衛(wèi)國，屠立群，何立群，高建東

【摘要】 目的 觀察中藥抗纖靈顆粒對(duì)大鼠試驗(yàn)性慢性腎衰的藥效作用，探討此方改善腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制。方法 設(shè)立對(duì)照組、模型組、抗纖靈組、大黃組、丹參組共5組。服藥30天。采用SPSS分析，血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）用藥治療前后指標(biāo)及膽固醇（CHL）、甘油三酯（TG），各組間指標(biāo)的變化和進(jìn)行腎臟組織形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果 模型與抗纖靈組比較：Scr、BUN指標(biāo)明顯降低（P<0.05），各治療組間的比較：抗纖靈組Scr、BUN指標(biāo)均低于丹參組和大黃組。TG抗纖靈組與模型組比較，P<0.05。腎組織形態(tài)可見：抗纖靈組腎衰大鼠腎小球萎縮明顯減輕，機(jī)構(gòu)較接近正常。結(jié)論 抗纖靈顆粒對(duì)改善試驗(yàn)性慢性腎衰有較明顯的藥效作用。 【關(guān)鍵詞】 抗纖靈顆粒； 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)； 慢性腎炎； 腎間質(zhì)纖維化 Research about animal experiment of Kang Xian Ling Ke Li (KXLKL) on chronic renal failure in pharmacodynamics 【Abstract】 Objective To observe the effect of pharmacodynamics of KXLKL on chronic renal failure in experimental rats and investigate the mechanism of its improvement of glomerulosclerosis and renal interstitial fibrosis. Methods Rats were randomly pided into control，model，KXLKL，Da Huang and Dan Shen(group) which were administrated for 30 days respectively. Analysis of SPSS adopted，Scr，BUN，serum cholesterol，triglyceride were measured before and after treatment and observation of renal morphology. Results Model group compared with KXLKL group：Scr，BUN，indexes were significantly decreased (P<0.05). Compared to each treated group：Scr，BUN，indexes in KXLKL were significantly lower than that in Dan Shen and Da Huang. Triglyceride in KXLKL was lower than that in model group (P<0.05). Renal morphological structures were showed：glomerule atrophy of KXLKL in rats with chronic renal failure and multiple interstitial connective tissues were significantly mitigated，which were close to normal. Conclusion KXLKL may have obvious effect of pharmacodyranics on improvement of experimental chronic renal failure. 【Key words】 Kang Xian Ling Ke Li； animal experiment； chronic renal failure； renal interstitial fibrosis 慢性腎功能衰竭（Chronic renal failure，CRF）是臨床常見的危重病種之一。雖然腎臟病學(xué)在透析、移植和非透析治療等方面有很大的發(fā)展，然而，CRF治療中還存在不少問題，如CRF早、中期防治尚不得力，透析的非生理性，移植配型方法的不完善及供腎不足等。在多年臨床經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，研制成了在扶正祛邪基礎(chǔ)上著重活血化瘀、祛濕濁的抗纖靈方。經(jīng)臨床研究證明抗纖靈能顯著降低CRF患者的肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及膽固醇（CHL）、甘油三酯（TG），改善腎功能的作用。故考慮進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，以明確其療效和機(jī)制。 1 材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD雄性大鼠（180～200g）由上海必凱中心提供。 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 大鼠分籠飼養(yǎng)于溫室，12h日照，45%濕度的環(huán)境中，自由飲水，進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)普通飼料。適應(yīng)1周后用Platt 法5/6腎切除作大鼠慢性腎衰竭模型［1］，分兩期完成，先背部切口切除左臂2/3，縫合后切除整個(gè)右腎。假手術(shù)組僅背部切口分2次剝離左右腎包膜，保留腎上腺。 1.2.1 動(dòng)物分組設(shè)計(jì) 分為5組（假手術(shù)對(duì)照組“A”4只，模型組“B”6只，抗纖靈組“C”6只，大黃組“D”4只，丹參組“E”4只），其中造型組、治療組大鼠根據(jù)手術(shù)后2周所測(cè)血肌酐值分組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使分組后各組血肌酐、尿素氮值無明顯差異。 1.2.2 治療方法 C組予抗纖靈方：丹參15g，制大黃12g，炒牛膝15g，桃仁12g，全當(dāng)歸15g。D組予制大黃12g。E組予丹參15g。按成人常規(guī)用量的20倍給藥。4組大鼠均按1.5ml/100g體重進(jìn)行灌胃，A、B組給予等量生理鹽水。C、D、E組大鼠連續(xù)灌服30天（實(shí)驗(yàn)中E組有一鼠死亡），A、B、C、D組分裝部分血清于-20℃冰箱保存以備監(jiān)測(cè)。取出腎臟，固定于10%福爾馬林緩沖液中，石蠟包埋，切片，HE和PAS染色。 1.2.3 觀察指標(biāo) 肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、膽固醇（CHL）、甘油三酯（TG）、腎組織結(jié)構(gòu)。 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 試驗(yàn)結(jié)果以SPSS軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，設(shè)P<0.05提示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果 2.1 抗纖靈對(duì)CRF大鼠腎功能的作用 見表1。

2.3 光鏡下腎組織機(jī)構(gòu)觀察 2.3.1 A組 腎臟發(fā)育正常，腎皮質(zhì)內(nèi)腎小球形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，每一低倍鏡視野內(nèi)有6～8個(gè)腎小球，呈球形、染色弱嗜堿性。腎小管壁較厚，管腔較小。腎小管之間間質(zhì)含量少。（HE10×10） 2.3.2 B組 同樣的視野內(nèi)，只有1～2個(gè)腎小球，結(jié)構(gòu)基本正常，其余較多5～6個(gè)腎小球變化，腎小囊腔擴(kuò)大，囊周纖維化，腎小球間距縮小。腎小管壁薄，管腔擴(kuò)大、縮小相間隔，并可見蛋白管型和紅細(xì)胞管型。間質(zhì)結(jié)締組織增生，并有大量炎癥細(xì)胞浸潤。腎血管壁增厚，管壁玻璃樣變性。腎包膜增厚。（HE10×4） 2.3.3 C組 同樣的視野內(nèi)，有6～7個(gè)腎小球結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，腎小囊擴(kuò)大減輕，囊周纖維化減輕。腎小管結(jié)構(gòu)也較正常，管壁較厚，間質(zhì)結(jié)締組織增生明顯減少，少量蛋白管型。間質(zhì)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。（HE10×4） 2.3.4 D組 同樣視野內(nèi)，有4～5個(gè)腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，2～3個(gè)腎小球囊腔擴(kuò)大，腎小管壁薄，管腔輕度擴(kuò)大，少量蛋白管型。間質(zhì)結(jié)締組織增生，間質(zhì)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。（HE10×4） 2.3.5 E組 同樣的視野中，有4～5個(gè)腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，2～3個(gè)腎小球囊腔擴(kuò)大，腎周纖維化。腎小管壁薄，管腔輕度擴(kuò)大，見蛋白管型。間質(zhì)結(jié)締組織增生，間質(zhì)有少量炎癥細(xì)胞浸潤。（HE10×10） 3 討論 慢性腎衰臨床癥狀多有乏力、納減、惡心、嘔吐、瘙癢、出血傾向變化。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)，這些癥狀的出現(xiàn)和加重均與尿毒潴留關(guān)系密切［2］，而中醫(yī)把類似癥狀歸于濕濁范疇。濕濁應(yīng)包括水濕和濁毒。按中醫(yī)理論，在生理上血水同源，在病理上血水互相影響，互為因果。另一方面腎失開合，清濁不分，當(dāng)升不升，當(dāng)降不降，當(dāng)藏不藏，當(dāng)泄不泄，精液不攝而漏出，水濁不泄而滯留，濁毒內(nèi)蘊(yùn)，或傷絡(luò)，血行不暢而致瘀，或化熱煎熬津血致瘀。故臨床多見濕濁瘀血相夾雜的證候，在治療時(shí)也應(yīng)相輔相成，活血化瘀，祛濕化濁并用［3］。本試驗(yàn)通過測(cè)定Scr、BUN以反映當(dāng)腎功能衰竭后導(dǎo)致的腎毒素滯留。發(fā)現(xiàn)用以丹參與制大黃為主藥的抗纖靈治療后的腎衰大鼠Scr、BUN明顯低于造模對(duì)照組。用此方主藥制大黃治療后的腎衰大鼠BUN明顯低于造模對(duì)照組，而Scr無明顯差異。用另一主藥丹參治療后的腎衰大鼠Scr明顯低于造模對(duì)照組，而BUN無明顯差異。另外抗纖靈組治療后Scr明顯低于治療前，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，BUN亦低于治療前。而造模對(duì)照組Scr、BUN隨著試驗(yàn)的進(jìn)展呈升高趨勢(shì)，顯示CRF如不積極治療腎功能呈進(jìn)行性惡化狀態(tài)。用單味藥制大黃治療后Scr、BUN低于治療前。用丹參治療后Scr明顯低于治療前，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各治療組之間，抗纖靈Scr、BUN均低于丹參組和大黃組。說明在扶正祛邪基礎(chǔ)上著重活血化瘀的抗纖靈復(fù)方能有效促進(jìn)機(jī)體對(duì)病毒的清除，延緩腎功能的惡化，其作用優(yōu)于單味丹參、制大黃，其協(xié)同作用機(jī)制又待進(jìn)一步藥理研究證實(shí)。本試驗(yàn)，從側(cè)面證實(shí)活血化瘀、祛濕化濁并用的治療方法（如抗纖靈方）在一定程度上優(yōu)于單用活血化瘀法，或單用祛濕化濁法。筆者認(rèn)為抗纖靈能降低CRF大鼠Scr、BUN可能與方中多味活血藥改善腎血流動(dòng)力學(xué)從而減少腎系膜細(xì)胞和毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞敏感性有關(guān)［4］。 各種類型的腎臟疾病中存在著脂質(zhì)代謝異常，臨床慢性腎衰患者主要表現(xiàn)為高甘油三酯血癥（TG）、高膽固醇血癥（CHL）［5］。目前認(rèn)為高脂血癥誘發(fā)和/或加重腎小球損傷的機(jī)制可歸納如下：（1）高脂血癥，特別是高膽固醇、低密度脂蛋白，可使組織內(nèi)飽和脂肪酸增多，多聚不飽和脂肪酸減少，從而改變兩者比例，導(dǎo)致腎小球內(nèi)系膜細(xì)胞和毛細(xì)血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜流動(dòng)性減低，使這些細(xì)胞對(duì)血流動(dòng)力學(xué)敏感性增強(qiáng)，導(dǎo)致系膜細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)分泌增多。使上述細(xì)胞合成前列腺素功能紊亂，使血栓素A2分泌增加，而使PGI2分泌減少，誘發(fā)血小板聚集，微血栓形成，造成腎小球損傷。（2）由于高脂血癥，經(jīng)腎小球超濾后腎臟局部呈現(xiàn)高濃度膽固醇、低密度脂蛋白，促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞浸潤，并使巨噬細(xì)胞成為補(bǔ)充脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞呼吸爆炸，使氧化的LDL能刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生生長因子、細(xì)胞因子和其他能刺激膠原合成的系膜細(xì)胞增殖的介質(zhì)。（3）脂質(zhì)對(duì)系膜細(xì)胞有直接損傷作用［6］（這一系列機(jī)制亦符合中醫(yī)瘀、濁概念）。本試驗(yàn)結(jié)果：造模大鼠的TG、CHL顯著高于假手術(shù)組（P<0.01），表明CRF大鼠存在著脂質(zhì)代謝異常。用抗纖靈治療的CRF大鼠TG明顯低于造模對(duì)照組（P<0.05），CHL亦低于造模對(duì)照組。單味藥制大黃、丹參治療CRF大鼠TG、CHL都有明顯的下降，但由于樣本數(shù)目有限所以統(tǒng)計(jì)學(xué)上無意義。 各種腎病病變不論其始發(fā)因素，進(jìn)展至CRF階段有共同的病理特征，即腎小球硬化，細(xì)末機(jī)制增多和腎小管間質(zhì)纖維化。其病理表現(xiàn)為腎小球縮小，腎小球毛細(xì)血管袢萎陷甚至消失，基底膜增厚，毛細(xì)血管閉塞，細(xì)末機(jī)制增多，腎小囊可見擴(kuò)張，亦可見狹窄及閉塞。腎小管萎縮，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，纖維組織增生［7］。我們應(yīng)用Platt法制作的腎衰動(dòng)物模型，腎組織病理變化表現(xiàn)為腎小球體積變小，腎小囊腔擴(kuò)大、囊周纖維化，腎小球間距縮小。腎小管壁薄，管腔擴(kuò)大，縮小相間隔，并可見蛋白管型和紅細(xì)胞管型。間質(zhì)結(jié)締組織增生，并有大量炎癥細(xì)胞浸潤。腎小管壁增厚，管壁玻璃樣變性，腎包膜增厚。這些病理表現(xiàn)均說明了我們成功研制了慢性腎衰、纖維化的動(dòng)物模型。用抗纖靈方治療的腎衰竭大鼠腎小球萎縮明顯減輕，結(jié)構(gòu)接近正常，小管結(jié)構(gòu)基本正常，少量蛋白管型和紅細(xì)胞管型，間質(zhì)結(jié)締組織增生明顯減少，輕度炎癥細(xì)胞浸潤。用單味藥治療組大鼠腎纖維化亦有所減輕。由此說明抗纖靈改善慢性腎衰的機(jī)制之一可能就是通過減輕炎癥浸潤，改善腎小球硬化、腎間質(zhì)纖維化實(shí)現(xiàn)的。

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