鮮、干魚腥草的藥效學實驗比較研究
孟江 宗曉萍 董小萍
【摘要】 目的比較鮮、干魚腥草的藥理活性。方法通過體外抑菌法實驗,考察鮮、干魚腥草的抑菌作用;二甲苯致小鼠耳炎癥實驗,觀察鮮、干魚腥草的抗炎作用; 采用濃氨水誘導法引起的咳嗽實驗,觀察鮮、干魚腥草的止咳作用。結果魚腥草鮮、干藥材的水提取物的大小劑量組和醇提物的大劑量組均有較好的抑菌、抗炎和止咳的作用,其中鮮品水提物大劑量組藥效作用最優(yōu)。結論 魚腥草鮮品抑菌、抗炎和止咳藥理活性優(yōu)于干品,水提物藥理活性優(yōu)于醇提物。
【關鍵詞】 魚腥草 鮮品 干品 藥效活性
Abstract:ObjectiveTo compare the pharmacological effect of fresh and dry Houttuynia cordata Thunb.. MethodsExperiment of bacteriostasis in vitro was carried out to observe the effect of fresh and dry extracts of Houttuynia cordata on the active of bacteriostasis. Experiment of inflammation caused by dimethyl benzene on the ear of mice was carried out to observe the effect on inflammation. Experiment of cough induced by strong aqua was carried out to observe the effect of stopping cough. ResultsWater and ethanol extracts of fresh/dry Houttuynia cordata had good bacteriostasis, stopping cough and anti-inflammation pharmacological action. Water extract of fresh Houttuynia cordata had better pharmacological action. ConclusionThe fresh extract of Houttuynia cordata has better pharmacological activity than that of dry one. While the water extract has better pharmacological activity than ethanol extract.
Key words:Houttuynia cordata; Fresh herb; Dry herb; Pharmacological activity 魚腥草為三白草科 (Saururaceae) 蕺菜屬植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的干燥地上部分和新鮮全草,具有清熱解毒、利尿通淋、祛痰止咳、鎮(zhèn)痛等功效[1]。現(xiàn)代研究表明魚腥草含有揮發(fā)油、黃酮類、酚類、生物堿、多糖等成分[2,3],課題組對干、鮮魚腥草進行GC-MS,HPLC-MS指紋圖譜的系列化學研究[4,5],研究結果發(fā)現(xiàn)魚腥草干鮮品的GC-MS,HPLC-MS指紋圖譜有一定的相識性,但峰的強度及化學成分的含量有一定的差別,因此對干、鮮魚腥草的藥理活性進行對比研究,為魚腥草活性成分的研究及鮮魚腥草的開發(fā)奠定一定的理論基礎。
1 儀器與材料
1.1 動物昆明種健康小鼠,雌雄皆用,體重18~22 g,由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供。
1.2 菌種金黃色葡萄球菌(Atcc 25923)、大腸桿菌(O111 B4),由四川省衛(wèi)生干部進修學院提供。
1.3 藥材與試劑
魚腥草與2005年采自四川峨嵋山,經(jīng)陳幼竹博士鑒定為三白草科蕺菜屬植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.。魚腥草分為兩批,一批鮮藥直接提取;另一部分室溫晾干作為干品藥材。 乙醇、二甲苯等均為分析純由成都科龍化工試劑廠提供,水為蒸餾水。
1.4 儀器
CM-1超聲霧化治療儀,合力醫(yī)療器械廠,中國上海;電子天平(BS 210S,made by startoriu) 。
2 方法與結果
2.1 供試品溶液的制備精密稱取魚腥草鮮、干藥材各500 g,分別加水適量煎煮兩次,每次2 h,過濾,合并兩次濾液,濃縮至2 g/ml(每毫升含2 g生藥),得魚腥草鮮、干藥材的水提物,滅菌后冰箱保存?zhèn)溆谩? 精密稱取魚腥草鮮、干藥材各500 g,分別加適量95%乙醇,回流提取2次,每次2 h,過濾,合并兩次濾液,濃縮至2 g/ml(每毫升含2 g生藥),得魚腥草鮮、干藥材的醇提物,滅菌后冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
2.2 體外抑菌作用考察[6,7]將致病菌金黃色葡萄球菌和大腸桿菌接種于普通培養(yǎng)基中,按以下兩種方法觀察抑菌作用。
2.2.1 稀釋法將菌種活化,挑取典型菌落接種于肉湯管中,置37℃溫箱中24 h,作活菌計數(shù)并稀釋成1×106CFU/ml待用。將營養(yǎng)瓊脂加熱溶化,冷至50℃左右,加入藥物做成含不同濃度藥物(1/2.5~1/320)的營養(yǎng)瓊脂,混勻,傾注于平皿作成平板,將上述菌液分別接種藥物瓊脂平板,置37℃,24 h,觀察結果。結果見表1。 由表1可知,魚腥草鮮品水提物、干品水提物、鮮品醇提物和干品醇提物對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度分別為12.5,100,25,100 mg/ml;對大腸桿菌的最低抑菌濃度分別為12.5,400,50,800 mg/ml。
2.2.2 打孔法用吸管吸取1×106 CFU/ml菌液0.1 ml于營養(yǎng)瓊脂平板中,用打孔器打孔,除去孔內瓊脂,加入1 g/ml濃度的魚腥草鮮、干藥材醇提物和水提物的藥液0.1 ml于孔內,37℃培養(yǎng)24 h,用米尺量取抑菌圈直徑。結果見表2。表1 魚腥草鮮、干藥材醇提物和水提物的抑菌作用(略)表2 魚腥草鮮、干藥材醇提物和水提物的抑菌作用(略) 由表2可知,鮮品水提物、干品水提物和鮮品醇提物對金黃色葡萄球菌均具有較強的抑制作用,尤其是鮮品水提物。鮮品水提物和鮮品醇提物對大腸桿菌亦有抑制作用。而干品醇提物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均未發(fā)現(xiàn)抑制作用,有待進一步研究。
2.3 抗炎作用的考察[8]取雄性小鼠99只,隨機分為9組,每組11只。每日灌胃給藥1次(0.2 ml/10 g小鼠重量),連續(xù)6 d,于末次給藥1 h后,用鼠耳腫脹法觀察抗炎作用。分別于各組小鼠左耳前后涂二甲苯0.05 ml/只,右耳不涂作對照,1 h后將小鼠頸部脫臼處死,剪下左右耳,用9 mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片,稱重,左右耳重量之差作為腫脹度,并計算耳腫抑制率。給藥組與生理鹽水組對照。結果見表3。 抑制率(%)=對照組平均腫脹值-給藥組平均腫脹值對照組平均腫脹值×100% 由表3可知,與生理鹽水組相比,鮮、干藥材水提物的大小劑量組和醇提物大劑量組對小鼠二甲苯性耳廓腫脹均有明顯的抑制作用,其中鮮品水提物大劑量組作用最強。表3 魚腥草鮮、干藥材醇提物和水提物對小鼠耳腫脹抗炎作用觀察(略)
2.4 鎮(zhèn)咳作用考察[9]取小鼠99只,雌、雄各半,隨機分為9組,每組11只。每日灌胃給藥1次(0.2 ml/10 g小鼠重量),連續(xù)6 d,于末次給藥1 h后,用濃氨水誘導法觀察鎮(zhèn)咳作用。即將小鼠放入玻璃鐘罩內,打開通過橡皮管與之相連的超聲霧化器,將濃氨水均勻地噴入玻璃鐘罩內,噴霧10 s,立即取出小鼠,以小鼠腹肌收縮并張大口為咳嗽動作指標,分別觀察各組小鼠2 min中咳嗽次數(shù)。結果見表4。 表4 魚腥草鮮、干藥材醇提物和水提物對小鼠的鎮(zhèn)咳作用觀察(略)
由表4可知,與生理鹽水組相比,鮮品、干品水提物大小劑量組和醇提物高劑量組均對濃氨水誘導法引起的咳嗽具有較好的鎮(zhèn)咳作用,其中鮮品水提物大劑量組鎮(zhèn)咳作用最優(yōu),而鮮干品醇提物的小劑量組作用不明顯。
3 結論 魚腥草鮮、干藥材的水提取物的大小劑量組和醇提物的大劑量組對由二甲苯致小鼠耳炎癥、濃氨水誘導法引起的咳嗽均有較好的抗炎和止咳的作用,其中鮮品水提物大劑量組抗炎、鎮(zhèn)咳作用最優(yōu)。分別采用稀釋法和打孔法考察體外抑菌作用,結果基本一致,鮮、干藥材水提物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均具有抑制作用,而干品醇提物作用不明顯。由此看出魚腥草鮮品抗炎、止咳和抑菌藥理活性優(yōu)于干品,而魚腥草水提物藥理活性優(yōu)于醇提物,其作用的藥效物質基礎有待進一步深入研究。 對魚腥草的研究開發(fā)及臨床應用藥材,由于運輸和貯存不便,大都用魚腥草干品。本課題首次對鮮、干魚腥草進行藥效學的比較研究,為魚腥草鮮品的開發(fā)研究和魚腥草藥效物質基礎的研究提供了一定的理論依據(jù)。
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