作者：李蘭芳， 張建新， 李國風， 徐濤

【關(guān)鍵詞】 通脈活血靈膠囊；，，急性毒性；，，小鼠；，，大鼠；，，長期毒性

摘要：目的觀察小鼠和大鼠口服通脈活血靈膠囊的急性毒性和長期毒性作用。方法采用最大給藥量法測定小鼠口服通脈活血靈膠囊的最大耐受量；采用3個劑量（9.0，4.5，1.5 g /kg ）iq SD大鼠，連續(xù)180 d，觀察給藥90，180 d時大鼠的生長發(fā)育、血液學、血液生化學、組織病理變化及停藥30 d時上述指標的變化。結(jié)果小鼠口服通脈活血靈膠囊的最大耐受量為36.0 g /kg。大鼠連續(xù)給藥90 d時， 9.0 g /kg肌酐比空白對照組升高（P<0.01）；腎重量系數(shù)增高（P<0.01）； 2只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎小管內(nèi)可見紅細胞管型，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤；2只大鼠肝細胞脂肪變性。給藥180 d時，9.0 g /kg和4.5 g /kg劑量組肌酐升高（P<0.01或P <0.001）； 9.0 g /kg劑量組總蛋白升高（P<0.01）;肝、腎臟系數(shù)增高（P<0.01）； 3只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。2只大鼠肝細胞輕度脂肪變性；停藥30 d后，大鼠體重、攝食量、活動、外周血象、重要器官臟器系數(shù)均正常，病理學檢查各組各臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯改變。 結(jié)論 通過對通脈活血靈膠囊180 d用藥過程中各項指標反應(yīng)的觀察認為，通脈活血靈膠囊在規(guī)定劑量下服用是安全可靠的。

關(guān)鍵詞：通脈活血靈膠囊； 急性毒性； 小鼠； 大鼠； 長期毒性

Toxicologic Study on Tongmaihuoxueling Capsule

Abstract：Objective To observe the acute toxicity in mice and the long-period toxicity Tongmaihuoxueling Capsule(TMHXL) in rats. Methodsthe maximum administration dosage(MAD) of TMHXL were determined by iq administration in mice . Body weight，hematological and hematobiochemical parameters，coefficient and histomorphological figure of organs(the heart， liver， spleen ，lungs， kidneys， adrenals， testes， prostate， paucreas， uterus， brain， thymus) were examined in 90 days，180 days and 30 days after the cessation of TMHXL. ResultsThe MAD of TMHXL by iq administration was greater than 36.0g/kg in mice. In the long-period toxicity test ， after administered repeatedly for 90 days， in 9.0g/kg dose group， Crea increased（P<0.01）; the epithelium cells edema of proximal convoluted tubule and fat degened， lumens broadend in two， the fat in liver cells were degenerated in two rats. After administerd repeatedly for 180 days， in the 9.0 g/kg dose groups，the TP and Crea increased(P<0.01orP<0.05);The weight coefficients of kidneys and liver were larger in high dose group than that of in control group; the epithelium cells edema of proximal convoluted tubule and fat degened， lumens broadend in three; the fat in liver cells were degenerated in two rats. In the 4.5 g/kg dose groups the Crea increased(P<0.05). In 30 days after stopping the drug， the changes of Crea， TP， hematobiochemical，pathological and coefficient of organs could completely recover. ConclusionIt could be concluded that TMHXL is safe to be administrated in the dose prescribed .

Key words：Tongmai-huoxueling Capsule; Acute toxicity; Rat; Mouse； Long-period toxicity 通脈活血靈膠囊是以“益氣活血、通經(jīng)活絡(luò)”為治療原則組成的中藥復方，主要由丹參、川芎、三七、大黃、槐米等十幾味中藥組成，經(jīng)過工藝研究制成的膠囊劑。經(jīng)臨床試驗證明有降低血脂，改善血液流變性的作用［1］。藥效學實驗證明對實驗性高脂血癥大鼠有降低總膽固醇、甘油三酯，改善血流變，抑制血小板聚集等作用［2］。對家兔實驗性動脈粥樣硬化有明顯的抑制作用［3］。為給臨床用藥提供安全的實驗依據(jù)，本文對通脈活血靈膠囊進行了毒理學研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 動物昆明種小鼠，18~22 g，合格證號：第04035；SD大鼠，80~100 g（6周齡），合格證號：第04036，均由河北省實驗動物中心提供。動物實驗室環(huán)境：溫度18~25℃，濕度45%~55%。

1.1.2 藥物 通脈活血靈膠囊，由河北省醫(yī)學科學院藥物研究室研制，批號：20000326。實驗前用蒸餾水配成不同濃度的混懸液灌胃使用。

1.1.3 儀器Eppendorf EcomF 6124型半自動生化分析儀，德國倍肯公司； CA500型自動血球計數(shù)儀，日本AITAIKE公司的；JA2003型電子天平，上海精密科學儀器有限公司。

1.1.4 試劑盒AST（石家莊試劑廠，20001015）、ALT（保定長城，20000620）、ALP（保定長城，20001117）、BUN（保定長城，20001309）、TP（保定長城，20000708）、ALB（保定長城，20001020）、GLU（保定長城，20001109）、TBIL（保定長城，20001201）、Crea（保定長城，20001123）、TCHO（北京中生，000901）。

1.2 方法

1.2.1 小鼠口服急性毒性實驗根據(jù)預實驗結(jié)果，未測出通脈活血靈膠囊iq給藥的LD50，因此取20只小鼠，按文獻方法［4］實驗，禁食12 h，以質(zhì)量體積分數(shù)為40%的給藥濃度，0.4 ml/10g體重的給藥體積，2次/d，間隔6 h，iq復方消經(jīng)痛膠囊每次16 g /kg，觀察14 d，記錄動物死亡及毒副反應(yīng)癥狀。實驗結(jié)束時，將全部動物處死，解剖，肉眼檢查主要臟器組織病變情況，計算小鼠口服復方消經(jīng)痛膠囊的最大耐受量。

1.2.2 大鼠長期毒性實驗［5，6］將大鼠按性別和體重隨機分為4組，空白對照組和高劑量組（9.0 g /kg）每組40只，中(4.5 g /kg)、低劑量組（1.5 g /kg）每組30只，雌雄各半。各組均灌胃給藥，每周灌胃6 d，給藥體積為30 ml/kg體重，對照組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)給藥180 d。給藥前及給藥期間每周稱動物體重1次，并按平均體重調(diào)整給藥量。實驗期間每天觀察大鼠一般狀態(tài)、體征、攝食量、飲水及糞便狀況。每周稱體重、攝食量1次，了解對動物體重和進食的影響。給藥90 d，于末次給藥后24 h，空白對照組和高劑量組各抽取大鼠10只（♀5 ♂5）；給藥180 d，于末次給藥后24 h空白對照組和各給藥組各抽取14只大鼠（♀7 ♂7）；停藥后30 d各組抽取8只大鼠（♀4 ♂4），用烏拉坦麻醉，從腹主動脈取血，分三批殺取動物，檢查血液學和血液生化學指標。血液學檢查項目為：血色素（Hb）、血小板（PLT）、紅細胞計數(shù)（RBC）、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（RC）、白細胞計數(shù)（WBC）、白細胞分類（DC）、凝血時間。血液生化學檢查項目為：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBIL）、肌酐（Crea）、總膽固醇（TCHO）。取血后立即剖取動物心、肝、腎、脾、肺、腎上腺、甲狀腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、腦、前列腺等臟器稱重，根據(jù)體重計算器官重量系數(shù)；進行肉眼觀察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作組織切片，HE染色，光鏡下檢查病理學變化。

2 結(jié)果

2.1 小鼠急性毒性實驗2次/d iq通脈活血靈膠囊32.0 g /kg后，動物活動，進食進水未見任何異常。觀察14 d動物無死亡。肉眼尸檢未見主要臟器組織明顯異常。通脈活血靈膠囊小鼠口服最大給藥量>32.0 g /kg。

2.2 大鼠長期毒性實驗

2.2.1 對大鼠一般狀況的影響

給藥180 d及停藥30 d期間，高、中劑量組和空白對照組各死亡動物1只，肉眼尸檢未見明顯病變。高劑量組給藥后20 d后攝食量梢有增加，部分動物軟便；其余各組大鼠的自主活動、飲水、攝食、排泄等均未見異常反應(yīng)。各給藥組動物在各時間的體重分別與對照組體重比較，均無明顯差異。實驗結(jié)果表明，通脈活血靈膠囊連續(xù)用藥180 d，對大鼠的生長發(fā)育等一般狀況無毒性影響。結(jié)果見表1。表1 復方消經(jīng)痛膠囊連續(xù)給藥90 d、180 d和停藥30 d對大鼠一般情況和體重的影響（略）

2.2.2 對血液學的影響通脈活血靈膠囊各給藥劑量組對大鼠連續(xù)給藥90 d和180 d和停藥后30 d，各血液學檢查指標與對照組比較均無顯著性差異，并且均在正常值范圍。結(jié)果見表2。表明連續(xù)服用通脈活血靈膠囊180 d，對各給藥組大鼠血象基本無明顯影響。表2 對大鼠血液學的影響（略）

2.2.3 對血液生化指標的影響通脈活血靈膠囊連續(xù)給藥90 d，9.0 g/kg組肌酐較對照組升高（P<0.01）；給藥180 d時，9.0 g/kg劑量組總蛋白、肌酐升高（P<0.05或P<0.001）；4.5 g/kg劑量組肌肝生高（P<0.05）；其它檢測值均正常。停藥30 d（恢復期）各組大鼠生化指標均無異常。結(jié)果見表3。連續(xù)服用通脈活血靈膠囊180 d時引起的肌肝、總蛋白升高。停藥后30 d恢復正常。表3 對大鼠生化指標的影響（略）

2.2.4 通脈活血靈膠囊對大鼠主要臟器系數(shù)的影響通脈活血靈膠囊連續(xù)服用90 d時，各組大鼠各主要臟器重量系數(shù)與空白對照組比較，高劑量組腎重量系數(shù)增高（P<0.01）。連續(xù)給藥180 d，9.0 g/kg組肝、腎重量系數(shù)增高（P<0.05或P<0.01），中劑量組腎重量系數(shù)增高（P<0.01）。恢復期時各個劑量組臟器重量系數(shù)與空白對照組比較均無明顯差異。說明通脈活血靈膠囊連續(xù)服用180 d中，高劑量組大鼠的腎臟和肝臟重量系數(shù)有一定影響，停藥后可恢復。對其余各給藥劑量組各臟器系數(shù)無明顯影響。表4 對大鼠主要臟器系數(shù)的影響（略）

2.2.5 通脈活血靈膠囊對大鼠重要器官組織病理形態(tài)的影響連續(xù)給藥90 d時，高劑量組2只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎小管內(nèi)可見紅細胞管型，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。2只大鼠肝細胞脂肪變性。給藥180 d時，高劑量組3只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。2只大鼠肝細胞輕度脂肪變性。其余各臟器未見明顯異常改變。停藥恢復30 d時，各給藥劑量組大鼠各臟器組織病理切片未發(fā)現(xiàn)病理改變。

3 討論

3.1 通脈活血靈膠囊成人臨床用量為0.13 g/kg ，小鼠2次/d iq通脈活血靈膠囊32.0 g/kg，相當于臨床成人（按60 kg計）每日口服劑量的256倍，屬實際無毒級［7］。

3.2 通脈活血靈膠囊9.0，4.5，1.5 g/kg 3個劑量（相當于臨床用量的90，45，15倍）灌胃SD大鼠，1次/d，連續(xù)90 d，高劑量組與空白對照組比較，服藥20 d后部分攝食量梢有增加，軟便；對大鼠的其它狀態(tài)（外觀形態(tài)、活動、飲水等）無明顯影響；血液學檢查未發(fā)現(xiàn)明顯毒性作用。血液生化檢查，高劑量組動物肌酐值增高（P<0.01）；腎重量系數(shù)增大（P<0.01）；病理學檢查，高劑量組2只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎小管內(nèi)可見紅細胞管型，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。2只大鼠肝細胞脂肪變性。連續(xù)給藥180 d時，高劑量組動物血清肌酐值增高（P<0.01），總蛋白增高（P<0.05）；肝、腎重量系數(shù)增大（P<0.05，P<0.01）；中劑量組腎臟重量系數(shù)增高（P<0.01）。病理學檢查，高劑量組3只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤；2只大鼠肝細胞輕度脂肪變性。停藥30 d，各個劑量組各項檢查與空白對照組比較均無明顯差異。說明通脈活血靈膠囊連續(xù)服用180 d中，高劑量組大鼠的腎臟和肝臟功能，重量系數(shù)和組織形態(tài)學有一定毒性影響，但停藥30 d后可恢復。提示肝、腎損傷的患者長期服用時應(yīng)檢測肝腎功能。綜合分析認為，通脈活血靈膠囊在規(guī)定劑量下服用是安全可靠的。

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［5］袁伯俊，王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐［M］.北京：軍事醫(yī)學科學出版社，1997：23.

［6］周立國.藥物毒理學［M］.武漢：湖北科學出版社，2001：20.

［7］趙秀文.談新藥毒理實驗的技術(shù)要求［J］.中藥通報，1988，13（7）：53.