作者：劉月鳳，陳建文，龔朋飛，袁慧

【關鍵詞】 杜仲；，，亞慢性毒性

摘要：目的研究不同劑量的杜仲提取物水溶液對小鼠亞慢性毒性作用，為臨床應用提供依據。方法給實驗小鼠灌服不同劑量的杜仲提取物水溶液。在實驗中、末期停藥后24 h，分別取血測定血液學、血液生化和主要臟器指標，并作病理切片。結果灌胃中、低劑量（2.06 g/kg，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液，能夠提高小鼠血紅蛋白含量和紅細胞數（P＜0.01），對白細胞分類計數無影響，同時能夠提高小鼠體重、總蛋白及白蛋白含量（P＜0.01），對脾臟、肝臟、心臟、肺臟、腎、性器官指數及血清酶活性無影響（P＞0.05）。結論杜仲提取物對受試動物未見有明顯毒性作用。

關鍵詞：杜仲； 亞慢性毒性

Studies on the Subchronic Toxicology of Eucommia ulmoides Extract

Abstract：ObjectiveTo research the effect of Eucommia ulmoides extract solution on mice subchronic toxicity，to provide basis for clinical use.MethodsGave experiment mice different doses of Eucommia ulmoides extract solution，in mediumterm and after administration for 24 h， blood physiological， blood chemistry，the main viscera coefficient were tested.ResultsBy gastrogavage，the middle and low dose of Eucommia ulmoides extract solution improved the content hemoglobin(Hb) and red blood cell count，but had no effect on white blood cell count (P＜0.01). It increased mice weigt、total protein content、white protein content (P＜0.01) ，but had no effect on indexes of spleen， live， heart， lung， kidney， sexual organ and the activation of serum enzyme (P＞0.05) .ConclusionEucommia ulmoides extract has no toxicity to mice.

Key words:Eucommia ulmoides; Subchronic toxicity 我國對杜仲（Eucommia ulmoides）的利用歷史悠久，近幾年我國學者在杜仲的生物學、化學成分、生理生化等方面做了許多研究，已知杜仲的化學成分主要有：（1）木脂素類；（2）環烯醚萜類；（3）酚類化合物等，唐建軍［1］、李家實等［2］認為，杜仲中有效成分對動物血壓有雙向調節功能。唐建軍等［1］報道：杜仲含有豐富的VE和 β-胡蘿卜素，有延緩衰老、增強機體免疫體力作用。為了更好地開發利用杜仲，我們探索了張家界產杜仲提取物（以下簡稱杜仲提取物）對動物亞慢性毒性作用，并為臨床應用提供一定的理論依據。

1 材料

1.1 藥品與動物杜仲提取物：主要成分：80%氯原酸，由張家界恒興生物科技公司提供。昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，8周齡，購于湖南中醫學院實驗動物中心，批號：990218。

1.2 儀器ES-C300A電子天平，湘儀天平儀器廠。MD-100自動生化分析儀器儀。美國 Leyte Drive Torranle化學儀器公司生產。

2 方法與結果

2.1 小鼠最大耐受量采用最大給藥量［3］法，在預試基礎上，取小鼠100只，雌雄各半，體重（20±2）g，隨機分成5組，分次灌服不同劑量杜仲提取物水溶液0.5 ml/次，觀察7 d內動物死亡數，同時觀察動物一般狀況及活動情況。結果見表1。動物在7 d內均無異常反應，考慮到杜仲的濃度以及小鼠的灌胃容積都已達到最大，因此，杜仲提取物的小鼠灌胃最大給藥量應大于18.52 g/kg。按小鼠的平均體重為20 g，成人平均體重60 kg，成人每日用量6~9 g［4］計算，小鼠的最大耐受倍數=18.52×60/9=124（倍），故認為本藥具有較大的安全性。

2.2 杜仲提取物對小鼠的亞慢性毒性實驗［5，6］取健康小鼠80只，體重為（20±2） g，雌雄各半，分籠顆粒飼料喂養，將小鼠隨機分為3個劑量組6.17，2.06，0.69 g/kg和1個對照組（生理鹽水）。各組分別以0.5 ml/次容量灌胃：1次/ d，連續8周，每周停藥2 d，期間每周稱重，并根據體重調整藥量。同時觀察動物的一般體征。實驗中、末期停藥后24 h，測定血液學指標 Hb，RBC，WBC和白細胞分類計數（DC）及血液生化指標（TP，ALB，AST，ALT，BUN，ALP和GLu），兩次采血后分兩批處死動物，對（心、肝、脾、肺、腎、性腺）主要臟器計算臟器重量系數，并做病理切片檢查。

表1 小鼠灌胃給藥最大耐受量（MTD）的測定(略)

2.2.1 杜仲提取物對小鼠體重的影響結果由表2可看出，各組小鼠在第4，8周時，中、低劑量組（2.06，0.69 g/kg）與對照組差異極顯著（P＜0.01），出現明顯的增重。第8周時，高劑量組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。

2.2.2 小鼠血液學指標的變化結果見表3。由表3可知，實驗第4，8周時，濃度為2.06，0.69 g/kg杜仲的提取物能夠顯著提高小鼠的Hb含量及RBC（P＜0.01）。在6.17 g/kg的濃度水平下，第4周杜仲提取物顯著提高小鼠的 Hb含量及RBC（P＜0.05），第8周與對照組比較無顯著差異（P＞0.05）；實驗組N，L，E，M計數與對照組比較均差異不顯著（P＞0.05）。

2.2.3 杜仲提取物對小鼠血液生化指標的影響結果見表4。由表4可知，第4，8周，中、低劑量組TP、ALB含量均極顯著的高于對照組（P＜0.01）。TP含量高劑量組第4周高于對照組（P＜0.05），第8周則無差異顯著性（P＞0.05）；ALB含量第4周與對照組比較差異不顯著（P＞0.05）；第8周低于對照組（P＜0.05）；G的含量第4周高劑量組和第8周各組高于對照組（P＜0.05）；BUN含量高劑量組與對照組相比差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組與對照組無顯著差異（P＞0.05）。

表2 小鼠平均體重變化(略)

每組均與對照組比較，*表示5%的顯著水平，**表示1%的極顯著水平（下同）

表3 小鼠血液學指標(略)

動物數上排為給藥后4周，下排為第8周停藥后2 d（下同）

表4 小鼠血液生化指標(略)

2.2.4 杜仲提取物對小鼠主要臟器的影響由表5可知，各實驗組臟器指數與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

表5 小鼠主要器官指數(略)

2.2.5 杜仲提取物對小鼠病理組織形態學的觀察實驗中、末期分別對小鼠進行剖檢，觀察各組織器官未見明顯的眼觀病理變化，對各組臟器進行鏡檢，均未見有意義的病理組織學改變。

3 討論

通過MTD實驗觀察，小鼠精神狀態良好，無死亡發生，給藥后的第8天處死動物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等均無異常發生，說明小鼠對杜仲提取物MTD應大于18.52 g/kg，相當于體重為60 kg的成人用量（6~9 g）的124倍。根椐有關資料［7］，中藥的安全性以小鼠能耐受人用量的100倍以上為安全，故認為本品具有很大的安全性。對小鼠體重檢測表明：中、低劑量（2.06，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液能極顯著提高小鼠的體重（P＜0.01），高濃度的杜仲提取物長時間飼喂小鼠無增重作用。王介慶等［8］用杜仲活性成分提取液對肉雞增重實驗中也有增重，本研究結果證實了這一點。血液學指標檢測表明：中、低劑量杜仲提取物水溶液能極顯著提高小鼠的 Hb含量和RBC（P＜0.01）。高劑量（6.17 g/kg）的杜仲提取物水溶液在第4周時顯著提高小鼠的紅細胞數、血紅蛋白含量（P＜0.05），第8周時則無此作用。杜仲提取物對小鼠WBC及WBC的分類計數無明顯影響。血液生化檢測結果表明：中、低劑量杜仲提取物水溶液能極顯著提高TP，ALB的含量，對血清酶AST，ALT的活性無明顯影響，這說明機體的新陳代謝加強，對養分的利用率升高，從而促進了小鼠的生長。高劑量杜仲提取物水溶液在第4周時能提高TP，ALB含量，第8周時則無此作用，但卻提高了AST，ALT的活性，結合有關資料［9］，推測高劑量的杜仲提取物有可能影響了肝臟的功能，從而使機體的養分利用降低。BUN的含量在杜仲提取物濃度為2.06，0.69 g/kg時無顯著性差異，在高劑量作用下，明顯升高，推測高劑量時有可能使腎機能受到影響。實驗期對ALP及GLu的含量無明顯影響，說明6.17 g/kg劑量以下的杜仲提取物對ALP及GLu無影響。臟器指數檢測結果表明：本品對脾臟、肺臟、心臟、腎臟、性器官指數無明顯影響，說明杜仲提取物在6.17 g/kg劑量水平以下，不損害以上臟器。以上實驗結果可知，張家界產杜仲提取物對受試動物無明顯毒性作用。

［1］ 唐建軍，張祿源，何鳴筱，等.杜仲的研究與應用進展［J］.植物學通報，1998，（15）6：47.

［2］ 李家實，閻玉凝.杜仲皮與杜仲葉化學成分初步研究［J］.中藥通報，1986，11（8）：41.

［3］ 中華人民共和國衛生部藥政管理局.中藥新藥研究指南（藥學、藥理學、毒性學分冊）［M］.1994：205.

［4］ 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2000：131.

［5］ 陳 奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛生出版社，1993：113.

［6］ 張 銑，劉毓谷.毒理學［M］.北京：北京醫科大學，中國協和醫科大學聯合出版社，1997：230.

［7］ 秦伯益.新藥評價概論，第2版［M］.北京：人民衛生出版社，1998：154.

［8］ 王介慶，王洪斌，朱鑒生.杜仲活性成分提取液在家禽生產中的應用［J］.中國家禽，1999，21（6）：29.

［9］ 陳 龍，高 偉，王怡豐等.CCL4誘發肝損傷過程中血液細胞免疫功能的變化［J］.環境與健康雜志，2001，18（2）：83.