作者：李蘭芳 李國風(fēng) 解麗君 張勤增 李存滿 梁良 郝娜 張建新

【關(guān)鍵詞】 消經(jīng)

摘要：目的觀察動物口服復(fù)方消經(jīng)痛膠囊的急性毒性和長期毒性反應(yīng)。方法采用最大給藥量法測定小鼠口服復(fù)方消經(jīng)痛膠囊的急性毒性；以8.0，4.0，2.0 g /kg 3個劑量的復(fù)方消經(jīng)痛膠囊（相當(dāng)臨床用量80、40、20倍) iq SD大鼠，連續(xù)90 d，觀察服藥90 d及停藥第14天時，大鼠的生長發(fā)育、血液學(xué)、血液生化學(xué)、組織病理指標(biāo)的變化。結(jié)果小鼠1 d內(nèi)iq復(fù)方消經(jīng)痛膠囊最大給藥量為40 g/kg，相當(dāng)于臨床擬給藥量的400倍。長期毒性實驗中，給藥90 d，高劑量組肝臟、脾臟、腎臟、睪丸的重量系數(shù)高于對照組（P<0.05或P<0.01）;中劑量組肝臟重量系數(shù)增高（P<0.05）。病理學(xué)檢查顯示，高劑量組2只大鼠肝細胞可見點狀壞死，4只大鼠脾臟白髓細胞疏松分布，各只雄性大鼠睪丸生精小管管腔直徑增大，各層生精上皮細胞數(shù)目增多。中劑量組雄性大鼠睪丸內(nèi)可見局灶性睪丸間質(zhì)細胞增生。停藥14 d后，高劑量組大鼠除睪丸重量系數(shù)與對照組比較仍高（P<0.01）外，其余均正常。病理學(xué)檢查，高劑量組大鼠睪丸組織仍有上述改變，其它臟器正常。結(jié)論復(fù)方消經(jīng)痛膠囊在規(guī)定劑量下服用是安全可靠的。

關(guān)鍵詞：復(fù)方消經(jīng)痛膠囊； 急性毒性； 長期毒性

Toxicologic Study on Fufang Xiaojingtong Capsule

Abstract:ObjectiveTo abserve the acute toxicity in mice and the long-period toxicity Fufang Xiaojingtong Capsule(FFXT) in rats.MethodsThe maximum administration dosage(MAD) of FFDX were determined by iq administration in mice . 80 SD rats were randomly pided into four groups: high， middle， and low dose of FFXT and control group. FFXT was continuously administrated for 90 days. When the experiment was finished and withdrawed for 14 days， rats were killed and the growth condition， blood cell counting and biochemical targets were measured. Histomorphological examination were simultaneously performed. ResultsThe MAD of FFXT by iq administration was greater than 40.0g/kg in mice. In the long-period toxicity test， the weight coefficients of livers，spleens，kidneys and testis were larger in high dose group than that of in control group. The punctiform necrosis in the liver were found in two rats for high dose group. The white pulp cells in spleen were rarefactively distributed in four rats for high dose group. The seminiferous tubule diameter of testis and the amout of seminiferous epithelial cells increased in male rats. Focal in terstitical cells of testis were propagated in male rats for middle dose group. The weight coefficients of testis were larger only in high dose group than control group at the 14 days after withdrawal. ConclusionIt could be concluded that FFXT is safe to be administrated in the dose prescribed .

Key words:FuFang XiaoJingtong Capsule; Acute toxicity; Long-period toxicity

復(fù)方消經(jīng)痛膠囊是由黃芪、白芍、當(dāng)歸和香附等9味中藥組成。具有活血通絡(luò)，調(diào)經(jīng)止痛的功效，主要用于治療婦女原發(fā)性和繼發(fā)性痛經(jīng)，對于月經(jīng)不調(diào)也有較好的治療作用。本研究對其毒理學(xué)進行了研究，為臨床應(yīng)用提供安全性依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物昆明種小鼠，18～22 g，雌雄各半，合格證號：醫(yī)動字第070102； SD大鼠，80～90 g（6周齡），雌雄各半，合格證號：<醫(yī)動字>：070101，均由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。動物實驗室環(huán)境：溫度18～25℃，濕度45%～55%。

1.1.2 藥物復(fù)方消經(jīng)痛膠囊，批號：020325，河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究室研制，實驗前將膠囊內(nèi)藥粉用蒸餾水配制成各劑量組灌胃所需濃度的懸浮液。

1.1.3 儀器Eppendorf Ecom-F 6124型半自動生化分析儀，德國倍肯公司； CA-500型自動血球計數(shù)儀，日本AITAIKE公司的；JA2003型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠口服急性毒性實驗根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，未測出復(fù)方消經(jīng)痛膠囊iq給藥的LD50，因此取20只小鼠，按文獻方法［1］實驗，禁食12 h，以質(zhì)量-體積分?jǐn)?shù)為50%的給藥濃度，0.4 ml/10 g體重的給藥體積，2次/d，間隔6 h，iq復(fù)方消經(jīng)痛膠囊每次20 g/kg，觀察14 d，記錄動物死亡及毒副反應(yīng)癥狀。實驗結(jié)束時，將全部動物處死，解剖，肉眼檢查主要臟器組織病變情況，計算小鼠口服復(fù)方消經(jīng)痛膠囊的最大耐受量。

1.2.2 大鼠長期毒性實驗［2，3］實驗前將大鼠在動物實驗室飼養(yǎng)觀察1周，按性別和體重隨機分為4組，空白對照組、復(fù)方消經(jīng)痛膠囊3個劑量組（8.0，4.0，2.0 g /kg）（相當(dāng)臨床用量80，40，20倍)，每組20只，雌雄各半。各組均iq給藥，給藥體積為20 ml/kg體重，于每天上午灌胃給藥1次，空白對照組灌等體積蒸餾水，連續(xù)90 d。給藥前及給藥期間每周稱動物體重1次，并根據(jù)體重變化調(diào)整給藥體積。實驗期間每天觀察大鼠一般狀態(tài)、體征、攝食量、飲水及糞便狀況。于末次給藥后24 h，對照組和各給藥組各抽取大鼠14只（♂7 ♀7）；停藥后第14天各組抽6只（♂3 ♀3），用20%烏拉坦麻醉，從腹主動脈取血，檢查血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)。血液學(xué)檢查項目有：血紅蛋白（HGB）、血小板（PLT）、紅細胞計數(shù)（RBC）、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)（WBC）、白細胞分類（DC）、凝血時間。血液生化學(xué)檢查項目有：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（T-BIL）、肌酐（Grea）、總膽固醇（T-CHO）。取血后立即剖取動物心、肝、腎、脾、肺、腎上腺、甲狀腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、腦、前列腺等臟器稱重，根據(jù)體重計算器官重量系數(shù)。并進行肉眼觀察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作組織切片，鏡下檢查病理學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 小鼠口服急性毒性實驗2次/d灌服復(fù)方消經(jīng)痛膠囊40.0 g /kg后，動物活動，進食進水未見任何異常。觀察14d動物無死亡。肉眼尸檢未見主要臟器組織明顯異常。復(fù)方消經(jīng)痛膠囊小鼠口服最大給藥量>40.0 g/kg。此劑量是臨床成人（按60 kg計）每日口服劑量0.1 g/kg的400倍，屬實際無毒級［4］。

2.2 大鼠長期毒性實驗

2.2.1 一般狀況給藥90 d及停藥14 d期間，動物無一例死亡，各組大鼠的自主活動、飲水、攝食、排泄等均未見異常反應(yīng)。各給藥組動物在各時間的體重分別與對照組體重比較，均無明顯差異。實驗結(jié)果表明，復(fù)方消經(jīng)痛膠囊連續(xù)用藥90 d，對大鼠的生長發(fā)育（體重增長）無毒性影響。結(jié)果見表1。

2.2.2 血液學(xué)指標(biāo)給藥90 d及停藥第14天后，各給藥組大鼠血液學(xué)指標(biāo)（RBC、HGB、PLT、WBC及分類）與空白對照組比較，差異無顯著性意義，并且均在正常值范圍。因此認為，復(fù)方消經(jīng)痛膠囊連續(xù)用藥90 d和停藥第14天，對大鼠的外周血象無明顯影響。結(jié)果見表2。

2.2.3 血液生化學(xué)指標(biāo)給藥90 d后及停藥第14天后，各給藥組血液生化學(xué)指標(biāo)（AST，ALT，ALP，BUN，TP，ALB，GLU，T-BIL，Crea，T-CHO）與空白對照組比較，均無明顯差異。結(jié)果見表3。

表1 連續(xù)給藥90 d及停藥14 d對大鼠一般情況和體重的影響（略）

表2 連續(xù)給藥90 d及停藥14 d對大鼠血象的影響（略）

表3 連續(xù)給藥90 d及停藥14 d對大鼠生化指標(biāo)的影響（略）

2.2.4 臟器系數(shù)給藥90 d，各給藥組大鼠的主要臟器系數(shù)與空白對照組比較，高劑量組肝臟、脾臟、腎臟、睪丸的重量系數(shù)高于對照組（P<0.05或P<0.01）;中劑量組肝臟重量系數(shù)增高（P<0.05）。停藥第14天后，除高劑量組睪丸重量系數(shù)仍然高于對照組（P>0.01）外，其余各組各臟器系數(shù)與空白對照組比較均無明顯差異。結(jié)果見表4。

表4 大鼠連續(xù)給藥90 d及恢復(fù)14 d臟器系數(shù)（略）

2.2.5 病理組織學(xué)檢查給藥90 d，肉眼觀察各給藥組臟器未見明顯改變。病理組織學(xué)檢查顯示，高劑量組2只大鼠（♂1♀1）肝細胞可見點狀壞死，淋巴細胞浸潤； 4只大鼠（♂2♀2）脾臟白髓細胞疏松分布，動脈周圍淋巴鞘內(nèi)T淋巴細胞數(shù)目減少，淋巴小結(jié)結(jié)構(gòu)模糊，脾竇內(nèi)含鐵血黃素數(shù)目增多；雄性（♂10）大鼠睪丸生精小管管腔直徑增大，各層生精上皮細胞數(shù)目增多，尤以精原細胞、初級精母細胞數(shù)目增多明顯，各生精小管間的睪丸間質(zhì)細胞數(shù)目增多。中劑量組雄性（♂10）大鼠睪丸內(nèi)可見局灶性睪丸間質(zhì)細胞增生，但生精小管管腔直徑增大、上皮細胞數(shù)目增多不明顯。其余各組各臟器未見異常。停藥第14天，高劑量組大鼠睪丸組織的改變未見明顯減輕，肝臟、脾臟等其它臟器均正常。中、低劑量組各動物各臟器同對照組比較均未見異常。

3 結(jié)論

3.1 復(fù)方消經(jīng)痛膠囊推薦成人臨床用量最高為0.1g/(kg?d)，小鼠1 d口服最大給藥量為40 g/kg，相當(dāng)于成人用量的400倍。 3.2 復(fù)方消經(jīng)痛膠囊按8.0，4.0，2.0 g /kg 3個劑量（分別為成年人臨床用量的80倍，40倍，20倍）給大鼠灌胃，連續(xù)90 d，大鼠一般狀況、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)均未見異常。高劑量組（8.0 g /kg）肝臟、脾臟、腎臟、睪丸重量系數(shù)較對照組增高（P<0.05或P<0.01），中劑量肝臟重量系數(shù)增高（P<0.05）。病理組織學(xué)檢查顯示，高劑量組2只大鼠肝細胞可見點狀壞死，淋巴細胞浸潤；4只大鼠脾臟白髓細胞疏松分布，動脈周圍淋巴鞘內(nèi)T淋巴細胞數(shù)目減少，淋巴小結(jié)結(jié)構(gòu)模糊，脾竇內(nèi)含鐵血黃素數(shù)目增多；雄性大鼠睪丸生精小管管腔直徑增大，各層生精上皮細胞數(shù)目增多，尤以精原細胞、初級精母細胞數(shù)目增多明顯，各生精小管間的睪丸間質(zhì)細胞數(shù)目增多。中劑量組雄性大鼠睪丸內(nèi)可見局灶性睪丸間質(zhì)細胞增生，但生精小管管腔直徑增大、上皮細胞數(shù)目增多不明顯。其余各組各臟器未見異常。停藥14 d后大鼠的一般狀況、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)均正常。臟器重量系數(shù)除高劑量組睪丸系數(shù)仍比對照組高（P<0.01）外，其余均恢復(fù)正常。病理組織學(xué)檢查，高劑量大鼠睪丸組織改變未見明顯減輕，其余各組各臟器均正常。提示該藥在大劑量長期服用，可使肝、脾和睪丸組織發(fā)生改變，肝臟和脾臟的改變是可逆的，停藥后可恢復(fù)。睪丸的組織改變是藥理作用還是毒性反應(yīng)有待進一步研究。復(fù)方消經(jīng)痛痛膠囊在臨床上以治療痛經(jīng)和月經(jīng)不調(diào)，一般情況下是女性服用，綜合實驗結(jié)果認為，該藥在規(guī)定劑量下服用是安全可靠的。

［1］ 國家藥品監(jiān)督管理局.中藥新藥研究的技術(shù)要求［S］.1999：11. ［2］ 袁伯俊，王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐［M］.北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997：23. ［3］ 周立國.藥物毒理學(xué)［M］.武漢：湖北科學(xué)出版社，2001：20. ［4］ 趙秀文.談新藥毒理實驗的技術(shù)要求［J］.中藥通報，1988，13（7）：53.