[摘要] 目的:探討自組裝短肽納米纖維凝膠支架可能的創傷修復機制并驗證`其修復效果。方法:以短肽納米纖維為修復原料，利用深Ⅱ度和Ⅲ度皮膚燒傷動物模型，驗證生物材料對燒傷創面的影響。結果:RADA16 -Ⅰ處理組燒傷創面及其周圍正常組織的毛發生長旺盛(P<0.05)，在燒傷后急性修復期(24 h)創面根部毛囊和腺體中角蛋白19強表達。結論:自組裝短肽納米纖維凝膠支架對深度燒傷皮膚創面毛發等附屬器官有保護及促進作用。 [關鍵詞] 燒傷;美學修復;納米纖維 [Abstract] Objective: To explore the effect of peptide RADA16-I on aesthetic repair of burn wounds. Methods: Observed regeneration of hair and glands after repair by means of RADA16-Ⅰdressing utilizing deep Ⅱ degree and Ⅲ degree skin burn wounds as models. Results: The hairs of burn wounds and around normal organization were vigorous growth in RADA16-Ⅰ group(P<0.05)， keratin 19 of wounds roothair follicle and glands was strong expression in acuterepairstage(24 h)after burn. Conclusion: Hair growth on the deep burn wound after repair is more vigorous by means of RADA16-Ⅰcompared with those utilizing other biological materials. [Key words] Burn;Aesthetic repair;Nano-fibrer 皮膚燒傷創面是一種特殊的皮膚創傷，人們越來越重視皮膚燒傷后創面的修復的外觀。健全和良好的皮膚修復取決于皮膚結構完整再生。在深度燒傷創面修復，再生的皮膚結構差，可能導致瘢痕攣縮和畸形。腺體、毛發等皮膚附屬器官的再生作為評價皮膚燒傷創面美學修復的指標。頭發的深度燒傷創面修復時由于感染，延遲愈合等原因，肉芽組織過度填充代替正常上皮增生，而造成瘢痕。筆者通過觀察短肽處理的深度燒傷皮膚表面的毛囊增生及燒傷創面早期分化表皮干細胞的表面標志角蛋白19的表達進行研究[1-2]。 1材料與方法 1.1實驗敷料 自組裝肽:RADA16 -Ⅰ(PuraMatriTM，1%質量/體積，分子理論質量= 1 712.9道爾頓)購買自3DM公司(劍橋，麻省)。以純水稀釋成溶液(質量/體積)。1%和0.5%RAD16 -Ⅰ肽在稀釋后4℃儲存備用。 1.2動物 16只雌性SD大鼠購自四川大學華西醫學中心實驗室，重量250～290 g。實驗前半小時腹腔注射10%水合氯醛(25 ml/kg體重)給予麻醉。注射后，動物轉移到溫暖的環境中以保持動物的體溫。刮去SD大鼠背部的毛發，75%的醫用酒精消毒。應用溫控電子金屬探頭[3]，脊柱兩側使兩個對稱部位制造直徑<3.0 cm的燙傷創面。傷口邊緣清晰。深Ⅱ度燒傷溫控在90℃，持續時間為8 s，Ⅲ度燒傷創面18 s 94℃。每個深Ⅱ度燒傷創面給予50 μl短肽，Ⅲ度燒傷創面100 μl。每個傷口上覆蓋一層薄薄的凡士林紗布。傷口開始在1個星期后結痂。 1.3實驗分組 12只SD大鼠用于Ⅲ度燒傷創面模型，分為RADA16-Ⅰ組，殼聚糖組，膠原蛋白組，每組4只，分別以RADA16-Ⅰ，殼聚糖和膠原蛋白處理，并與空白對照組(4只)對比。觀察指標是燒傷皮膚表皮干細胞表面標志角蛋白19的表達。實驗方法是免疫熒光組織化學病理染色，觀測時間是傷后24 h、4 d、7 d。4組大鼠8個創面隨機分別用1%RADA16-Ⅰ治療，殼聚糖組和膠原蛋白組與空白對照組對比。采用HE染色。觀察時間:燒傷后30、60和70 d。 1.4傷口愈合的形態學研究 成形后的傷口，傷口的照片和采取的大體形態觀察傷口，包括每天的頭發燒傷創面及其周圍的增長。 1.5組織學檢查 在燒傷后30、60、70和80 d，切取燒傷創面皮膚，并將其周圍正常皮膚組織進行病理組織學檢查。然后，所有樣本分別固定在4%中性甲醛，酒精系列脫水，石蠟包埋。切取5 μm厚的連續切片進行HE染色。 1.6免疫熒光組織化學染色 5 μm厚的大鼠皮膚冰凍切片，空氣中干燥30 min。以免疫熒光分析法檢測反應傷口，傷口周圍的皮膚與正常皮膚表皮干細胞表面標志角蛋白19的表達。5%牛血清清蛋白中4℃孵育3 h去除非特異性結合蛋白(過氧化物酶標記鏈霉親和素，購買自北京中山金橋生物技術有限責任公司)。孵育的切片滴加抗體。初級抗體(小鼠單克隆抗角蛋白#19，1∶100稀釋，從美國Inc.TM購得)。標本在4℃ 12 h下，在二級抗體rhodammine(TRITC)羅丹明熒光探針標記的純羊抗鼠IgG(ZSGB生物北京)抗體，1 h避光4℃保存。然后切片滴加DAPI[6二瞇基 - 2 -苯基吲哚鹽酸鹽水合物，購自Sigma(D-9542)，1∶500]。陰性對照組，一抗用PBS代替。Olympus- X71-倒置萊卡DMRB免疫熒光顯微鏡觀測，并顯微攝影。短肽及空白實驗組的皮膚樣本，并在每組3個部分皮膚樣本中選擇視野，放大倍數是200 ×，隨機選擇6個視野。熒光共聚焦顯微鏡觀測樣本中收集到的序列圖像，使用圖像分析軟件Image Pro Plus 5.0合成總體光密度值。 1.7 統計學分析 所有的定量數據顯示為均值±標準差(x±s)。使用獨立樣本t檢驗，可信區間為95%。組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，其次是Turkey，正態分布式數據采用posthoc測試。 2結果 2.1毛囊生長 研究人員以病理染色方法觀察燒傷創面的毛發生長。該觀測時間分別為燒傷后30、60、70和80 d。與殼聚糖組，膠原蛋白組和空白對照組比較，RADA16-Ⅰ處理組燒傷創面及其周圍正常組織的毛發生長旺盛(P<0.05，圖1)。