【摘要】 目的 制備包載卡瓦的脂質體納米顆粒并研究其穩定性。方法 采用旋轉薄膜蒸發法制備卡瓦納米制劑，并對其形貌、大小等進行表征，考察納米顆粒的穩定性。結果 卡瓦脂質體納米顆粒平均粒徑為(99.7±7.6)nm，多分散系數為0.321±0.011，Zeta電位為(-33.9±2.3)mV，包封率為(83.32±0.34)%;納米溶液于4℃下放置60d，其納米粒外觀、粒徑及包封率無明顯變化，差異均無統計學意義(P>0.05)。結論 卡瓦脂質體納米顆粒的包封率較高，粒徑分布均勻，穩定性良好，為卡瓦的新劑型開發提供了實驗依據。

【關鍵詞】 卡瓦;脂質體;穩定性

Abstract:Objective To prepare the kavaloaded lipid nanoparticles from Piper methysticum and study their stability.Methods Kavaloaded lipid nanoparticles were prepared by rotaryfilm evaporation method， and their appearance， size and stability were observed.Results Mean size， polydispersity index，Zeta potential， and entrapment efficiency of kavaloaded lipid nanoparticles were 99.7 nm， 0.321，-33.9 mV， and 83.32%， respectively. Their appearance， size and entrapment efficiency showed no obvious changes after storage at 4℃ for 60 days. Conclusion The kavaloaded lipid nanoparticles have high entrapment efficiency， uniform particle size and good stability. The present study provides the experiment evidence for the development of novel dosage form of kava.

Key words: Piper methysticum (kava);lipid;stability

植物提取物卡瓦油是從南太平洋島嶼盛產的胡椒科植物卡瓦(Piper methysticum)的干燥根中提取出來的植物生理活性成分。卡瓦油是一種良好的抗抑郁藥，具有鎮靜催眠、抗真菌、抗血栓生成、抗疲勞、減肥、松弛肌肉等作用，在全球范圍內受到廣泛的關注[12]。但是卡瓦油的水溶性差，生物利用度低，目前尚沒有研制出理想的卡瓦藥物制劑，嚴重影響其廣泛使用。脂質體納米顆粒是極具潛力的給藥載體，不僅能運載親油性藥物，還能運載親水性藥物，同時還可作為藥物的儲庫，增加藥物在皮膚的滯留量和滯留時間[34]。脂質體納米顆粒制備簡單，可多途徑給藥，易于規模化生產。有關卡瓦脂質體納米顆粒制備及其穩定性研究目前尚未見有關報道，本文以卡瓦油為模型藥物來考察脂質體納米顆粒的制備及其物理穩定性。

1 資料和方法

1.1 一般資料

SPA400型原子力顯微鏡(日本精工公司);3000HS型Zetasizer分析儀(英國Malvern公司);vc 130型探頭式超聲處理機(美國Sonics&Materials公司);DU800型紫外可見分光光度計 (德國Beckman公司);Re300型旋轉蒸發儀(英國Stuart公司)，卡瓦(陜西三原天域生物制品有限公司提煉廠);大豆磷脂(美國Avanti公司) ;膽固醇(美國sigma公司);Sephadex G75(Pharmacia);其余試劑均為分析純，實驗中用水均為超純水。

1.2 方法

1.2.1 卡瓦脂質體納米顆粒的制備與表征 參照文獻[5]方法，并加以改進。稱取卡瓦油10mg、膽固醇40mg、大豆磷脂100mg置于圓底燒瓶中，加入體積比為5∶1的氯仿與乙醇混合液15mL溶解，于旋轉蒸發器上減壓蒸發除去氯仿和乙醇。加入60g/L葡萄糖液5 mL作為分散介質，得脂質體初混液，冰水浴超聲10 min，制備包載卡瓦的脂質體納米制劑。取少許顆粒加水混勻稀釋，取樣滴于云母片上，自然干燥后，利用原子力顯微鏡表征脂質體納米顆粒形貌。載藥的脂質體納米顆粒的平均粒徑、粒度分布、多分散系數以及Zeta電位通過Malvren Zetasizer 3000HS分析儀測定。

1.2.2 卡瓦脂質體納米顆粒包封率的測定 (1)紫外光譜掃描：將卡瓦油、卡瓦脂質體納米顆粒和空白脂質體分別用甲醇水混合液溶解稀釋后，在300～500nm處掃描，卡瓦油、卡瓦脂質體納米顆粒在360nm處有強吸收，空白脂質體在該波長范圍無吸收。(2)標準曲線繪制：用甲醇配制60、50、40、30、20和10μg/mL卡瓦溶液，在300～500nm處掃描，以360nm處的吸光度值及對應的濃度線性回歸，繪制標準曲線。(3)包封率測定：移取卡瓦納米制劑1mL過Sephadex G75柱分離(以超純水為洗脫劑)，收集脂質體餾分，加入甲醇溶解并定容，測定吸光度值(條件同標準曲線)，計算卡瓦含量。另取對應的卡瓦納米制劑1mL直接加入甲醇溶解后測定卡瓦的含量。兩者相除得包封率。

1.2.3 穩定性實驗考察 將制備的卡瓦脂質體納米顆粒于4℃密封儲存60d。每隔20d檢查納米制劑的外觀形態、平均粒徑、Zeta電位、多分散指數和包封率。

1.3 統計學處理

數據以均數±標準差

2 結果

2.1 卡瓦脂質體納米顆粒的特性表征

本文制備的卡瓦脂質體納米顆粒為淺黃色的物質，Zeta電位為(-33.9±2.3)mV，脂質體納米顆粒的原子力圖見圖1，制備出來的脂質體納米顆粒都為較完整的球形，分散性好，顆粒粒徑較均勻。顆粒的平均粒徑為(99.7±7.6)nm，多分散系數為0.321±0.011，粒徑分布如圖2所示，粒徑分布范圍較窄，粒徑分布范圍為(13～199)nm，其中小于67nm占97%，顆粒大小基本上與原子力圖吻合。

圖1 卡瓦脂質體納米顆粒的原子力圖

2.2 包封率

2.2.1 標準曲線 不同濃度卡瓦溶液對應的吸收光譜如圖3所示。以360nm處吸光度值(A)及對應的濃度(c)作線性回歸，繪制標準曲線，見圖4，標準曲線回歸方程為：c(μg/mL)=50.3A-0.0196，γ=0.9993。

圖2 卡瓦脂質體納米顆粒的粒徑分布圖 圖3 不同濃度的卡瓦溶液對應吸收光譜圖 圖4 卡瓦標準曲線

2.2.2 包封率測定 脂質體納米顆粒對脂溶性藥物的包封率較高，達到(83.32±0.34)%。

2.3 穩定性檢測

卡瓦脂質體納米顆粒以葡萄糖水溶液為分散介質，在4℃條件下放置60d后未見分層、絮凝，外觀和色澤均無明顯變化。卡瓦脂質體納米顆粒儲存20、40及60d后，平均粒徑、Zeta電位、多分散指數和包封率4個檢測指標的檢測結果與保存前無明顯區別，差異表1 卡瓦脂質體納米顆粒穩定性檢測結果均無統計學意義(P>0.05)，這說明卡瓦脂質體納米顆粒在較長的時間內能保持良好的穩定性。

3 討論

脂質體納米顆粒是一類極具開發潛力的藥物載體，其突出的優越性越來越為制劑學界所關注，已廣泛應用于腫瘤治療、基因治療、眼部疾病治療等諸多醫學領域[4]。但脂質體納米顆粒用于植物提取物制劑的開發研究鮮見報道。脂質體納米顆粒有雙分子層所形成的疏水腔和親水性外帽，可將難溶于水的藥物以納米級包埋于脂質體的疏水腔內，極大提高了藥物的溶解度[45]。卡瓦具有較強的親脂性，以脂質體作為載體將其包裹于脂質體納米顆粒的疏水腔內，制成的納米制劑能有效增強其在水中的溶解度。本研究制備的卡瓦納米制劑性質優良，包封率高，放置60d后納米粒外觀、粒徑、多分散指數及包封率無明顯變化，具有良好的穩定性，為難溶于水的植物提取物卡瓦開發理想新型載體提供了實驗依據。