作者：陳衛東，湯文浩，柏志斌

【摘要】 目的：通過納米炭示蹤兔胃癌前哨淋巴結的對照研究，為納米炭應用于胃癌的臨床研究打下基礎。方法：兔胃癌病灶周圍漿膜下分別注射99TcmSC和納米炭混懸液（卡納琳），記錄兩種示蹤法檢測到前哨淋巴結（SLN）的例數、SLN數目及分布情況，計算兩種示蹤法檢測SLN的敏感性、特異性、假陰性率和預測區域淋巴結轉移的準確性以及SLN和非前哨淋巴結（NSLN）的轉移率。結果：納米炭與99TcmSC SLN的檢出率及數目，顯示SLN分布情況、SLN的轉移率差異均無統計學意義（P＞0.05）。兩種示蹤法檢測SLN的敏感性、特異性、假陰性率、準確性差異均無統計學意義（P＞0.05）。結論：納米炭示蹤胃癌前哨淋巴結效果與放射性核素99TcmSC是一致的，但納米碳示蹤法具有顯影快而持久、無放射性、使用方便等優點，可替代放射性核素用于胃癌的臨床研究。

【關鍵詞】 胃癌； 前哨淋巴結； 納米炭 ［Abstract］Objective: To evaluate the clinical application of nanocarbon in visualization of sentinel lymph node (SLN) in gastric cancer surgery.Methods: Rabbit gastric cancer model was established by transplantation of VX2 cells into the gastric serosa.Nanocarbon and 99TcmSC were injected respectively into the gastric wall in rabbit model of gastric cancer.The cases，the numbers and the distribution of SLN were documented.Then the sensibility，specificity，false negative rate and the accurate rate of local lymph node metastasis were calculated，the metastasis ratio of SLN，NSLN were evaluated.Results:As far as the isolating rate，the numbers，the distribution and the metastasis rate of SLN was concerned，no significant difference was shown between the two groups（P＞0.05）.Moreover，the sensibility，specificity，false negative rate and the accurate rate of local lymph node metastasis were not difference between two groups（P＞0.05）.Conclusions:Nanocarbon has a similar effect with 99TcmSC in SLN visualization.Furthermore，it can be used in gastric cancer surgery to replace radionuclide，considering its quickdetection，nonradioactivity and convenience.

［Key words］ gastric cancer; sentinel lymph node; nanocarbon 前哨淋巴結（sentinel lymph nodes，SLN）是指最先接受腫瘤引流的第一組區域淋巴結。前哨淋巴結的概念首先應用于陰莖癌患者區域淋巴結狀況的評估［1］，此后，前哨淋巴結活檢(SLNB)在臨床上相繼應用于乳腺癌、甲狀腺癌、外陰癌、頭頸部腫瘤等實體腫瘤，以指導手術方案的制定。國內外的學者也基本達成共識：如果SLN無腫瘤細胞轉移，那么其他區域性淋巴結發生腫瘤轉移的可能性極小，不必進一步擴大手術范圍；如果前哨淋巴結有轉移，則其他淋巴結轉移的危險性很大，需要擴大手術范圍［23］。然而，前哨淋巴結活檢技術應用于胃癌的臨床還有爭議［4］。本研究通過納米炭示蹤兔胃癌前哨淋巴結的對照研究，為納米炭應用于胃癌的臨床研究打下基礎。 1 材料與方法 1.1 材料、試劑及儀器 VX2細胞株（東南大學放射與介入中心提供）；日本大耳兔36只，雌雄各18只（東南大學醫學院動物實驗中心提供，3～4月齡，體重2.0～2.5 kg）；納米炭混懸液（重慶萊美藥業產品，平均粒徑129 nm）；放射性核素99TcmSC（南京森科醫藥技術有限公司產品）；γ計數器探測儀NAVIGATOR GPS（美國外科公司產品）；顯微攝像系統（日本Nikon公司產品）；普通顯微鏡（Olympus公司產品）；腹部手術器械（東南大學醫學院動物外科提供）。 1.2 實驗方法

1.2.1 VX2傳代兔的制備

將-196 ℃液氮保存的VX2腫瘤細胞株按一般細胞培養技術進行復蘇后，將腫瘤細胞懸液調整成106 mm-3活細胞濃度。取該懸液0.5 ml接種于4只種兔后腿外側的肌肉內，2周后可觸及腫塊即制成了荷瘤兔。取荷瘤兔后腿生長活躍的腫瘤組織，剔除筋膜和壞死組織，取邊緣生長旺盛的魚肉樣組織，剪成1～2 mm3大小組織塊用于種植。

1.2.2 兔VX2胃癌模型的制作

剩余32只大耳兔稱重，靜脈麻醉后，取仰臥位固定，上腹部局部剃毛，碘伏消毒。取上腹正中切口進腹（切口長2～3 cm），找到胃竇部，切開胃竇前壁漿肌層，將腫瘤組織塊2枚裝載于硬膜外穿刺針內，通過硬膜外穿刺針將腫瘤組織埋植于黏膜下，結扎預置的漿肌層縫線，關閉胃壁傷口，關腹。麻醉清醒后送動物中心喂養。

1.2.3 胃癌前哨淋巴結兩種示蹤方法的對照研究

動物喂養3周后再次剖腹，統計建模成功率。于荷瘤兔胃腫瘤病灶周圍1.0 cm處選擇四點，每點漿膜下分別注射99TcmSC 0.1 ml（0.2 μCi）和納米炭0.1 ml（5 mg）。納米炭注射試劑后1～5 min就會顯示出2～4條染色的細小淋巴管，沿著顯影的淋巴管就會發現黑染的淋巴結，最早被染色的淋巴結判定為納米炭組前哨淋巴結（SLN），觀察并記錄被納米炭黑染的前哨淋巴結數目和分布情況。99TcmSC注射后每隔10 min分別用γ閃爍計數器（NAVIGATOR GPS）檢測99Tcm示蹤的前哨淋巴結的數目和分布情況，直至120 min結束；γ閃爍計數器探測放射線水平高于背景10倍以上的淋巴結判定為核素組SLN，記錄其數目及分布情況。分別切取納米炭和99TcmSC示蹤的SLN、胃腫瘤病灶及胃區域非前哨淋巴結（NSLN）作病理分析。

1.2.4 病理學檢查

兩種方法示蹤的SLN、胃腫瘤病灶及NSLN（非前哨淋巴結）等標本經10%甲醛溶液固定后，制作石蠟切片，HE染色，觀察胃腫瘤病理特征、SLN的轉移及NSLN的轉移。 1.3 統計學處理 實驗數據以x-±s或百分率表示，組間計量資料比較采用t檢驗；計數資料比較進行卡方檢驗（或Fisher′s exact檢驗）。應用SPSS 13.0 for Windows統計軟件完成，P<0.05為差異有統計學意義。 2 結果 2.1 建模成功率 32只實驗動物于胃竇前壁種植VX2腫瘤組織塊，3周后有27只在胃竇部發現腫瘤并經病理證實為惡性腫瘤組織，建模成功率為84.4％（27／32）；腫瘤直徑為0.5～2.4 cm，平均（1.33±0.39） cm；胃腫瘤分期：ⅠB期10例，Ⅱ期9例，ⅢA期3例，ⅢB期2例，Ⅳ期3例。 2.2 兩種示蹤法檢測SLN的比較 見表1。表1 兩種示蹤法檢測SLN比較（略）

2.3 兩種示蹤法檢測SLN的正確性比較 見表2。表2 兩種示蹤法檢測SLN的正確性比較（略）

2.4 納米炭示蹤的SLN黑染的程度及淋巴管顯影情況

見圖1、2。 2.5 兩種示蹤法的檢測SLN所需時間 納米炭法檢測SLN所需時間為（4.06±2.12） min；核素法(28.17±13.48） min，兩者差異有統計學意義（P<0.01）。其中納米炭示蹤的SLN在實驗觀察的120 min內無明顯褪色。 2.6 SLN與非前哨淋巴結（NSLN）轉移率比較 兩種示蹤法共檢測SLN共41枚，其中轉移SLN 18枚，轉移率為43.9％；27只兔共切取NSLN 244枚，其中轉移淋巴結39枚，轉移率16.0％，兩者比較差異有統計學意義（P<0.01）。