聚乙二醇定點修飾β-乳球蛋白谷氨酰胺殘基條件優化及其對蛋白抗原性的影響
摘要：采用谷氨酰胺轉氨酶(TG酶)催化聚乙二醇(PEG)定點修飾技術對β-乳球蛋白(β-LG)的谷氨酰胺殘基進行修飾,探究其對蛋白抗原性的影響。通過SDS-PAGE結合凝膠過濾色譜對修飾產物的修飾率進行分析,通過優化得最佳修飾條件為pH 7.0,溫度25℃,β-LG與PEG摩爾比1:15,TG酶與β-LG質量比3:1,緩沖液中乙醇添加量25%(體積分數),該條件下修飾率為60.17%。采用陽離子交換色譜對修飾產物進行分離純化,SDS-PAGE分析顯示,純化得到的修飾產物表觀分子量在28kDa左右,為PEG單修飾產物。反相高效液相色譜分析結果表明,修飾產物均一,無其它位置異構體存在。間接競爭ELISA測定結果表明,經PEG修飾后β-LG的抗原性顯著降低,降低率為59.04%。
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