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埃及伊蚊絲氨酸蛋白酶抑制劑23的基因克隆表達(dá)與多克隆抗體制備

翟慧; 王政艷; 呂清巧; 程金芝; 李世琪; 楊茜; 商正玲; 吳家紅 貴州醫(yī)科大學(xué)環(huán)境污染與疾病監(jiān)控省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室貴州醫(yī)科大學(xué)現(xiàn)代病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院; 貴陽(yáng)550025

摘要：埃及伊蚊serpin23（絲氨酸蛋白抑制劑23）在雌蚊唾液腺特異高表達(dá)，是蚊蟲(chóng)唾液組分的主要蛋白之一。本文設(shè)計(jì)特異性引物序列，采用RT—PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得埃及伊蚊廣東電白株serpin23成熟肽序列，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a（＋）-serpin23并測(cè)序驗(yàn)證。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、KCl染色、切膠純化獲取了目的蛋白；制備了小鼠特異性抗serpin23蛋白多克隆抗體。結(jié)果顯示：獲得serpin23成熟肽序列，全長(zhǎng)1197bp，編碼399個(gè)氨基酸。等電點(diǎn)pI為6．13，具有serpin結(jié)構(gòu)域和一個(gè)功能未知的FAINT結(jié)構(gòu)域。pET-28a（＋）-serpin23重組質(zhì)粒可表達(dá)了大小約為47kDa、以包涵體表達(dá)為主的融合蛋白。Western Blot結(jié)果證明serpin23重組蛋白可以與抗-His標(biāo)簽和抗-serpin23抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，約47kDa處產(chǎn)生特異性條帶。本研究成功獲得了埃及伊蚊廣東電白株serpin23重組表達(dá)蛋白和抗serpin23多克隆抗體，為后續(xù)功能研究奠定基礎(chǔ)。

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