登革2型病毒E蛋白基因的酵母表達
摘要：為研究登革病毒與蚊蟲相互作用的分子機制，本研究對DENV-2的E蛋白基因進行了畢赤酵母分泌表達。首先，經(jīng)RT—PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因，將克隆的基因與表達載體pPICZaB連接以構建表達重組子；并經(jīng)酶切、PCR、測序篩選實驗鑒定正確重組子。然后，重組子經(jīng)氯化鋰法轉化畢赤酵母菌KM71H獲得轉化子；經(jīng)抗生素、表型鑒定、PCR篩選得到Muts型的多拷貝轉化子。最后，經(jīng)甲醇誘導基因表達，Western—blotting方法鑒定蛋白表達情況及最佳表達時間。本研究對DENV-2的E蛋白成功進行了分泌表達，并且確定其表達最佳發(fā)酵時間為96h；為進一步研究登革病毒與蚊蟲相互作用的分子機制奠定了基礎。
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