作者：劉培 馮煦 董云發 王鳴 趙友誼 趙興增

【摘要】 目的對中藥北柴胡莖葉的化學成分進行分離和鑒定。方法用色譜法和波譜解析方法對北柴胡莖葉的化學成分進行分離和結構鑒定。結果共得到7個化合物：香草酸①、水楊酸②、咖啡酸乙酯③、原兒茶酸④、柴胡色原酮酸⑤、山萘酚⑥、蘆丁⑦ 。結論化合物②③④為柴胡屬植物中首次分離得到。

【關鍵詞】 北柴胡 化學成分 結構鑒定

Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of the aerial part of Bupleurum chinense DC.. MethodsDried aerial parts of Bupleurum chinense DC.were extracted with EtOH and their chemical constituents were isolated and structures were confirmed by physical and chemical properties and spectral analysis. ResultsSeven compounds were obtained and identified as vanillic acid①， salicylic acid②， ethyl caffeate③， protocaechuic acid④， saikochromonic acid⑤， kaempferol⑥ and rutin⑦. ConclusionCompound ②③④ were obtained from genus Bupleurum for the first time.

Key words：Bupleurum chinense DC．； Chemical constituent； Structure identification 柴胡為傘形科（Umbelliferae）柴胡屬Bupleurum植物。具疏散退熱，舒肝升陽之功效，主治感冒發熱，寒熱往來，瘧疾，胸脅脹痛，月經不調及子宮脫垂等證。現代藥理研究證明柴胡具有解熱、鎮痛、鎮靜、抗炎、增強免疫、保肝利膽、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等作用。《中國藥典》（2005年版）收載北柴胡Bupleurum chinese DC.和狹葉柴胡B. scorzonerifolium Willd.的干燥根為藥用柴胡來源。作者對北柴胡莖葉的化學成分進行了提取、分離和結構鑒定，從其乙醇提取物中分離得到了7個化合物，并通過理化性質分析和波譜解析等手段確定了它們的結構為香草酸（vanillic acid，1）、水楊酸（salicylic acid，2）、咖啡酸乙酯（ethyl caffeate，3）、原兒茶酸(protocaechuic acid，4）、柴胡色原酮酸（saikochromonic acid，5）、山萘酚（kaempferol，6）、蘆丁(rutin， 7)。其中化合物2，3，4為首次從柴胡屬植物中分離得到。

1 儀器與試藥 核磁共振光譜用Bruker AV-300、AV-500 型核磁共振光譜儀測定（TMS內標）；紅外光譜用Shimadzu IR-435型紅外分光光度計測定（KBr壓片）；熔點用X4型數字顯示顯微熔點測定儀（未校正）測定；ESI-MS在Agilent 1100 LC/MSD SL上測定；LABCONCO(freeze dry system/LYPH LOCK  4.5)冷凍干燥儀。化合物純度由Agilent-1100高效液相色譜儀檢測。柱色譜材料為D101型大孔吸附樹脂、聚酰胺（100~200目）、硅膠(200~300目)、RP-C18（YMC;12 μm）及Sephadex LH-20（Amersham Biosciences），柱色譜試劑均為分析純，高效液相色譜試劑均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 提取與分離北柴胡干燥莖葉15 kg，粉碎后用80%乙醇冷浸提取2次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得總浸膏。總浸膏用正丁醇萃取，減壓濃縮后得正丁醇部浸膏320 g，水溶解后上大孔吸附樹脂換水洗脫后，分別用不同體積分數的95%乙醇梯度（φ=20%，30%，50%，70%）洗脫，20%乙醇洗脫得流分Ⅰ，30%乙醇洗脫得流分Ⅱ，50%乙醇洗脫得流分Ⅲ，70%乙醇洗脫得流分Ⅳ。流分Ⅰ經硅膠干柱色譜，以氯仿-甲醇-水（體積比為4∶1∶0.5）洗脫得15個組分（Fr.1~Fr.15），其中，Fr.3經Sephadex LH-20，甲醇洗脫得化合物1（15 mg）；Fr.5經RP-C18反相柱色譜，水-甲醇（1∶1）洗脫得化合物2（12 mg）；Fr.7-12經RP-C18反相柱色譜，水-甲醇（9∶1）洗脫得化合物5（6 mg）。流分Ⅱ經硅膠干柱色譜，氯仿-甲醇溶劑系統（7∶3）洗脫得化合物4(7 mg)。流分Ⅲ經硅膠干柱色譜，石油醚-醋酸乙酯溶劑系統（體積比100∶0，90∶10，80∶20…）梯度洗脫，得20流分，流分10經反相柱色譜，水-甲醇（體積比3∶7）洗脫得化合物3(0.6 g)。流分Ⅳ經聚酰胺色譜柱不同體積分數乙醇梯度洗脫，得化合物6(0.5 g)和7(3.0 g)。

2.2 結構鑒定

2.2.1 化合物1無色針晶（醋酸乙酯），mp 210~212℃， 溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ12.46(1H，brs，-COOH)，9.81(1H，brs，ArOH)，7.43(1H，d，J=2.0Hz，H-2)，7.45(1H，dd，J=8.7，2.0Hz，H-6 )， 6.84(1H，d，J=8.7Hz，H-5)， 3.81(3H，s，OCH3 )。NOESY譜中，3.81(3H，s，OCH3 )與7.43(1H，d，J=2.0Hz，H-2)有NOE效應。經與文獻［1］對照，確定化合物1為香草酸。

2.2.2 化合物2無色針狀結晶（乙醇），mp 151~154℃，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)， 1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ6.97(1H，d，J=7.9Hz，H-3)，7.54(1H，dd，J=7.9，1.7 Hz，H-4)，6.94(1H，t，J=7.9Hz，H-5)，7．80(1H，dd， J=7.9，1.7Hz，H-6)，12.65（1H，s，-OH），15.87（1H，s，-COOH）。13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：δ112.9(C-1)，161.1(C-2)，117.0(C-3)，135.6(C-4)，119.1(C-5)，130.2(C-6)，171.8(C-7)。以上氫譜與碳譜數據與文獻［2］基本一致，確定化合物2為水楊酸。

2.2.3 化合物 3無色針晶(甲醇)，mp 142~143℃ ，IR cm-1：3430(-OH)，1660(C=O)，1622(C=C)，1602，1590(-Ar)，1042(CO-)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：δ7.04(1H，d， J=2.1Hz，H-2)，6.75(1H，d， J=8.2 Hz，H-5)，7.00(1H，dd， J=8.2，2.1Hz，H-6)，6.25(1H，d，J=15.9Hz，=C-H)，7.46(1H，d，J=15.9Hz，=C-H)，4.15(2H，q，-CH2)，1.24(3H，t，CH3-)，9.09(1H，s，-OH)，9.54(1H，s，-OH)。ESI-MS(m／z)：208(M+)，180(M+ -CH2CH3+H)，163(M+ -OCH2CH3)。13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：125.5（C-1），114.8（C-2），145.5（C-3），144.9（C-4），115.7（C-5），121.2（C-6），114.0（=C），148.3（=C），166.4（-C=O），59.6（-CH2），14.2（CH3-）。以上氫譜與碳譜數據與文獻［3］基本一致，確定化合物3為咖啡酸乙酯。

2.2.4 化合物 4無色針晶（甲醇），mp 204~206℃，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)， 1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：δ7.35（1H，d，J=2.0Hz，H-2），6.79(1H，d，J=8.2Hz，H-5)，7.30(1H，dd，J=8.2，2.0Hz，H-6)，9.26(1H，s，-OH)，9.63(1H，s，-OH)，12.27(1H，s，-COOH)。 13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：δ121.7(C-1)，116.6(C-2)，144.9(C-3)，150.0(C-4)，115.1(C-5)，121.9(C-6)，167.3(-COOH)。 以上氫譜與碳譜數據與文獻［4］基本一致，確定化合物4為原兒茶酸。

2.2.5 化合物 5淡黃色針晶(甲醇)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)。 1HNMR(500MHz，DMSO-d6):δ 6.67(1H，s，H-3)，6.19(1H，d，H-6)， 6.46(1H，d，H-8)。13CNMR(125MHz，DMSO-d6) ：δ160.7(C-2)，109.0(C-3)，183.2（C-4），161.4（C-5），98.8（C-6），161.6（C-7），93.99（C-8），157.6（C-9），104.5（C-10），164.6（-COOH）。以上氫譜與碳譜數據與文獻［5］基本一致，確定化合物5為柴胡色原酮酸。 2.2.6 化合物 6淡黃色針晶(甲醇)，mp 275~276℃，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，鹽酸-鎂粉反應陽性，Molish反應陰性。與山萘酚標準品共薄層，Rf值一致。與標準品混合后熔點不下降。1HNMR(500MHz，DMSO-d6):δ12.47， 10.75， 10.07， 9.35(各1H， s， D2O可交換， 5-OH， 7-OH， 3-OH， 4′-OH)， 8.04(2H，d，J=8.7Hz，H-2′，H-6′)， 6.93(2H，d，J=8.7Hz，H-3′，H-5′)， 6.44(1H，d，J=2.0Hz，H-8)， 6.19(1H，d，J=2.0Hz，H-6)。以上氫譜數據與文獻［6］基本一致，確定化合物6為山萘酚。

2.2.7 化合物 7淡黃色針晶(甲醇)，mp 185~186℃，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，鹽酸-鎂粉反應及Molish反應陽性，與蘆丁標準品共薄層，Rf值一致。高效液相檢測與蘆丁標準品保留時間相同（液相色譜條件：Agilent Eclipse CDB-C18色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm；柱溫：30℃；流動相：20％甲醇；流速：1.0 ml/min；檢測波長：365nm）。1HNMR(500MHz，DMSO-d6):δ12.59，10.79，9.62，9.14(各1H，s，D2O可交換，5-OH，7-OH，3′-OH，4′-OH)， 7.55（1H， d， J=2.0Hz， H-2′）， 7.53(1H， dd， J=2.0，8.2Hz， H-6′)， 6.84(1H， d， J=8.1Hz， H-5′)， 6.38(1H， d， J=2.0Hz， H-8)， 6.19(1H， d， J=2.0Hz， H-6)， 5.33(1H， d， J=7.4Hz， Glc H-1)， 5.06(1H， brs， rha H-1)。以上氫譜數據與文獻［5］基本一致，確定化合物7為蘆丁。

3 討論 本實驗從北柴胡莖葉中分離鑒定了7個化合物，其中黃酮類3個，分別為柴胡色原酮酸⑤、山萘酚⑥、蘆丁⑦；酚酸類4個，分別為香草酸①、水楊酸②、咖啡酸乙酯③、原兒茶酸④。化合物②③④為首次從柴胡屬植物中分離得到，這對闡明北柴胡莖葉解熱抗炎作用的藥效物質基礎有一定的意義。

【參考文獻】 ［1］ 何明芳，孟正木，沃聯群.積雪草化學成分的研究［J］.中國藥科大學學報，2000，31（2）:91. ［2］ Sadtler Research Laboratories.Sadtler Standard Carbon 13NMR Spectra［Z］.Pennsylvania(USA):Sadtler Research Laboratories，1989．6216C. ［3］ 屠鵬飛，吳衛中，鄭俊華.太白米的酚酸類成分研究［J］.藥學學報，1999，34(1):39. ［4］ 王素娟，裴月湖.白樺葉化學成分的研究［J］.沈陽藥科大學學報，2000，17(4):256. ［5］ 梁鴻，趙玉英，崔艷君，等.北柴胡中黃酮類化合物的分離鑒定［J］.北京醫科大學學報，2000，32(3):223. ［6］ 中國科學院上海藥物研究所植物化學研究室.黃酮體化合物鑒定手冊［M］.北京：科學出版社，1981：639.