作者：郁繼誠，張菁，曹國英，施耀國

【摘要】 目的 研究國產阿莫西林/舒巴坦匹呋酯（1：1）片劑在22名男性健康志愿者中的生物等效性。方法 22名健康志愿者分別雙交叉空腹口服國產阿莫西林1000mg/舒巴坦匹呋酯1000mg片劑（國產品）和對照品進口阿莫西林1000mg/舒巴坦匹呋酯1000mg片劑（進口品）各一次。用高效液相色譜法測定血漿中的濃度。采用雙向單側t檢驗進行生物等效性評價。結果 22名受試者單劑空腹口服國產品和進口品后的體內過程均符合血管外一室模型。口服國產品和進口品后，阿莫西林實測平均高峰血藥濃度(Cmax)分別為（12.48±3.05）mg/L和（10.86±2.75）mg/L，達峰中位時間（Tmax）分別為1.5（1.0，2.0）h和2.0（1.0，4.0）h，平均藥時曲線下面積 (AUC0～∞) 分別為（33.42±7.58）h·mg/L和（32.71±7.18）h·mg/L；舒巴坦匹呋酯實測平均高峰血藥濃度(Cmax)分別為（8.44±2.43）和（9.20±3.00）mg/L，達峰中位時間（Tmax）分別為2.0（1.0，5.0）h和2.0（0.75，5.0）h，平均藥時曲線下面積 (AUC0～∞) 分別為（35.31±10.81）h·mg/L和（36.52±12.94）h·mg/L。對國產片劑與進口片劑中阿莫西林和舒巴坦匹呋酯的Cmax、AUC0～8和AUC0～∞對數值進行方差分析，結果除國產品與進口品中阿莫西林Cmax對數值在兩制劑間差異具統計學意義外(P＜0.05)、其他參數在兩制劑間、試驗階段間、服藥順序間的差異均無統計學意義(P＞0.05)。但在服藥順序組中受試者間差異具統計學意義(P＜0.05)，國產品與進口品相比，制劑中阿莫西林相對生物利用度為(102.47±9.70)％。 舒巴坦匹呋酯相對生物利用度為(98.61±14.91)％。結論 受試國產片劑與對照進口片劑具生物等效性。

【關鍵詞】 阿莫西林/舒巴坦；生物等效性

The evaluation of bioequivalence of amoxycillin/sulbactum pivoxil

【Abstract】 Objective To study the bioequivalence of amoxycillin/sulbactum pivoxil.Methods Twenty two normal volunteers were enrolled in a randomized crossover study. Each volunteer was given orally a single dose of 1000mg domestic amoxycillin/sulbactum pivoxil (tested preparation) or 1000mg imported amoxycillin/sulbactum pivoxil (reference preparation) in empty. The plasma concentrations were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) . Two one-sided t-test was used to evaluate the bioequivalence.Results The concentration-versus-time data in both groups were fitted to a one-compartment model. The pharmacokinetic parameters of amoxycillin in domestic and imported tablets were : Cmax (12.48±3.05)mg/L and (10.86±2.75)mg/L; Tmax 1.5 (1.0～2.0 )h and 2.0 (1.0～4.0 )h ; AUC0→∝ (33.42±7.58)h·mg/L and (32.71±7.18) h·mg/L，respectively. The pharmacokinetic parameters of sulbactum in domestic and imported tablets were:Cmax (8.44±2.43)mg/L and (9.20±3.00)mg／L ; Tmax 2.0 (1.0～5.0 )h and 2.0 (0.75～5.0 )h ; AUC0→∝ (35.31±10.81)h·mg/L and (36.52±12.94) h·mg/L ，respectively. Analysis of variance (ANOVA) was used to analysed the logarithm of Cmax， AUC0→8， AUC0→∝ of amoxycillin and sulbactum pivoxil in the two preparations . The difference of all the parameters between the two tablets， test phases， administration sequence had no statistical significance (P＞0.05) ，except the difference of Cmax between the two preparations (P＜0.05) . But there was statistical difference among the participants in administration sequence (P＜0.05). Compared with the imported!tablets ，the relative bioavailability of amoxycillin and sulbactum pivoxil in domestic tablets were (102.49±9.70)% and (98.61±14.91)%， respectively.Conclusion Domestic and imported amoxicilin/sulbactum pivoxil were bioequivalent.

【Key words】 amoxicilin/sulbactum；bioequivalence 阿莫西林/舒巴坦匹呋酯為阿莫西林加入β-內酰胺酶抑制劑舒巴坦的衍生物（舒巴坦匹呋酯）復合制劑，舒巴坦匹呋酯改善了舒巴坦口服吸收差的缺點，但其必須在人體腸道酯酶的作用下分解成舒巴坦才能發揮作用［1～3］。國外僅有阿根廷Bago公司生產阿莫西林/舒巴坦匹呋酯復方口服制劑，上海四藥有限公司研制了國產阿莫西林/舒巴坦匹呋酯（1：1配比）片劑，獲藥政部門批準進行人體生物等效性測定，其臨床試驗方案經華山醫院倫理委員會批準后在我所進行了生物等效性測定。

1 資料與方法

1.1 受試者 健康男性志愿者按臨床試驗方案中入選標準及排除標準篩選受試者。所有志愿者于篩選時詳細詢問病史及用藥史無殊后，進行全面體格檢查、青霉素皮試以及血、尿常規，血生化等實驗室檢查。經篩選合格的22名受試者在詳細了解受試藥物的特性、藥物試驗的全過程、可能發生的不良事件以及受試者的各種權利與義務，并表示理解后簽署書面知情同意書。受試者平均年齡（24.23±2.91）歲，平均體重（64.27±5.40）kg，平均身高（173.30±5.86）cm。

1.2 藥品

1.2.1 受試者用藥品 受試品：阿莫西林/舒巴坦匹呋酯片劑（1：1），每片含阿莫西林250mg及舒巴坦匹呋酯250 mg，（以下簡稱國產品)，批號010903。上海四藥有限公司提供。對照品：阿莫西林/舒巴坦匹呋酯片劑（1：1），每片含阿莫西林250mg及舒巴坦匹呋酯250 mg，（以下簡稱進口品），批號300971－2。阿根廷拜克（Bago）公司產品。

1.2.2 藥物濃度測試用標準品 (1)阿莫西林：批號：0409－9907，含量: 84.5%。(2)舒巴坦匹呋酯：批號：0430－200002，含量: 92.0%。中國藥品生物制品檢定所標定。

1.3 給藥劑量及方法 22名受試者按隨機表隨機分為兩組，分別接受兩次給藥，即每名受試者隨機先后分別接受國產品和進口品各一次，均為單劑空腹口服阿莫西林1000mg/舒巴坦匹呋酯1000mg。受試者于受試前一日進入受試場所，當晚10時后禁食，受試當日晨經主要生命體征檢查合格和青霉素皮試陰性后空腹口服國產品或進口品，每次服藥后3h進統一早餐。服藥時飲水200ml。兩次試驗交叉進行，間隔1周。

留取受試者服藥前和服藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、7和8h血標本各6ml，置于含肝素的試管中，立即離心10min（4℃），取血漿分裝3份，放置-80℃冰箱保存待測。

定時觀察并記錄受試者服藥后8h內生命體征，觀察受試者服藥后出現的所有不良事件，記錄于記錄報告表（CRF）中作安全性評價。每次給藥前及給藥后24h留取血、尿標本進行實驗室檢查。所有結果均填入CRF中。

2 材料及方法

2.1 儀器設備 (1)Waters Alliance 2690型系列高效液相色譜儀，包括UV2487型紫外檢測儀，Millennium32數據處理系統以及DELL微機等；(2)Millipore 純水系統；(3)METTLER AE240 分析天平。

2.2 試劑 甲醇：高效液相色譜純，Caledon實驗有限公司；乙腈：高效液相色譜純，飛世爾(Fisher)科學世界公司；四丁基氫氧化銨水溶液(10%)：分析純， 上海試劑一廠；磷酸：分析純，蘇州振亞化工廠；磷酸二氫鉀及磷酸氫二鉀：分析純，汕頭金砂化工廠；二氯甲烷：分析純，中國醫藥集團上海化學試劑公司。

2.3 血藥濃度測定及計算方法 以高效液相色譜法分別測定血漿標本中阿莫西林和舒巴坦濃度。阿莫西林測試條件為:(1)流動相 2％磷酸：乙腈(97:3)；(2)固定相 Hamilton PRP-1反相層析柱(5μm，150mm×4.1mm)；(3)檢測波長:214nm；(4)流速：為0.6ml/min。舒巴坦測試條件為:(1)流動相：1％磷酸-四丁基氫氧化銨緩沖液（以10%四丁基氫氧化銨調pH至2.28）:甲醇(83:17)；(2)固定相：Waters Symmetry C18對稱反相層析柱(5μm，150mm×4.6mm)；(3)檢測波長: 210nm；(4)流速：為1.0ml/min。血漿標本分析前預處理：血漿標本0.8ml加入0.8ml乙腈混勻后10000r／min離心10min，取上清液1ml加入二氯甲烷溶液10ml混勻后20r／min旋轉混勻20min，4000r／min和10000r／min離心2次、取上清液80μl（阿莫西林）和100μl（舒巴坦）100μl進樣分析。由Millennium32數據處理系統根據阿莫西林和舒巴坦的峰面積制訂標準曲線，以外標標準曲線法分別測讀阿莫西林和舒巴坦血藥濃度。

2.4 體液濃度測定方法學研究 阿莫西林和舒巴坦色譜峰分離良好，空白血漿中雜峰對阿莫西林和舒巴坦色譜峰無干擾。見圖1。阿莫西林和舒巴坦血漿溶液濃度與峰面積間呈良好線性關系，阿莫西林血漿溶液標準曲線范圍為(0.25～25)mg/L，線性回歸方程為C=1.97×105PA－2.49×104 (PA為峰面積);回歸系數R2=0.9994（權重因子為1／C）， 最低檢測限為0.1mg/L（信噪比>3）。阿莫西林血漿溶液提取回收率(血漿高、中、低濃度/緩沖液高、中、低濃度×100)為（95.74±3.49）%。舒巴坦血漿溶液標準曲線范圍為(0.25～25)mg/L，線性回歸方程為C=5.44×104PA－9.97×103 (PA為峰面積);回歸系數R2=0.9958（權重因子為1／C）， 最低檢測限為0.1mg/L（信噪比>3）。舒巴坦血漿提取回收率(血漿高、中、低濃度/緩沖液高、中、低濃度×100)為（92.58±16.07）%。測定方法的精確性：阿莫西林和舒巴坦不同濃度血漿溶液標本進樣間重復性測定結果的相對標準差（RSD）分別為≤3.92%和≤5.18%；阿莫西林和舒巴坦不同濃度血漿標本日內測定結果RSD分別為≤3.92%和≤5.18%，日間測定結果RSD分別為≤4.57% 和≤5.56%。測定方法準確性：阿莫西林和舒巴坦不同濃度血漿溶液測得濃度回收率分別為96.68%～105.70%和96.22%～101.22%。血漿樣品穩定性：阿莫西林和舒巴坦高、中、低質控血漿濃度標本室溫放置至24h后，24h時阿莫西林不同濃度藥物回收率為91.11%～91.5%。12h時舒巴坦低質控濃度藥物回收率僅為77.02％。24h時未檢測到血漿標本中舒巴坦藥物濃度。阿莫西林和舒巴坦高、中、低質控血漿濃度標本預處理后的標本室溫放置24h，24h時不同濃度阿莫西林回收率為80.90%～87.88%；12h時不同濃度舒巴坦回收率為64.68%～93.19%。24h時亦未檢測到血漿標本中舒巴坦藥物濃度。結果顯示，阿莫西林和舒巴坦HPLC測定方法特異性、精確性及準確性均符合衛生部有關藥代動力學研究原則中生物樣品的分析要求，阿莫西林／舒巴坦血漿標本室溫放置時間不宜超過9h，預處理后標本室溫放置時間不宜超過9h。

2.5 藥代動力學參數計算及分析 血藥濃度資料、藥代動力學參數及統計學處理均在微機上進行，采用中國藥理學會數學專業委員會編制的3P97程序包計算藥代動力學各項參數。同時根據實測值以梯形法計算AUC，實測值計算血藥高峰濃度（Cmax）。以進口品的藥時曲線下面積為標準，計算國產品的相對生物利用度，用3P97程序包對國產品和進口品Cmax、AUC0-8和AUC0—∞對數值進行方差分析，統計各參數間的差異，方差分析包括國產品與進口品的兩制劑間、試驗周期間、服藥順序間和服藥順序組中受試者間。以SAS／STAT（VER.8.0）統計軟件包對T1/2Ka、T1/2Ke、V/f和CLt等主要藥代參數進行方差分析，檢驗制劑間差異，非連續性變量Tmax用中位數和范圍表示，并經等級排序后用方差分析。以雙單側t檢驗和（1-2α）置信區間法檢驗國產品和進口品生物等效性。檢驗顯著性水平為α=0.05。

3 結果

3.1 藥物濃度及藥代動力學參數 受試者單劑空腹口服國產品和進口品后平均血藥濃度（見圖2、圖3）和主要藥代動力學參數（見表1、表2）。空腹口服國產品和進口品后的體內過程均符合血管外一室模型。國產品和進口品口服后阿莫西林實測平均高峰血藥濃度(Cmax)分別為（12.48±3.05）和（10.86±2.75）mg/L，達峰中位時間（Tmax）分別為1.50（1.0，2.0）h和2.0（1.0，4.0）h，平均藥時曲線下面積 (AUC0～∞) 分別為（33.42±7.58）h·mg/L和（32.71±7.18）h·mg/L。國產品和進口品口服后舒巴坦實測平均高峰血藥濃度(Cmax)分別為（8.44±2.43）mg/L和（9.20±3.00）mg/L，達峰中位時間（Tmax）分別為2.0（1.0，5.0）h和2.0（0.75，5.0）h，平均藥時曲線下面積 (AUC0～∞) 分別為（35.31±10.81）h·mg/L和（36.52±12.94）h·mg/L。

3.2 生物利用度及生物等效性

3.2.1 受試品中阿莫西林生物利用度及生物等效性 以進口品中阿莫西林藥時曲線下面積為標準，計算受試品國產阿莫西林相對生物利用度，結果為(102.47±9.70)％。方差分析結果表明，國產片劑與進口片劑相比，LogCmax在兩制劑間差異具統計學意義(P＜0.05)，但在試驗階段間和服藥順序間的差異無顯著性(P＞0.05)。LogAUC0-8和LogAUC0-∞在兩制劑間、試驗階段間、服藥順序間的差異均無統計學意義(P＞0.05)。LogCmax、LogAUC0-8和LogAUC0-∞ 在服藥順序組中受試者間差異有顯著性（P＜0.05），除T1/2Ka外，V/f、CLt/f、T1/2Ke等藥代動力學參數在兩制劑間差異均無統計學意義（P＞0.05）。國產品和進口品中阿莫西林Tmax中位數經等級排序后用方差分析結果兩制劑間差異無統計學意義（P＞0.05）。

國產品和進口品中阿莫西林藥代參數Cmax、AUC0～8及AUC0～∞經對數轉換后以雙單側t檢驗分析，結果顯示兩制劑具有生物等效性；（1-2α）置信區間法分析結果表明，國產片劑中阿莫西林Cmax和AUC0～∞90%可信限分別在107.40％～124.40％和98.50％～105.70％，落在對照品進口片劑70％～143％和80％～125％范圍內，此亦表明國產品和進口品中阿莫西林具有生物等效性。

3.2.2 受試品中舒巴坦生物利用度及生物等效性 以進口品中舒巴坦匹呋酯藥時曲線下面積為標準，計算受試品國產舒巴坦相對生物利用度，結果為(98.61±14.91)％。方差分析結果表明，國產片劑與進口片劑相比，LogAUC0-8在兩制劑間差異具統計學意義(P＜0.05)，但在試驗階段間和服藥順序間的差異無統計學意義(P＞0.05)。LogCmax和LogAUC0-∞在兩制劑間、試驗階段間、服藥順序間的差異均無統計學意義(P＞0.05)。LogCmax、LogAUC0-8和LogAUC0-∞在服藥順序組中受試者間差異具統計學顯著性（P＜0.05），V/f、CLt/f、T1/2Ka、T1/2Ke等藥代動力學參數在兩制劑間差異均無統計學意義（P＞0.05）。國產品和進口品中舒巴坦匹呋酯Tmax中位數經等級排序后用方差分析結果兩制劑間差異無統計學意義（P＞0.05）。

國產品和進口品中舒巴坦藥代參數Cmax、AUC0～8及AUC0～∞經對數轉換后以雙單側t檢驗分析，結果顯示兩制劑具有生物等效性；（1-2α）置信區間法分析結果表明，國產片劑中舒巴坦Cmax和AUC0～∞90%可信限分別在85.10％～100.90％和92.60％～103.00％，落在對照品進口片劑70％～143％和80％～125％范圍內，此亦表明國產品和進口品中舒巴坦具有生物等效性。

3.3 不良事件及安全性評價 22名受試者中單劑空腹口服國產品和進口品后分別有3名和2名出現輕度腹瀉1～2次外，其余受試者均無不良事件發生。試驗前后生命體征檢查、心電圖檢查及各項實驗室檢查結果均未見異常。

4 討論

從體外試驗表明，阿莫西林與舒巴坦對β－內酰胺酶產酶菌的抗菌活性極弱，對產酶大腸桿菌、克氏肺炎桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、粘質沙雷菌、產氣桿菌、傷寒桿菌、不動桿菌及流感嗜血桿菌的MIC50為16～>256mg/L。以阿莫西林與舒巴坦配伍則可發揮β-內酰胺酶產酶的抑制，從而提高對產酶菌在體外的抗菌活性，MIC50為0.25～16mg/L，提高了4～64倍以上。從獲得血藥濃度曲線看，受試者體內的阿莫西林濃度變化與舒巴坦的濃度變化類似，達峰時間、消除半衰期相當，說明兩種藥物之間具有同步性。同步性的結果說明藥物可以發揮協同抗菌作用，有利于藥物的治療。

降低舒巴坦的用量，有利于降低藥物成本和不良反應的發生率，保持復方制劑的有效性。本試驗中，在給藥后采血的時間段0～8h內，藥物仍維持到給藥后的6h，其平均血藥濃度值均在1mg/L以上，有利于臨床疾病的治療。故用于上下呼吸道感染、泌尿道感染、婦科感染、皮膚和軟組織感染等建議成人和12歲以上兒童，每日3次，每次1～2片。

1 卓海通，曹曉梅，曹文，等. 用HPLC—熒光檢測同時測定阿莫西林和舒巴坦匹呋酯鉀濃度.中國臨床藥理學雜志，2000，16(2):111-113. 2 沈錚，張亮，馮艷. HPLC－MS同時測定人血漿中阿莫西林和舒巴坦匹呋酯的濃度.中國藥科大學學報，2002，3(1):24-27. 3 Haginaka J，Yasuda H， Uno T. High-performance liquid chromatographic assay of clavulanate in human plasma and urine by flurimetric detection. Journal of Chromatography， 1986，377:269-277.