【摘要】 目的 探討靈芝孢子油對化學性肝損傷的保護作用。方法 對昆明種小鼠每日經口分別灌胃給予0.33g/kg、0.67g/kg和2.00g/kg的靈芝孢子油。30天后，以0.1ml/10g BW的劑量一次性經腹腔注射給予0.125%CCl4（四氯化碳）。結果 0.67g/kg和2.00g/kg劑量組的血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)水平降低，與CCl4對照組比較(P＜0.05)；2.00g/kg劑量組發生肝細胞壞死的動物例數明顯減少，病變程度減輕，壞死評分低于CCl4對照組(P＜0.01)。結論 靈芝孢子油對CCl4化學性肝損傷具有保護作用。

【關鍵詞】 靈芝孢子油 四氯化碳 肝損傷

【Abstract】 Objective To explore the protective effects of ganderoma lucium oil on chemical liver injury.Methods KM mice were given ganderoma lucium oil orally at the dose of 0.33g/kg，0.67g/kg and 2.00g/kg daily.30 days later，0.10ml/kg (0.125%)CCl4 were intraperitoneally injected.Results (1)The serum ALT and AST levels of 0.67g/kg and 2.00g/kg group were significantly decreased compared with the CCl4 control group.(2)The animal amount of happening hepatic cell necrosis changes in 2.00g/kg group was lowered，the degree of pathobiological changes was lightened，and the cell necrosis- changed evaluation had dramatical differences compared with the CCl4 control group.Conclusion Ganderoma lucium oil had protective effects on chemical liver injury.

【Key words】 ganderoma lucium oil CCl4 liver injury

生產和生活中接觸化學性毒物(如CCl4)、酗酒和醫源性藥物損害是導致化學性肝損傷發生的主要途徑。為了減少化學性肝損傷的發生率，有必要研究開發具有護肝作用的生物源性物質。靈芝孢子是靈芝的遺傳“種子”，內藏靈芝生命遺傳基因，富含萌發新生命所需的一切物質［1］。中國科學院的科學家們經多次研究實驗，發現了蘊藏在靈芝孢子內的靈芝孢子油，是靈芝發揮抑制腫瘤、保健、治療作用的“主力”［2］。本文以昆明種小鼠為研究對象，以CCl4為染毒物，探討了靈芝孢子油對化學性肝損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料 樣品靈芝孢子油為淺棕黃色油狀物，軟膠囊包裝，品種為赤芝ganderoma lucium (Leyss，exFr.)Karst.由廣州某生物工程公司采用科學萃取技術提取。各實驗劑量組所需濃度均用玉米油稀釋樣品配成。清潔級昆明種雌性小白鼠，6～8周齡(體重：18～22g)，由廣東省醫學實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK(粵)2003-0002。顆粒飼料由廣東省醫學實驗動物中心提供。SPF級實驗動物使用許可證號：SYXK(粵) 2003-011。室溫(22±2)℃，濕度60%～80％。

1.2 檢測項目 血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）及肝臟病理學檢驗。

1.3 儀器及試劑 用日立7060全自動生化儀進行檢測，試劑生產商為日本和光純藥工業株式會社。CCl4為分析純、AR級，廣州生化試劑廠生產。

1.4 實驗方法 實驗動物在實驗室條件下檢疫1周后，隨機分成空白對照組、CCl4對照組及低、中、高3個劑量組，分別為0.33、0.67、2.00g/kg，每組11～13只小鼠。3個劑量組每天分別按不同劑量灌胃給予樣品，空白對照組和CCl4對照組灌予玉米油(0.1ml/10g)，共30天。于實驗結束前1天將各組動物隔夜禁食16h，各劑量組和CCl4對照組經腹腔注射(0.1ml/10g)一次性給予0.125% CCl4，空白對照組給予玉米油，各受試物劑量組繼續給予受試樣品至實驗結束（與CCl4腹腔注射間隔4h以上）。24h后摘眼球取血，分離血清做生化測定。取肝臟用10%的中性福爾馬林固定，常規制作病理切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化。

1.5 統計學方法 統計資料采用SPSS 10.0統計軟件包進行統計分析，統計方法采用方差分析和秩和檢驗。

2 結果

2.1 靈芝孢子油對受試動物ALT及AST水平的影響 CCl4對照組ALT和AST水平與空白對照組比較升高，差異有非常顯著性（P＜0.01），表明CCl4肝損傷模型成立。靈芝孢子油各劑量組ALT和AST水平與CCl4對照組比較，血清ALT和AST水平下降，其中中、高劑量組血清ALT的差異均有非常顯著性(P＜0.01)；AST的差異均有顯著性(P＜0.05)，見表1。結果表明，ALT和AST結果陽性。

表1 靈芝孢子油對ALT、AST水平的影響 (x±s)

注：空白對照組和CCl4對照組比較采用t檢驗，△△P＜0.01；各劑量組與CCl4對照組比較采用方差分析；比較**P＜0.01，*表示P＜0.05

2.2 靈芝孢子油對受試動物肝臟病理變化的影響 CCl4對照組和靈芝孢子油各劑量組動物的肝臟病理改變以肝細胞壞死和氣球樣變為主，病變部位主要在肝小葉中央靜脈周圍。CCl4對照組與空白對照組比較，有明顯的肝臟損傷，經統計學檢驗，差異有非常顯著性(P＜0.01)，表明CCl4肝損傷模型成立，見表2。靈芝孢子油各劑量組肝細胞壞死評分與CCl4對照組比較，差異有非常顯著性(P＜0.01)；其它病變類型各劑量組與CCl4對照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。結果表明：實驗動物肝臟病理結果陽性，見表3。

表2 靈芝孢子油對受試動物肝臟病理變化得分 (分)

注：0分為大致正常；1分為病變細胞占整個視野的1/4；2分為病變細胞占整個視野的1/2；3分為病變細胞占整個視野的3/4；4分為病變細胞占整個視野

表3 靈芝孢子油對受試動物肝臟病變類型評分的影響

注：肝臟氣球樣變、細胞質凝集及細胞壞死得分為等級資料，采用秩和檢驗；CCl4對照組與空白對照組比較，△△P＜0.01（Mann-Whitney檢驗）；劑量組與CCl4對照組比較，**P＜0.01

3 討論

CCl4是工業生產中常見的化學性毒物，可導致化學性肝損傷。CCl4肝細胞毒性作用的主要機制是使細胞膜發生脂質過氧化，從而破壞細胞膜結構和功能的完整性，使細胞質內酶類滲入血液中，導致血清酶活性發生改變，同時使細胞發生氣球樣變和壞死。靈芝孢子油是由靈芝孢子提取而成的，靈芝孢子油集中了靈芝孢子中的三萜類、多糖類、核苷類等全部有效成分，是靈芝孢子中功效成分的集合體，每20g靈芝孢子粉在破壁后可萃取出1g左右的靈芝孢子油［2］。

中華傳統醫學一直視靈芝為滋補強壯、固本扶正的珍貴中草藥。明朝李時珍編著的《本草綱目》中記載：靈芝味苦、平，無毒，益心氣，活血，補肝氣?，F代醫學證明：靈芝含有多種生物活性物質，靈芝多糖(ganoderma lucidum polysaccharide)能提高機體免疫力，提高機體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤，抗輻射，提高肝臟、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白質的能力，延長壽命等［3，4］。靈芝酸(ganodenic acid)具有強烈的藥理活性，有止痛、鎮靜、抑制組胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細胞等功能［5］。有關醫學專家認定靈芝提取物是最佳的保肝解毒之品［6］。

本研究結果表明，靈芝孢子油可明顯減低CCl4引起的血清ALT及AST水平的升高。病理學觀察發現，靈芝孢子油可使CCl4所致肝細胞壞死動物的發生例數明顯減少，病變程度明顯減輕，肝細胞壞死評分顯著降低，明顯促進了肝細胞的再生及肝功能的恢復。本實驗結果說明靈芝孢子油對CCl4所致化學性肝損傷具有保護作用。

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1 劉虹.靈芝孢子粉藥理作用研究進展.天津中醫學院學報，2002，21(4)：50-51.

2 徐金木.靈芝孢子油是靈芝抑瘤主力.中國食用菌，2002，5：23.

3 胡洪濤.靈芝孢子的研究.藥學進展，2002，26(3)：160-162.

4 Hyung Sik Kim.In vitro chemopreventive effects of plant polysaccharides (Aloe barbadensis Miller，Lentinus edodes，Ganderoma lucium and Coriolus versicolor). Carcinogenesis，1999，20(8)：1637-1640.

5 葉錦先.靈芝孢子藥理和臨床研究.藥膳研究，2000，1：3-4.

6 劉昕.靈芝孢子對小鼠肝癌抑制及其對肝臟的保護作用.西醫結合">中西醫結合肝病雜志，2000，10(5)：31-32.