作者：周旌 李明東 林琪玲 李映紅 陳茵

【摘要】 目的：觀察抗毒復明滴眼液對單純皰疹性角膜炎的治療效果。方法：將實驗性單純皰疹性角膜炎小鼠隨機分為抗毒復明滴眼液治療組、無環鳥苷對照組和溶劑對照組，對3組角膜病變進行觀察與比較。結果：抗毒復明滴眼液 治療組角膜病變范圍較溶劑組明顯縮小（P < 0.05）。結論：抗毒復明滴眼液對實驗性單純皰疹性角膜炎有明顯的治療 效果。

【關鍵詞】 抗毒復明滴眼液；單純皰疹性角膜炎；實驗藥效學

An Experimental Study on Herpes Simplex Kerafitis Vith Kangdufuming Eye Drops

〔Abstract〕 Objective To observe the therapeutic effects of Kangdufuming eye drops on experimental HSK.Methods The infected rabbits with HSK were pided random into the treated group with Kangdufuming eye drops， control group treated with acyclovir eye drops and solvent group. The pathologic changes of the cornea were observed and compared between 3 groups.Results The cornea ulcer areas of the treatment group were smaller than solvent group (P < 0.05).Conclusion Kangdufuming eye drops could be markedly effect in treatment of experimental rabbit with HSK.

〔Key Words〕Kangdufuming eye drops; Herpes simplex keratitis; Experimental effectiveness

單純皰疹性角膜炎（herpetic stromal keratitis， HSK）是一種常見的嚴重致盲性眼病，占角膜病致盲的首位[1-3]。該病由單純皰疹病毒（HSV）感染所引起，可導致角膜溶解、新生血管形成及潰瘍穿孔等嚴重病理改變[2]，是當今世界上危害最嚴重的感染性眼病之一， 占角膜病致盲的 63.2%，近年來由于抗生素、皮質類固醇及其他免疫抑制劑的廣泛應用，其發病率有逐年上升趨勢[3-5]。由于 HSK 病情頑固，易于復發，嚴重影響視功能，已成為眼科臨床的棘手問題，因而受到學者們的重視和關注。本研究觀察了本病治療中藥科研制劑抗毒復明滴眼液對 HSV-1SM44 毒株感染誘導的單皰病毒性角膜炎病理模型的干預效果。

1材料與方法

1.1實驗動物

選用鼠齡為 4~6 周 Balb/c 小鼠 30 只（中山大學實驗動物中心提供），體重 16~18 g，清潔級，雌雄各半。

1.2藥物

①抗毒復明滴眼液為自制科研制劑：取大青葉、貫眾、虎仗、決明子等經生藥鑒定后，清水洗凈，再用純凈水洗 2 次，然后用純凈水浸泡 30 min，煎煮 2 次，收集餾液；合并 2 次煎煮液過濾，餾液加入濾液，過濾，分裝于 8 mL 的眼藥瓶中，相當于生藥材 1.83 g/mL。100℃滅菌 30 min，置 4℃儲存備用。②0.1% 無環鳥苷滴眼液由湖北黔江制藥廠生產。

1.3HSK 模型建立

1.3.1病毒和細胞病毒 HSV-1SM44 毒株（武漢大學醫學院病毒研究所提供），使用前滴度為 20×109 pfu·L-1。生產和檢測病毒的細胞為非洲綠猴腎細胞（VERO）。培養 VERO 細胞的營養液為含 5% 胎牛血清、青霉素（100×103 U·L-1）、鏈霉素（0.1 g·L-1）的 DMEM。

1.3.2角膜接種病毒的方法將小鼠用 1% 地卡因表面麻醉后置于顯微鏡下，用 1 號無菌針頭交叉劃傷雙眼角膜上皮層呈“#”字形，將 5 L 含有 100× 103 pfu 病毒的 DMEM 滴于角膜表面，同時輕輕按摩小鼠眼瞼 10 s。

1.4判斷病變程度

按文獻標準[4]，稍加改動，作病變程度判斷標準：0 級：無著色和混濁；1 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 1/4 以內；2 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 1/4~1/2；3 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 1/2~3/4；4 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 3/4 以上或無變化。

1.5實驗分組處理

將造模后的動物按病情輕重分層隨機分成 3 組，每組 10 只：第 1 組用注射用水滴眼（對照組）；第 2 組用無環鳥苷滴眼液滴眼（無環鳥苷組）；第 3 組用抗毒復明滴眼液。均每天 5 次（間隔 2 h）滴眼，每次 1 滴，連續 15 d。

各組分別于 0、3、7、11、15 d 分別由專人進行小鼠角膜 2% 熒光素鈉染色，裂隙燈顯微鏡記錄角膜病變范圍。

1.6統計學分析

使用 SPSS 13.0 統計軟件，計量資料進行方差分析和 q 檢驗，計數資料用 Ridit 分析。

2研究結果

2.1用藥前各組角膜病變范圍比較

差異無顯著性（檢驗 P > 0.05），具有可比性，見表 1。

2.2各組小鼠角膜病變動態觀察比較

結果見表 2。由表 2 可以看出溶劑對照組接種后第 3 天，角膜出現點狀、樹枝狀病灶，然后不斷擴大；第 7~9 天后出現密集的樹枝狀和地圖狀潰瘍，基質層水腫、浸潤。第 11~13 天病變向深層發展，上皮潰瘍逐漸縮小，個別自愈。抗毒復明滴眼液治療組接種后第 3 天，角膜可見點狀、樹枝狀病變，范圍較局限；5~7 d 時病情較重，角膜出現基質水腫、浸潤。但與溶劑對照組角膜病變范圍比較差異有顯著性（P < 0.01）；到 13 d 大部分小鼠角膜病變已痊愈，表明抗毒復明滴眼液有明顯抑制或減輕實驗性單純皰疹性角膜炎病變的療效。無環鳥苷對照組抑制角膜上皮病變的療效與抗毒復明滴眼液治療組近似，在平均治療 7 d 后角膜病變減輕，兩組治療有效時間相比差異無顯著性（P > 0.05）。

3討論

HSK 是由單純皰疹病毒（HSV）感染所致，其主要臨床表現為點狀角膜炎，病情靜止期，病毒沿神經末梢軸索上行，以亞病毒形式潛伏于三叉神經節細胞內，在各種誘因的刺激下，病毒再度活化而引起復發感染，臨床上分別表現為點狀、樹枝狀、地圖狀、盤狀[1-5]。治療通常用無環鳥苷，局部或全身應用免疫增強劑、干擾素、胸腺肽等。效果尚欠佳，且易復發。無環鳥苷可以競爭性地抑制 HSV-I，對淺層性 HSK 和深層型 HSK 均有效，國內外眼科科界認為它是一種較安全、首選的治療 HSK 的藥物[5，7，8]。但無環鳥苷目前尚存在一些缺陷：口服只有 15%~30% 生物利用度；局部應用可引起濾泡性結膜炎、淺點狀角膜炎、假樹枝狀角膜炎等等，還偶見有引起急性腎功能衰竭和神經毒性報道；對無環鳥苷耐藥的毒株出現增多，對此目前也只能加強耐藥性的監測，還沒有針對的辦法[9-11]。

單純皰疹病毒性角膜炎屬中醫眼科黑睛生翳范疇，臨床表現類似于“聚星障”[6]。近年來，西醫結合">中西醫結合防治 HSK 已經積累不少寶貴的經驗，在辨證、選方、制劑以及對 HSK 復發的認識和治療上，有了長足的發展。但分析現狀，亦存在不足，如選方繁多，用藥不一，“各承家技”；中藥滴眼液生產、推廣有待加強；中藥抗復發機制有待進一步研究等[6，12，13]。

中醫認為黑晴直接與外界接觸，易感六淫之邪。其中以風熱多見[12]。《證治準繩·雜病·七竅門》曰： “翳膜者，風熱重則有之。”《原機啟微·風熱不制之病》：“因熱而召，是為外來；久熱不散，感而自生，是為內發。”內外致病因素所致黑晴病變是相似的。五輪學說認為黑晴屬風輪，內應肝膽，所以本病的發生與肝膽功能失常有關。所以，黑晴易受風熱邪毒乘襲，內應與肝，常為肝火上炎所累。因此，其治療應以疏風解毒、清肝明目為基本大法。抗毒復明方就是我們根據中西醫對本病病理生理的認識，基于疏風解毒、清肝明目的原則，結合臨床用藥經驗，篩選而成的治療本病的中藥復方制劑。無環鳥苷是一種有較高選擇性的抗HSV-1 的藥物，能阻斷 HSV-1 的 DNA 合成及抑制HSV-1 復制，大量臨床試驗證明其療效確切。本實驗研究結果，抗毒復明方具有顯著的抗 HSV-1 作用，對實驗性單純皰疹性角膜炎有明顯的療效，但對其具體作用機理還有待于進一步研究。本研究同時表明：對 HSK 的治療，中醫藥確有獨到之處，中西醫結合取長補短、優勢互補，有利于發揮中醫藥特色，進一步提高 HSK 的臨床療效。