【摘要】 目的觀察左金丸方藥的3種提取液的抑菌、抗炎作用。方法分別制備左金丸的水提取液（WE液）、60%乙醇提取液（AE液）和半仿生提取液（SBE液），采用抑菌環實驗和二甲苯致小鼠耳腫脹法分別評價左金丸的AE液、SBE液、WE液的抑菌、抗炎的藥效作用。結果左金丸提取液對金黃色葡萄球菌的抑制作用強于大腸桿菌，抑菌環的大小順序為：SBE液> WE液> AE液。左金丸提取液對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用，腫脹抑制率大小順序為：SBE液> WE液> AE液。結論左金丸方藥的3種提取液的抑菌、抗炎作用大小順序為：SBE液> WE液> AE液。

【關鍵詞】 左金丸； 藥效學； 抗菌； 抗炎； 水提取液； 乙醇提取液； 半仿生提取液

左金丸是由黃連與吳茱萸按6∶1比例制成的水丸，具瀉火、疏肝、和胃、止痛功能，為辛開苦降的代表方劑，現代臨床上常用于治療胃炎、胃脘痛、消化性潰瘍等疾病。現代藥理研究表明，左金丸具有抗潰瘍、抑菌、抗炎等作用。

目前對左金丸方藥的水提取液、60%乙醇提取液和半仿生提取液的抑菌、抗炎的藥效作用的研究未見報道。本研究以左金丸方藥的水提取液（WE液）、60%乙醇提取液（AE液）和半仿生提取液（SBE液），采用抑菌環實驗和二甲苯致小鼠耳腫脹法分別評價左金丸的AE液、SBE液、WE液的抑菌、抗炎的藥效作用。

1 抗（抑）菌實驗（抑菌環實驗）

利用抑菌劑不斷溶解瓊脂，擴散形成不同濃度梯度，以顯示其抑菌作用。實驗通過抑菌環大小以判斷其是否具有抑菌能力。本實驗適用于抑菌劑與溶出性抗（抑）菌產品的鑒定。

1.1 器材金黃色葡萄球菌 (ATCC 6538)、大腸桿菌(8099) 菌懸液，抑菌劑載體 (5 mm 直徑圓形新華一號定性濾紙片，經壓力蒸氣滅菌處理后，置120℃烤干2 h，保存備用)，微量移液器(5～50 μl，可調式)，游標卡尺，營養瓊脂培養基。

1.2 供試液的制備提取前將黃連、吳茱萸藥材分別粉碎，過14目篩。

1.2.1 水提取液按照處方比例分別稱取黃連粗粉12 g， 吳茱萸粗粉2 g，用水加熱回流提取 3 次，時間分別為2，2，1 h，加水量依次為藥材量的10，8，8倍，4層紗布加100目篩濾過，合并提取液，減壓濃縮至60 ml樣品液（每毫升相當于原藥材0.23 g）。

1.2.260%乙醇提取液按照處方比例分別稱取黃連粗粉12 g，吳茱萸粗粉2g，用60％乙醇濃度加熱回流提取工藝提取，回流3次，時間分別為2，2，1 h，加醇量依次為藥材量的10，8，8倍，4層紗布加100目篩濾過，合并提取液，回收乙醇，減壓濃縮至60 ml樣品液（每毫升相當于原藥材0.23 g）。

1.2.3 半仿生提取液按照處方比例分別稱取黃連粗粉12 g，吳茱萸粗粉2 g， 混勻，加熱回流提取3次（加水量依次為藥材量的10，8，8倍，用水煎煮3次，第 1 煎用水以0.1 mol/L HCl調至pH2.0；第2、3煎用水依次以0.1 mol/L NaOH 調至pH 7.0，9.0；煎煮時間依次為170 min，85 min，40 min），提取液用 4 層紗布加100目篩分別濾過，離心（2 000 r/min，20 min），合并上清液，減壓濃縮至60 ml樣品液（每毫升相當于原藥材0.23 g）。

1.3 操作程序

1.3.1 抑菌片的制備取無菌并干燥的濾紙片，制成直徑為 5 mm，厚不超過 4 mm 圓片(塊)，每 4 片(塊) 1 組，每片滴加1.2項下 3 種供試液各20 μl，然后將濾紙片平放于清潔的無菌平皿內，開蓋置溫箱(37℃) 中烤干后備用。

1.3.2 陰性對照樣片的制備取無菌干燥濾紙片，制成與試驗組大小相同的樣(塊)。每片滴加無菌蒸餾水 20 μl，干燥后備用。

1.3.3 試驗菌的接種用無菌棉拭子蘸取濃度為 5×105～5×106cfu/ml 試驗菌懸液，在營養瓊脂培養基平板表面均勻涂抹3 次。每涂抹1 次，平板應轉動 60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹1周。蓋好平皿，置室溫干燥 5 min。

1.3.4 抑菌劑樣片貼放每次試驗貼放1 個染菌平板，每個平板貼放4 片試驗樣片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面。各樣片中心之間相距 25 mm 以上，與平板的周緣相距 15 mm 以上。貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。蓋好平皿，置37℃溫箱，培養16～18 h 觀察結果。用游標卡尺測量抑菌環的直徑 (包括貼片) 并記錄。試驗重復3 次。

測量抑菌環時，應選均勻而完全無菌生長的抑菌環進行。 測量其直徑應以抑菌環外沿為界。

1.4 評價標準規定 抑菌作用的判斷:抑菌環直徑大于 7 mm 者，判為有抑菌作用；抑菌環直徑小于或等于7 mm 者，判為無抑菌作用。

1.5 抑菌結果見表1。表1 左金丸提取液抑菌結果

1.6 小結左金丸提取液對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均有抑制作用，按抑菌環的大小判斷，對金黃色葡萄球菌的抑制作用強于大腸桿菌。抑菌環的大小順序為：半仿生提取液>水提液>醇提液，可見左金丸3種提取液的抑菌效果為：SBE液> WE液> AE液。

2 抗炎實驗

2.1 動物昆明種小鼠，由山東大學試驗動物中心提供，許可證號SCXK（魯）20030004。

2.2 儀器JY2001型電子天平，上海精密科學儀器有限公司生產；AE100S電子天平，梅特勒托利多儀器（上海）有限公司生產。

2.3 陽性對照藥布洛芬片，0.2 g/片，批號0502166，山東新華制藥有限公司生產。

2.4 統計方法實驗數據以±s表示，組間差異的顯著性檢驗采用t檢驗（SAS 8.0軟件）進行。

2.5 方法取健康無傷的22～25 g 昆明種小鼠110只，雌雄各半，按體重、性別隨機分為11組，10只/組，雌雄各半，設立空白對照組和陽性對照組，三個劑量的“1.2”項下左金丸三種供試液（1.15，2.3，4.6 g/kg），給藥容積為0.1， 0.1， 0.2 ml/10 g，陽性對照藥布洛芬片（0.1g/kg），給藥途徑：口服灌胃。空白對照組灌胃等容積的蒸餾水，連續灌胃2 d(1次/d)。末次給藥1 h 45 min后于小鼠右耳涂二甲苯20 μl/只，25 min后處死動物，以直徑7 mm的打孔器打下小鼠左右耳兩側同部位的耳片，精密稱重，計算腫脹度和腫脹抑制率。

腫脹度(mg)= 右耳重(mg)- 左耳重(mg)

腫脹抑制率（%）=（空白對照組腫脹度-給藥組腫脹度）/空白對照組腫脹度×100%

2.6 結果見表2。

2.7 小結與空白對照組相比，左金丸高劑量組、中劑量組的3種提取液均對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用，差異有非常顯著性意義（P<0.01）；3種提取液對小鼠耳腫脹的腫脹抑制率大小順序為：SBE液> WE液> AE液。

與空白對照組相比，左金丸低劑量組的半仿生提取液對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用，差異有非常顯著性意義（P<0.01）；水提取液和醇提取液對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制無統計學意義（P>0.05）；3種提取液對小鼠耳腫脹的腫脹抑制率大小順序為：SBE液> WE液> AE液。

左金丸提取液對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用，腫脹抑制率大小順序為：SBE液> WE液> AE液。表2 左金丸對小鼠耳腫脹的影響

t檢驗：與空白對照組比較，* P<0.05， ** P<0.01；n=10

因此，左金丸方藥的3種提取液的抑菌、抗炎作用大小順序為：SBE液> WE液> AE液。

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