作者：遲明艷 黃勇 王愛民 蘭燕宇 王永林

【摘要】 目的對蒲薏顆粒進(jìn)行藥效學(xué)研究。方法觀察蒲薏顆粒對荷瘤(H22)小鼠增效減毒作用，對艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長率的影響，對體外培養(yǎng)人食管癌(ECA-109)細(xì)胞的影響，對荷瘤小鼠免疫功能的影響。結(jié)果蒲薏顆粒能增強(qiáng)化療藥物抑瘤作用、拮抗化療藥物對WBC及骨髓有核細(xì)胞的抑制;對艾氏腹水癌小鼠生存時(shí)間有明顯的延長作用;并顯著抑制ECA-109細(xì)胞增殖的細(xì)胞毒作用;同時(shí)該藥具有提高小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。結(jié)論蒲薏顆粒具有抗癌和增強(qiáng)免疫作用。

【關(guān)鍵詞】 蒲薏顆粒; 抗腫瘤; 免疫增強(qiáng)

蒲薏顆粒由蒲公英、生薏苡仁等5味中藥組成，具有清熱解毒、活血化瘀、補(bǔ)益氣血的功效，臨床用于腫瘤放、化療所致的氣血兩虛有很好的療效，我們根據(jù)其功能主治進(jìn)行了有關(guān)的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1 材料

1.1 動物 KM小鼠，雄性，體重18～22 g;SD大鼠，雄性，體重180～210 g，均由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號：SCXK(黔)2002-0001。BALB/C小鼠(SPF級)，雄性，體重16～20 g，簡陽市簡城比爾動物養(yǎng)殖場提供，動物合格證號：0011159。

1.2 瘤株 小鼠肝癌H22：由華西醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所提供;艾氏腹水癌(EAC)細(xì)胞，由重慶醫(yī)科大學(xué)生物工程系超聲研究所提供。人食管癌細(xì)胞(ECA-109)：由中科院生命科學(xué)研究所提供。

1.3 藥物 蒲薏顆粒(PY)由貴州渝生制藥有限公司提供，每克顆粒含4g生藥，批號：20030306;環(huán)磷酰胺(CTX)，上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：031001;5-氟尿嘧啶(5-Fu)，上海旭東海普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：030405;噻唑藍(lán)(MTT)：Sigma公司出品，批號：206-069-5。

2 方法與結(jié)果

2.1 蒲薏顆粒對小鼠肝癌H22化療的增效減毒作用[1～3]在無菌條件下于小鼠右腋皮下接種2×107/ml的H22細(xì)胞懸液，0.2 ml/只，24 h后按體重隨機(jī)分為模型對照組，5-Fu組，PY高、低劑量組，5-Fu加PY高劑量組，5-Fu加PY低劑量組。各組小鼠按表1的劑量灌胃(ig)給藥，1次/d，連續(xù)10 d，模型對照組給予等量生理鹽水(NS)。停藥次日稱重后，摘眼球取血作外周血象檢查，脫頸椎處死動物，剖取并稱重瘤塊，計(jì)算抑瘤率。剝離小鼠右股骨，用1640培養(yǎng)液通過針頭反復(fù)沖洗骨髓并測定洗液中骨髓有核細(xì)胞數(shù)。見表1。

腫瘤抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重對照組平均瘤重)×100%

由表1結(jié)果可見，蒲薏顆粒與5-Fu合用，可使5-Fu的腫瘤抑制率明顯提高;白細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)也有顯著性差異(P<0.05或P<0.01);提示蒲薏顆粒具有增效減毒的作用。表1 對小鼠肝癌H22化療的增效減毒作用與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01;與5-Fu組比較，#P<0.05，##P<0.01;n=10

2.2 蒲薏顆粒對艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長率的影響 [4～5]于無菌條件下小鼠腹腔常規(guī)接種艾氏腹水癌小鼠(1×108/ml)的細(xì)胞懸液，瘤液0.2 ml/只，接種后24 h，按體重隨機(jī)分為5組：模型對照組，CTX組(20 mg/kg)，PY高、中、低劑量組，各組小鼠按表2的劑量ig給藥，1次/d，連續(xù)10 d，模型對照組給予等量NS。記錄存活天數(shù)，計(jì)算生命延長率，比較各組間差異。結(jié)果見表2。

生命延長率(%)=給藥組平均生存時(shí)間-對照組平均生存時(shí)間對照組平均生存時(shí)間×100%表2 蒲薏顆粒對艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延長率的影響由表2結(jié)果可見，蒲薏顆粒高、中、低劑量組EAC荷瘤小鼠生存時(shí)間與模型對照組比較均有顯著差異，生命延長率最高達(dá)50%以上，表明該藥對艾氏腹水癌小鼠生存時(shí)間有明顯的延長作用。

2.3 對體外培養(yǎng)人食管癌(ECA-109)細(xì)胞的影響[1]取大鼠30只，隨機(jī)分為對照組(NS 10 ml/kg)、環(huán)磷酰胺組 (20 mg/kg)、蒲薏顆粒組(12 g/kg)。各組動物分別ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，無菌條件下股動脈取血，4℃ 2 500 r/min離心25 min，吸取血清，同組血清混勻，以0.22 μm微孔濾膜正壓過濾除菌，各組保留部分全血清，其余血清用1 640分別配成含鼠血清60%，30%，15%的培養(yǎng)基，-40℃保存?zhèn)溆谩?/p>

取在對數(shù)生長期的人食管癌細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)株(ECA-109)，用胰酶消化后，稀釋成 1×105個/ml，臺盼藍(lán)染色，檢測活細(xì)胞達(dá)95%以上。分別將腫瘤細(xì)胞接種于96孔板，每孔100 μl，培養(yǎng)24 h后，觀察細(xì)胞貼壁后，分別換成含不同濃度大鼠血清培養(yǎng)基，每組10個平行孔。培養(yǎng)24 h，每孔內(nèi)加入5 mg/ml MTT10 μl，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去培養(yǎng)孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入二甲基亞砜100 μl，待藍(lán)色結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀(波長490 nm)測定各孔吸光度(A)。見表3。

細(xì)胞毒活性(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組OD值對照組OD值)×100%表3 含藥血清對ECA-109細(xì)胞的細(xì)胞毒活性與相應(yīng)濃度對照組鼠血清比較，*P<0.05，**P<0.01;n=10

與相應(yīng)血清濃度的對照組比較，蒲薏顆粒各劑量組的OD值明顯減小，差異顯著(P﹤0.05，P﹤0.01)，高劑量組細(xì)胞毒活性大于20%。顯示蒲薏顆粒有顯著的抑制ECA-109細(xì)胞增殖的細(xì)胞毒作用。

2.4 對荷瘤(S180)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響B(tài)ALB/C小鼠，在無菌條件下，接種S180細(xì)胞懸液，0.2 ml/只，接種后24 h，分組，給藥方法見表4。分別于給藥的第3天和第6天動物皮下注7%的2.4-二硝基氯苯丙酮液0.02 ml/只致敏。于第1次致敏的第10天，動物一側(cè)耳用1%的2.4-二硝基氯苯甘油溶液0.02 ml進(jìn)行涂布攻擊，另側(cè)耳作對照，24 h后處死動物，剪下兩耳，打孔器取耳片，稱重，以左右兩耳片的重量差作為腫脹度，比較各組間差異。同時(shí)取胸腺、脾臟稱重，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。見表4。

由表4結(jié)果可見，蒲薏顆粒可使荷瘤小鼠降低的遲發(fā)型超敏反應(yīng)水平、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯改善，具有提高荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫水平作用。表4 對荷瘤(S180)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3 討論

“蒲薏顆粒”處方為貴州省民間中醫(yī)祖?zhèn)鹘?jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用五十余年，由蒲公英、薏苡仁等5味藥組成。方中蒲公英清熱解毒、消腫散結(jié)，利尿通淋。現(xiàn)代藥理學(xué)研究其主要成分蒲公英多糖是一種免疫促進(jìn)劑，其抗癌活性與免疫激活效果有關(guān)[6];薏苡仁清熱排膿、健脾滲濕，伸筋除痹痛，其中的薏苡仁內(nèi)酯能抑制艾氏腹水癌，而且能參與機(jī)體免疫功能，提高機(jī)體的免疫監(jiān)視[7]。方中其他3味藥：何首烏、靈芝、三棱則扶正以助君臣藥的祛邪之功。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，蒲薏顆粒確有抗癌和免疫增強(qiáng)作用，從而在實(shí)驗(yàn)研究上為蒲薏顆粒治療惡性腫瘤提供了理論依據(jù)，同時(shí)印證了蒲薏顆粒的臨床療效。