作者：靳維榮，孫強，單成鋼，王志芬

【摘要】 目的對丹參藥材中丹參酮ⅡA含量測定方法(藥典方法和改進方法)進行對比研究分析，確定改進方法的可行性和優越性。方法在原高效液相色譜( HPLC)法的基礎上，通過改變流動相的配比關系，對原藥典測定方法作出改進，并將測定結果與藥典方法測定結果進行比較。結果①采用改進后的測定方法，色譜峰峰形好，丹參酮ⅡA主峰和其它峰分離度及拖尾因子符合要求;②同一批次丹參的丹參酮ⅡA含量測定結果表明兩種測定方法無顯著性差異(P>0.05);同時，改進的測定方法可以將測定時間大大縮短，節約流動相。結論改進后的方法重現性好，測定結果準確可靠，節約檢測時間和流動相，降低檢驗成本，是值得推薦的一種替代方法。

【關鍵詞】 復方丹參片; 丹參酮ⅡA; 測定方法; 改進

丹參是臨床上廣泛使用的祛瘀止痛，活血通經，清心除煩的藥材，《中國藥典》2005年版Ⅰ部采用高效液相色譜法測定丹參酮ⅡA含量。在實際檢測工作中發現采藥典方法中的以甲醇-水(73∶27)流動相，流速1 ml·min-1時，丹參酮ⅡA保留時間在21 min左右，出峰時間較晚，浪費流動相和檢測時間。為此，我們對丹參中丹參酮ⅡA含量測定方法的流動相進行了改進。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent DAD檢測器，Agilent Chemstation工作站(美國安捷倫科技公司)。照品：丹參酮ⅡA(中國藥品生物制品檢定所，批號：110766 -200416);丹參藥材(市場采購);甲醇為色譜純 (天津市科密歐化學試劑開發中心);水為重蒸餾水;其余試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 藥典測定方法[1]色譜柱為Phenomenex Prodigy ODS3-C18色譜柱(4.60 mm×250 mm，5 μm);流動相為甲醇-水(73∶27);檢測波長270 nm，流速1.0 ml·min-1，柱溫為室溫。

2.2 改進的測定方法在藥典測定方法基礎上，改變流動相為：甲醇-水(80∶20)，其余和藥典方法相同。

2.3 供試樣品溶液的制備采用《中國藥典》2005年版Ⅰ部丹參藥材中丹參酮ⅡA含量測定項下的方法制備。

2.4 對照品溶液的制備精密稱取丹參酮ⅡA對照品10.02 mg，置50 ml棕色瓶中，加甲醇稀釋至刻度，另取2 ml置25 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得丹參酮ⅡA對照品溶液(16.03 μg/ml)。

2.5 線性關系考察按“2.2”項下的色譜條件，分別用自動進樣器進5，7.5，10，15，20，25 μl的上述對照品溶液，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，線性回歸，得方程: Y=1 744.1X-21.93，r= 0.999 3(n=6)，結果表明丹參酮ⅡA 0.080 2～0.400 8 μg間呈良好的線性關系。

2.6 精密度和穩定性實驗取“2.4”項下的對照品溶液，連續進樣6次，記錄丹參酮ⅡA的峰面積，計算RSD=1.33%(n=6)。并于室溫下放置2，4，6，8，12，24 h后測定，計算測定丹參酮ⅡA峰面積的得RSD=1.72% (n=6)，峰面積積分值基本不變。

2.7 回收率實驗精密稱取已知含量的丹參藥材樣品6份，同“2.3”項下方法，制成供試品溶液，取供試品溶液1 ml，置1 000 ml的容量瓶中，加入丹參酮ⅡA對照品0.015 0 mg，用甲醇稀釋到刻度，采用改進后的方法進行測定，并計算回收率。結果見表1，平均回收率為97.90%，RSD為1.37%。表1 丹參酮ⅡA對照品回收率測定結果取樣量m/g樣品含量m/mg加入量m/mg測得量m/mg回收率(%)平均回收率(%)

2.8 樣品測定采用改進的測定方法和藥典方法分別對同一批丹參藥材中的丹參酮ⅡA進行了測定，結果表明兩種測定方法結果無顯著性差異(P>0.05)，結果見表2表2 兩種測定方法對同一批次樣品測定結果測定方法樣品序號丹參酮ⅡA含量(%) 。見圖1～4。圖1 藥典測定方法下丹參酮ⅡA對照品HPLC圖譜圖2 改進的測定方法下丹參酮ⅡA對照品C圖譜圖3 藥典測定方法下丹參樣品的HPLC圖譜圖4 改進的測定方法下丹參樣品的HPLC圖譜

3 討論

測定結果表明，改進的測定方法測定丹參樣品時，丹參酮ⅡA主峰和其它峰分離度R大于1.5;主峰拖尾因子T在0.98～1.03間，符合《中國藥典》2005版Ⅰ部的要求。兩種方法對同一批次的丹參藥材測定的結果沒有顯著性差異(P>0.05)，但改進的測定方法可以將測定時間大大縮短，同時節約流動相，此方法經濟、快速，是非常值得推薦的一種替代方法。