【關鍵詞】 夜寧膠囊；急性毒性試驗；Ames試驗；小鼠

夜寧膠囊是解放軍全國心理疾病防治中心藥物研究室與江蘇康緣藥業股份有限公司研制的新制劑中藥，本品由合歡皮、靈芝等組成。具有改善睡眠、鎮靜安神的功效，對失眠、睡眠不穩、多夢、頭暈頭昏的人有很好的作用。筆者通過急性毒性試驗、遺傳毒性試驗、30 d喂養試驗對夜寧膠囊進行毒理作用的研究，以方便臨床用藥，現報告如下。

1 實驗材料

1.1 樣品 夜寧膠囊［由江蘇康緣藥業股份有限公司(批號041012、041014、041016)］，推薦成人服用量為4.5 g/60 kg·bw·d(每d 3次、每次3粒、內含夜寧藥粉0.5 g/粒)。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠(南京中醫藥大學藥理研究中心動物房提供，合格證號：蘇實動證200412號)，SD大鼠(南京中醫藥大學藥理研究中心動物房提供，動物合格證：蘇實動證200412號)。環境溫度18-22℃，相對濕度40-65%。

1.3 檢驗儀器 XD811生化分析儀。

2 實驗方法

2.1 急性毒性試驗

2.1.1 小鼠急性毒性試驗 選擇體重20-24 g健康昆明種小鼠20只，雌雄各半。受試物劑量為60 g·kg-1·bw、灌胃量為0.2 mL·10 g-1·bw，空腹連續ig 3次，每次間隔2 h，ig后4 h內密切觀察小鼠活動及死亡情況，喂養觀察14 d，記錄小鼠中毒表現及死亡情況。

2.1.2 大鼠急性毒性試驗 選擇體重170-210 g健康SD大鼠20只，雌雄各半。受試物劑量為120 g·kg-1·bw。灌胃量為1 mL·100g-1·bw，空腹連續ig 4次，每次間隔2 h，ig后4 h內密切觀察小鼠活動及死亡情況，喂養觀察14 d，記錄大鼠中毒表現及死亡情況。

2.2 遺傳毒性試驗

2.2.1 Ames試驗 平板滲入法。試驗設312.5、625、1250、2500、5000 μg/皿5個劑量組，同時設自發回變、溶劑對照及陽性對照組。每個組別均設5個平皿，37℃培養48 h，計數每皿回變菌落數。

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗 健康昆明種小鼠，體重25-30 g，雌雄各半，共60只。隨機分為6組、每組10只，雌雄各半。4個試驗組受試物劑量分別為625、1250、2500、5000 mg·kg-1·bw，另設陰性對照(蒸餾水)和陽性對照組(環磷酰胺40 mg·kg-1·bw)。采用間隔24 h 2次ig法進行試驗，末次ig后6 h處死小鼠，取胸骨骨髓常規制片鏡檢，每鼠計數1000個嗜多染紅細胞、記錄微核細胞數，計算微核細胞發生率(千分率)。

2.2.3 小鼠精子畸形試驗 健康昆明種，雄小鼠25只，體重26-30 g，隨機分為5組，每組5只。3個試驗組受試物劑量分別為2.50、5.00、10.00 g·kg-1·bw，另設陰性對照(蒸餾水)和陽性對照組(環磷酰胺40 mg·kg-1·bw)。連續5 d ig給予受試物，首次ig后第35 d處死動物，常規制片，每只動物記數1000個結構完整的精子，記錄畸變類型和數量，計算各組精子畸形率(百分率)。

2.3 30 d喂養試驗 選擇SD健康離乳大鼠80只，平均體重雌(76.3±8.0) g，雄(81.0±8.0) g，按體重隨機分組法分為4組，每組20只，雌雄各半。以推薦人日常服用夜寧膠囊每天劑量4.5 g·60 kg·bw設計3個受試物組，夜寧膠囊劑量每天分別為2.0、4.0、8.0 g·kg·bw(相當于推薦人日常服用劑量的25、50、100倍)。將受試物按大鼠體重的10計算食物攝入量分別摻入大鼠基礎飼料中喂養試驗大鼠，對照組喂飼基礎飼料。各組動物單籠喂養、自由攝食及飲水、每周稱體重1次并結算每鼠飼料攝入量，連續喂養30 d。試驗結束后股動脈取血進行血液生化檢驗，處死大鼠進行各項病理指標檢驗。

2.4 觀察指標 大鼠一般表現、體重、增重、進食量及食物利用率。血液學指標：血紅蛋白(Hb)、紅細胞計數(RBC)、白細胞計數(WBC)及分類、血小板計數(PLT)。血液生化指標：血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、尿素氮(BU)、肌酐(CRE)。臟器系數：對肝、腎、脾進行臟器/體重比值測定，計算臟器系統(臟器/體重×100)。病理學檢查：肉眼觀察試驗動物主要臟器病理改變，并對肝、腎、脾、胃、十二指腸、結腸進行病理組織學切片檢查。

3 實驗結果

3.1 急性毒性試驗 灌胃給予受試物后，兩種性別小鼠和大鼠均未見明顯中毒癥狀，14 d內動物無死亡。因此認為該受試物對兩種性別小鼠最大給藥量均大于60 g·kg-1·bw和大鼠的最大給藥量均大于120 g·kg-1·bw。

3.2 遺傳毒性試驗

3.2.1 Ames試驗 見表1。表1 夜寧膠囊Ames試驗滲入法結果 注：以上結果為3個平皿的均值±標準差，①2AF:10 μg/皿 ②1，8二羧葸醌：50 μg/皿 ③敵克松：50 μg/皿 ④NaN3：1.5 μg/皿 ⑤甲基環酸乙酯：1.0 μl/皿。

由表1可見，2次試驗中受試物各劑量組回變菌落數均未超過自發回變菌落數的2倍，亦無劑量2反應關系，說明在加與不加S9時該樣品對鼠傷寒沙氏菌TA97、TA98、TA100、TA1024株試驗菌株均未呈現致突變作用；但在-S9時，樣品在2500-5000μg/皿劑量范圍內對測試菌株TA97、TA98、TA100、TA102具有明顯的抑制作用；在+S9時，樣品在2500-5000 μg/皿劑量范圍內對測試菌株TA100也有明顯的抑菌作用。夜寧膠囊經2次Ames滲入法試驗，結果相近。

3.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗 受試物各劑量組微核率與陰性對照組之間無顯著性差異(P＞0.05)，而環磷酰胺陽性對照組與陰性對照組之間有高度顯著性差異(P＜0.01)，說明該樣品無致小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核增生作用。小鼠精子畸形試驗：受試物各劑量組小鼠精子畸形率與陰性對照組之間無顯著性(P＞0.05)，而環磷酰胺陽性對照組之間有非常顯著性差異(P＜0.01)，說明該樣品無致小鼠精子畸形作用。

3.3 30 d喂養試驗 經試驗各組大鼠體重、增重、進食量及食物利用率和對照組比較未見明顯差異(P＞0.05)，結果為各組大鼠進食、活動及生長發育都正常。對大白鼠血常規及血生化指標影響，經試驗可見各受試物劑量組主要生化指標(GIU、CHO、TG、ALT、AST、TP、ALB、BUN、CRE)、全血常規指標(Ub、RBC、PLT、WBC及分類)均在正常范圍人，和陰性對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。主要臟器系數及病理組織學檢查，對全部實驗動物進行大體肉眼解剖檢查，未發現異常，對高劑量組及對照組大鼠主要臟器肝、腎、脾、胃、十二指腸、結腸、進行病理組織學切片檢查，未發現病變，對肝、腎、脾進行臟器系數測定，各劑量組與對照組間無異常(P＞0.05)。

4 討論

夜寧膠囊內容物為合歡皮、靈芝等提取的混合物。研究表明，具有改善睡眠、鎮靜安神的功效，對失眠、睡眠不穩、多夢、頭暈頭昏的人群有很好的作用。本試驗證明夜寧膠囊屬無毒藥物，符合非處方藥物的使用要求。

【參考文獻】 ［1］王 峰，文玉晶，牛俊奇，等.丁香葉片藥理和毒理的實驗研究［J］.臨床肝膽雜志，2000，9(2)：123-125. ［2］黃敬耀，閔 江，涂秀英，等.冠心生脈顆粒毒理實驗研究［J］.江西中醫學院學報，2004，10(6)：234-235. ［3］周家明，崔秀明，王朝梁，等.三七睡舒膠囊毒理學試驗研究［J］.中成藥，2005，27(5)：568-570.