【摘要】 目的 研究甲基蓮心堿(Nef)納米脂質體(NefNL)對小鼠腦缺氧及腦栓塞的治療作用。方法 用亞硝酸鈉制造小鼠腦缺氧模型，誘導劑制造小鼠腦栓塞模型。觀察NefNL對這兩種小鼠病模的治療效果，并與生理鹽水組、同劑量Nef注射液組、普通Nef脂質體組進行比較。結果 與生理鹽水組相比，Nef 3種制劑均能顯著延長小鼠亞硝酸鈉中毒后的存活時間，提高小鼠對抗腦栓塞的能力(P<0.05);與Nef注射液組、普通Nef脂質體組相比，NefNL的治療效果均有明顯提高(P<0.05)。結論 NefNL對小鼠腦缺氧以及腦栓塞有明顯的預防保護作用。

【關鍵詞】 甲基蓮心堿;納米脂質體;小鼠;腦缺氧;腦栓塞;療效

(Department of Pharmacy，Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan，Hubei 430060，China)Abstract:Objective To study the effects of neferine nanoliposomes (NefNL) on cerebral anoxia and cerebral embolism in mice.Methods NaNO2 was used to induce cerebral anoxia in mice. Cerebral embolism in mice was induced by the revulsant. The effects of NefNL was observed compared with physiological saline (negative control group)，Nef injection and the common Nef liposomes at the same concentration (positive control groups).Results Compared with the negative control group，all the three Nef preparations had significant effects on the two mice models.Compared with the two positive control groups，NefNL could enhance the effects significantly. Conclusion NefNL had promising preventative effects on cerebral anoxia and cerebral embolism in mice.

Key words:nerefine; nanoliposomes; mice; cerebral anoxia; cerebral embolism; effects

甲基蓮心堿(neferine，Nef)是從蓮子心中提取的雙芐基異喹啉類生物堿，具有心血管保護、中樞保護、解毒等諸多藥理活性。其中，Nef能夠重活化有機磷中毒小鼠被抑制的腦膽堿酯酶，可能與其能通過血腦屏障(BBB)在腦內分布有關[1]。而理想的腦靶向制劑應具有的性質之一為粒子粒徑≤100 nm[2]。為進一步提高Nef的腦靶向性，本實驗研制了Nef的納米脂質體(NefNL)，并探討其對小鼠急性腦缺血以及腦栓塞的影響，為腦靶向性研究提供實驗依據。

1 試藥與動物

1.1 試藥

Nef純品(武漢大學人民醫院中藥制劑實驗室自制，質量分數經歸一化法測定>98%);卵磷脂(Sigma公司);膽固醇(上海政翔化學試劑研究所);α生育酚(Sigma公司);海藻糖(南寧中諾生物工程有限責任公司);亞硝酸鈉(天津市博迪化工有限公司，批號：20070216);腦栓塞誘導劑(自制，含膠原蛋白和腎上腺素，批號：20100318);其他試劑為分析純。

1.2 動物

昆明種小鼠，體質量18～22 g，雌雄各半，武漢大學中南醫院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(鄂)20080001。

廣東藥學院學報 第26卷 第4期 談弋，等.甲基蓮心堿納米脂質體對小鼠腦缺氧以及腦栓塞的療效觀察

2 方法與結果

2.1 Nef各種制劑的制備

2.1.1 Nef注射液的制備 稱取Nef原料，用0.5 mol/L的HCl溶解， 0.5 mol/L的NaOH調pH至6.0，加蒸餾水至足量，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，115 ℃高壓滅菌30 min即得。

2.1.2 Nef普通脂質體的制備 根據預試驗結果及

2.1.3 NefNL的制備 按“2.1.2”項下操作，最后將脂質體初懸液經高壓均質機在20 kpsi( 1.4 × 106 kPa )壓力下經50 nm膜擠壓乳勻5～8次，直至脂質體粗懸液由渾濁變為較澄清的微帶藍色乳光的納米脂質體懸液。

2.2 亞硝酸鈉所致小鼠腦缺氧實驗[4]

取小鼠40只，隨機分為4組，每組10只。分別為生理鹽水陰性對照組、Nef注射液陽性對照組、普通Nef脂質體陽性對照組、NefNL組。于實驗前3 d開始，每天尾靜脈注射給藥1次，給藥劑量為30 mg/kg，第4天最后1次給藥15 min后，腹腔注射NaNO2溶液(質量濃度25%)250 mg/kg。記錄從注射亞硝酸鈉開始至死亡時間，記為小鼠存活時間。結果見表1。表1可見，與生理鹽水組相比，3種Nef制劑均可顯著延長小鼠亞硝酸鈉中毒后的存活時間(P<0.05);而與Nef注射液組相比，普通Nef脂質體組的存活時間差異無顯著性，而NefNL組能顯著延長小鼠存活時間(P<0.05)。表1 各種Nef制劑對亞硝酸鈉所致小鼠腦缺氧后存活時間的影響

2.3 小鼠腦栓塞實驗[5]

取小鼠40只，隨機分為4組，每組10只。分組方法及前3 d給藥方法同“2.2”，第4天最后1次給藥15 min后，尾靜脈注射誘導劑(膠原蛋白225 μg /只;腎上腺素9 μg/只)0.1 mL/10 g，以誘發動物急性腦栓塞形成。觀察每組動物給予誘導劑后15 min內出現偏癱、死亡及15 min內偏癱后恢復正常的動物數，計算保護率(保護率=恢復數/10)。結果見表2。用簡化直接概率法[4]進行統計比較，與生理鹽水組相比，3種Nef制劑均能顯著提高小鼠對抗腦栓塞的能力(P<0.05);與Nef注射液組相比，普通Nef脂質體組的保護率差異無顯著性，而NefNL組能顯著提高小鼠保護率(P<0.05)。表2 各種Nef制劑對誘導劑致小鼠腦栓塞的影響

3 討論

一種藥物只有通過BBB并在中樞保持有效濃度，才能在中樞發揮藥效。Nef注射液已被證實能夠通過小鼠BBB進入腦組織，且在腦組織中的濃度隨給藥劑量的增加而增加[1]。為進一步增加Nef的腦靶向性，本研究利用納米脂質體為載體，制備NefNL，通過其對兩種小鼠腦部病模的療效，初步判斷其腦靶向性。

本研究結果表明，與生理鹽水組相比，3種Nef制劑均可顯著延長小鼠給予亞硝酸鈉后的存活時間，并能提高誘導劑所致小鼠腦栓塞的保護率(P<0.05)，提示Nef本身的心血管活性顯著，可提高機體的血氧利用率，增加腦血流量，增加氧氣供應，從而改善機體缺氧狀態，并通過擴張腦血管，有效抑制腦血栓的形成[6]。同時，與同劑量Nef注射液及普通脂質體相比，NefNL可顯著延長小鼠給予亞硝酸鈉后的存活時間，并能提高誘導劑所致小鼠腦栓塞的保護率(P<0.05)。說明納米脂質體作為Nef的載體，可進一步增加Nef在小鼠腦部的濃集，療效顯著增加。這是由于納米脂質體的粒徑在100 nm以下，這種微粒系統更容易使包封的藥物進入BBB，從而提高療效。關于NefNL的腦靶向性研究正在進行中。