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摘要：稻縱卷葉螟(Cnaphalocrocis medinalis)是一種主要的水稻害蟲,幾丁質(zhì)合成酶是昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)合成通路中的一個關(guān)鍵酶,在昆蟲生長發(fā)育中具有重要作用,是控制害蟲的理想靶標(biāo)。本文采用RNA干擾(RNAi)技術(shù),以稻縱卷葉螟幾丁質(zhì)合成酶A基因(CmCHSA)為靶標(biāo),設(shè)計兩個靶位點CmCHSA-I和CmCHSA-II,在體外分別合成其雙鏈RNA(dsRNA),用顯微注射法導(dǎo)入3齡幼蟲體內(nèi),然后通過表型觀察和熒光定量PCR(RT-q PCR)檢測干擾效應(yīng)。結(jié)果表明,注射兩種dsRNA后縱卷葉螟對水稻的取食明顯下降,生長發(fā)育阻滯,蟲體變小變黑和畸形,有的出現(xiàn)死亡。RT-q PCR表明,注射CmCHSA-I和CmCHSA-II兩種dsRNA在96 h后,CmCHSA的表達(dá)量相比對照分別下降了59%和64%。注射CmCHSA-I和CmCHSA-II兩種dsRNA 7 d后,稻縱卷葉螟的死亡率分別為80%和83.33%,與對照組相比,分別增加了66.67%和70%。本研究用注射法RNAi技術(shù)成功實現(xiàn)了對稻縱卷葉螟幾丁質(zhì)合成酶A基因的沉默,為利用該技術(shù)研究昆蟲基因的功能,以及通過轉(zhuǎn)基因RNAi技術(shù)防治稻縱卷葉螟奠定了基礎(chǔ)。

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