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摘要：WRKY轉(zhuǎn)錄因子作為植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控生長發(fā)育、次級代謝、衰老以及對生物和非生物脅迫的響應等過程。本研究首先利用反轉(zhuǎn)錄PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法從甘藍型油菜(Brassica napus)中克隆了WRKY72的cDNA序列(GenBank No.KC246585),其編碼蛋白含有1個保守的WRKY結(jié)構(gòu)域和1個C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)。利用綠色熒光蛋白進行亞細胞定位觀察,結(jié)果顯示BnaWRKY72定位于細胞核。雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn),BnaWRKY72對W-box元件驅(qū)動的螢火蟲熒光素酶報告基因具有轉(zhuǎn)錄激活活性。通過多種激素、生物和非生物逆境處理,利用qRT-PCR檢測BnaWRKY72表達量變化,發(fā)現(xiàn)該基因能夠響應冷害脅迫以及核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)侵染。利用酵母雙雜交和雙分子熒光互補技術(shù),篩選并驗證了BnaWRKY72的多個互作蛋白,包括同亞組的BnaWRKY31、BnaWRKY42及其自身;同時,BnaWRKY72與小分子類泛素修飾蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO) 3發(fā)生互作,提示SUMO化修飾可能參與其活性調(diào)節(jié)。本研究首次探討了BnaWRKY72分子特性,為深入研究其抗逆功能及相關(guān)分子機制提供了參考依據(jù)。

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