作者：羅志謀，金曉龍，謝蘊，潘玉林，浦文蘭，蔡沛然，洪亮

【摘要】 目的 探討大腸癌中增殖細胞核抗原(Ki-67)和胎盤型谷胱甘肽-S-轉移酶(GST-Pi)、拓撲異構酶-Ⅱ(TOPO-Ⅱ)及P-糖蛋白(Pgp)耐藥基因的表達及臨床意義。 采用即用型免疫組化微波加熱法，對170例大腸癌中Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp耐藥基因的檢測。結果 (1)170例大腸癌中Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp的陽性表達率分別為56.47%和67.05%、44.11%、19.41%。(2)大腸癌中Ki-67的陽生率與GST-Pi、TOPO-Ⅱ陽性表達呈正相關(P<0.05)。結論 部分大腸癌患者的體內存在多向耐藥基因，或增殖活性高的大腸癌具有介導癌細胞內原發存在對GST-Pi、TOPO-Ⅱ和Pgp所介導的抗癌藥物的耐藥基因。因此，在化療前對大腸癌中進行Ki-67與耐藥基因的檢測，有助于預后判斷與選擇合理聯合用藥，提高療效與存活率，延長生存期，具有臨床實際意義。 【關鍵詞】 大腸癌；增殖細胞核抗原；耐藥基因；免疫組化 【Abstract】 Objective To probe into the expression and clinical significance of nucleus antigen in proliferation cell (Ki-67) and drug resistance gene as glutathione-s-transferase-pi (Gst-Pi)，topoisomerase Ⅱ(TOPO-Ⅱ，P-glycoprotein(Pgp) in large bowel carcinoma.Methods To test and analyze the ki-67 and drug resistance gene as GsT-pi、Topo Ⅱ，Pgp in 170 cases of large bowel carcinoma by instant microwave heat-immunohistochemistry.Results (1)Positive expression rates of Ki67，GST-Pi，Topo-Ⅱ，Pgp in 170 cases of large bowel carcinoma were 56.47%，67.05%，44.11% and 19.41%，respectively.(2)re were some correlations among the positive expression of Ki-67，GsT-Pi，and Topo-Ⅱ in large bowel carcinoma (P<0.05).Conclusion There are presence of multidrug resistance genes in some patients of large bowel carcinoma or resistance to GsT-Pi，Topo-Ⅱ，PgP existed in the fast proliferation cancer cell primarily.So before starting the chemotherapy，determination of Ki-67 and the above resistance gene may be helpful for clinicians to select a rational regime and dosage to impove the curative effect and prolong the life span. 【Key words】 large bowel carcinoma；necleus antigen in proliferation cell；resistame gane；immunohistochemistry 大腸癌具有較高的發病率和死亡率，在上海地區的發病率呈上升趨勢，我國大腸癌占惡性腫瘤中的第四或第五位［1］。，對大腸癌的主要是手術與化療，臨床醫生多采用聯合方案或憑主觀判斷進行用藥。最近有發現，腫瘤細胞內耐藥蛋白往往是導致臨床化療失敗的主要原因之一［2］。本文研究通過檢測大腸癌化療前腫瘤細胞的增殖活性與耐藥性，旨在判斷預后與為防止多種耐藥性的誘導方面提供一定的臨床病理依據。 1 材料與方法 1.1 材料 收集我院病理科2003年1月～2004年12月外科手術切除的大腸癌標本170例，術前均未做過化療，男83例，女87例，年齡29～88歲，平均62.85歲。均經HE病理診斷明確。大腸癌的分化程度：高分化管狀腺癌42例，中分化管狀腺癌70例，低分化管狀腺癌29例，粘液腺癌26例，印戒細胞癌3例。大腸癌的臨床分期：A期25例，B期55例，C期82例，D期8例。 1.2 方法 標本石蠟連續切片4張，厚3μm，分別免疫組織化學即用型二步染色。檢測藥盒購自上海長島抗體診斷試劑有限公司，單克隆抗體。Ki-67陽性者提示腫瘤細胞的增殖活性增強，惡性程度高，預后差；GST-Pi陽性者提示腫瘤細胞對GST-Pi所介導的抗癌藥物順鉑有耐藥傾向；TOPO-Ⅱ陽性患者提示腫瘤細胞對拓撲異構酶抑制劑有耐藥傾向；多藥耐藥(MDR)基因產物P-糖蛋白(Pgp)的陽性者提示腫瘤細胞對長春新堿類和阿霉素有耐藥傾向。并用胃癌腫瘤細胞對Ki-67與GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp標記陽性表達作為陽性的對照組。 1.3 結果判斷 在光鏡觀察陽性細胞呈棕褐色細胞顆粒狀。Ki-67定位于細胞核內(圖1)，GST-Pi定位于細胞核或細胞質內(圖2)，TOPO-Ⅱ定位于細胞核內(圖3)，MDR定位于細胞質和細胞膜上(圖4)。根據腫瘤細胞的陽性數及其染色反應的深淺進行判定，采用高倍視野隨機計數500個腫瘤細胞所占的比例，定位3級，未見陽性表達或陽性細胞數<5%為陰性(-)，5%≤陽性細胞<30%為陽性(+)，30%≤陽性細胞<60%為中度陽性(++)，≥60%的為強度(+++)。 1.4 統計學處理 采用卡方檢驗，P<0.05有統計學意義。 2 結果 2.1 Ki-67與3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥基因在大腸癌中檢測結果 本組大腸癌標本中，Ki-67的陽性表達率為56.47%(96/170)，其表達增殖狀態以陽性居多；GST-Pi的陽性表達率為67.06%(114/170)，以強陽性表達居多；TOPO-Ⅱ陽性表達率為44.12%(75/170)，以強陽性表達居多；但Pgp的陽性表達只有19.41%(33/170)，并以弱陽性居多。說明大腸癌中Ki-67陽性表達與GST-Pi、TOPO-Ⅱ的陽性表達呈正相關(r值分別是0.974，0.980，P<0.05)；但Ki-67的陽性表達與Pgp的陽性表達不相關(r值為0.784，P＞0.05)，提示大腸癌中Ki-67高表達陽性率的細胞腫瘤易對GST-Pi和TOPO-Ⅱ產生耐藥性。見表1。

表1 大腸癌中Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ及Pgp的陽性檢測結果

2.2 Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ及Pgp的表達在組織學類型中關系 本組大腸癌中以中高分化的管狀腺癌多見。大腸癌對Ki-67和3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥基因均有不同程度的陽性表達，與不同組織類型大腸癌的陽性表達呈正相關(r值分別為0.988、0.993、0.984、0.958，P<0.05)。見表2。

表2 Ki-67和GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp表達與組織類型關系

2.3 大腸癌患者年齡構成分布與Ki-67和3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥表達關系 本組大腸癌中80～89歲12例(7.06%)；以70～79歲病例數最多，為58例(34.11%)；60～69歲45例(26.47%)；50～59歲30例(17.65%)；40～49歲20例(11.76%)；29～39歲5例(2.94%)。報道中在我國大腸癌的發病年齡高峰期為30～50歲，國外為50～60歲［3］。本組60～79歲的病例占66.47%(113/170)。大腸癌患者各年齡段對Ki-67和3種(GST-Pi、TOPO-Ⅱ、Pgp)耐藥基因均呈不同程度的陽性表達。年齡與Ki-67、GST-Pi、TOPO-Ⅱ的陽性表達呈正相關(r值分別為0.944、0.936和0.926，P<0.05)；耐藥與Pgp的陽性表達不相關(r值為0.350，P<0.05)。見表3。