作者：李安源 呂紅 孫蓉 呂麗莉 張希林 王平

【摘要】 目的 探討寧動顆粒對抽動穢語綜合征的藥效學及其毒性的影響。方法 采用寧動顆粒灌胃法觀察對小鼠自主活動的影響、對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響、對去水嗎啡(APO)引起小鼠攀爬行為的影響、對小鼠腦內多巴胺（DA）含量的影響及對小鼠急性毒性的影響。結果 寧動顆粒高、低劑量均可明顯抑制小鼠的自主活動能力；高劑量有協同閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的作用；高、低劑量均有明顯抑制APO引起的小鼠黑質-紋狀體系統內DA功能增強的作用，明顯縮短持續垂直攀爬時間；高劑量可以降低腦內DA含量，低劑量也有降低腦內DA含量的作用趨勢。急性毒性試驗1 d內給小鼠藥量相當于兒童用量的77.3倍，小鼠生存良好。結論 藥理學實驗證明寧動顆粒能降低腦內DA含量，有鎮靜、拮抗APO引起的攀爬行為增強及助睡眠作用；毒理學表明寧動顆粒無明顯毒副反應。

【關鍵詞】 寧動顆粒/治療應用； 多動穢語綜合征/中醫藥療法； 藥理學； 藥物毒性； 動物，實驗

【Abstract】 Objective To study the pharmacodynamics and toxicity of Ningdong granule for Tourette syndrome (TS). Methods Ningdong granule was given to the mouse by intragastric administration.After that， observe the effect on autonomic activities of mouse，the mouse sleep rate at subthreshold dose of sodium pentobarbital，the special climbing behavior caused by Apomorphine(APO)， the dopamine(DA) content in mouse brain and the acute toxicity. Results Both the high and low dose of Ningdong granule could obviously inhibit mouse special climbing behavior.High dose could function together with subthreshold dose of sodium pentobarbital to cause mouse sleep.Both the high and low dose could inhibit DA function of mouse substantia nigracorpus striatum，and could obviously shorten mouse continual vertical creeping.The high dose could lower brain DA content.The low dose had the tendency of lowering brain DA content.In the acute toxicity test，the dose corresponding to 77.3 times of children dose was given to the mouse.The mouse lived well. Conclusion Ningdong granule can lower brain DA content.It has the function of sedation，antagonizes creeping caused by APO and helps sleep.Toxicology certifies that it has no obvious toxic action.

【Key words】 Ningdong granule/Application to treatment； Tourette syndrome/TCM therapy； pharmacology； Toxicology； Animal expertimental;

抽動穢語綜合征是小兒神經系統的一種疑難病。目前尚無理想的治療藥物，寧動顆粒是臨床治療抽動穢語綜合征的有效藥物。

為進一步探討其作用機制及安全性，山東省中醫藥研究院藥理室和山東大學附屬省立醫院中醫科于200512～200608進行了藥效學和毒理學研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠210只，雌雄各半，體質量18～22 g，由山東大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號SCXK（魯）20030004。

1.1.2 實驗藥物 寧動顆粒：由山東省立醫院藥劑科提供，批號：20041216。

1.1.3 藥效學劑量折算 20 kg兒童日用量30 g，按公式折算60 kg成人日用量［1］：20 kg兒童日用量×1.7×成人體表面積／兒童體表面積=30 g／d×l.7×1.65／0.8=105.2 g／d。小鼠給藥高、低劑量，按體表面積比值折算分別為27.4，13.7 g／（kg·d），相當于臨床20 kg兒童每千克日用量的18.2，9.1倍；按0.2 mL／kg鼠重的體積灌胃給藥。

1.1.4 儀器與試劑 高效液相色譜儀、電化學檢測器、C18色譜柱ODS：10 μm流動相：0.015 mol/L氯乙酸-氫氧化鈉緩沖液：甲醇的混合液(94∶6)。多巴胺(DA)標準液配制：分析純DA溶于0.1 mol/L HCl，質量濃度為1.0 g／L，然后稀釋10倍，冰箱保存，再稀釋100倍作為標準液，質量濃度為1.0 mg／L，進樣量為4 μL。

1.2 方法

1.2.1 寧動顆粒對小鼠自主活動的影響 取昆明種小鼠52只，按體質量隨機分成4組：空白對照組、高劑量組、低劑量組、安定組，每組13只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量組給寧動顆粒27.4，13.7 g／(kg·d)，安定組給安定6.5 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對照組給等體積水灌胃，每日1次，連續10 d；安定組采取一次性給藥，末次藥后1 h，記錄2 min內自主活動數，結果進行組間統計學處理［2］。

1.2.2 寧動顆粒對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響 取昆明種小鼠52只，按體質量隨機分成4組：空白對照組、高劑量組、低劑量組、安定組，每組13只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量組給寧動顆粒27.4，13.7 g／(kg·d)，安定組給安定6.5 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對照組給等體積水灌胃，每日1次，連續10 d；安定組采取一次性給藥，末次藥后1 h，逐只稱重、腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉30 mg/kg，按10 mL/kg給藥，記錄15 min各小鼠的睡眠情況，結果進行組間統計學處理［2］。

1.2.3 寧動顆粒對去水嗎啡（APO）引起小鼠攀爬行為的影響 取昆明種小鼠52只，按體質量隨機分成4組：空白對照組、高劑量組、低劑量組、氟哌啶醇組，每組13只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量給寧動顆粒27.4，13.7 g／(kg·d)，氟哌啶醇組給氟哌啶醇0.2 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對照組給等體積水灌胃，每日1次，連續10 d；氟哌啶醇組采取一次性給藥，末次藥后45 min，皮下注射APO 1.0 mg/kg，放入鐵絲籠內適應環境15 min，將動物放到垂直懸掛的鐵絲網上，開始計時，記錄動物連續攀爬的時間(以持續停止攀爬10 s視為不攀爬的標志)，結果進行組間統計學處理［2］。

1.2.4 寧動顆粒對小鼠腦內DA含量的影響 取昆明種小鼠32只，按體質量隨機分成4組：空白對照組、高劑量組、低劑量組、氟哌啶醇組，每組8只。給藥劑量分別為：藥物高、低劑量給寧動顆粒27.4，13.7 g/(kg·d)，氟哌啶醇組給氟哌啶醇0.2 mg／(kg·d)，高、低劑量組分別按25 mL/kg給藥，空白對照組給等體積水灌胃，每日1次，連續10 d；氟哌啶醇組采取一次性給藥，末次藥后1 h，將動物麻醉后處死，迅速取腦，按Glowinsky法，取下丘腦，干冰固化后稱重，質量在8～12 mg，放入塑料管中，每管加入0.05 mol／L冰HCLO4，用勻漿器打勻漿1 min低溫離心30 min，去上清液50 μL，進樣檢測腦內DA含量，結果進行組間統計學處理［3］。

1.2.5 寧動顆粒對小鼠急性毒性的影響 取體質量在18～22 g小鼠20只，按體質量隨機分為寧動顆粒組和空白對照組，每組10只，首先進行LD50預試，發現無法測定LD50，故進行MTD測試。實驗前動物禁食12 h，然后按最大濃度、最大體積給藥，1 d內給藥5次，連續觀察7 d，記錄實驗前后體質量變化并密切觀察動物用藥后生命體征變化。

2 結果

2.1 寧動顆粒對小鼠自主活動的影響 結果表明，寧動顆粒高劑量可以明顯抑制動物的自主活動能力，與空白對照組比較差異有統計學意義(P<0.001)。低劑量也能明顯抑制動物的自主活動能力，與空白對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。表1 寧動顆粒對小鼠自主活動能力的影響注：與空白對照組比較，aP<0.05，bP<0.01，cP<0.001。

2.2 寧動顆粒對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響 結果表明，寧動顆粒高劑量有一定的協同閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的作用，與空白對照組比較呈現一定的作用趨勢，低劑量作用不顯著。見表2。表2 寧動顆粒對閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠率的影響 注：與空白對照組比較，aP<0.001。

2.3 寧動顆粒對APO引起小鼠攀爬行為的影響 結果表明寧動顆粒高、低劑量均可以明顯抑制APO引起的動物黑質-紋狀體系統內DA功能增強的作用，能明顯縮短持續垂直攀爬時間，與空白對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。 表3 寧動顆粒對APO引起小鼠攀爬行為的影響注：與空白對照組比較，aP<0.05，bP<0.001。

2.4 寧動顆粒對小鼠腦內DA含量的影響 結果表明寧動顆粒高劑量可以降低腦內DA含量，與空白對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。表4 寧動顆粒對小鼠腦內DA含量的影響注：與空白對照組比較，aP<0.05。

2.5 寧動顆粒對小鼠急性毒性的影響 寧動顆粒組小鼠給藥量達到116 g／（kg·d)，相當于臨床20 kg兒童每千克日用量的77.3倍，藥后小鼠明顯安靜，進食、飲水、神經反射及體質量變化均未見明顯異常，小鼠生存良好，無一只死亡。表明寧動顆粒用于臨床安全、低毒。見表5。表5 寧動顆粒對小鼠的急性毒性試驗

3 討論

抽動穢語綜合征是一種兒童精神障礙性疾病。臨床以反復發作、不自主的多發性肌肉抽動、喉中發出奇特叫聲或罵詈不避親疏為特征，多見于學齡期兒童。近年來發病率明顯升高，發病原因目前尚不十分清楚，其發病機制似與DA活性過度有關［4］。西藥治療以氟哌啶醇、安定為主要藥物取得了較好的療效，但具有副反應多，停藥后復發率高的特點。本病屬于中醫“驚風”、“抽搐”、“瘛疭”、“筋惕肉瞤”等范疇。該病發生的關鍵是心肝虧虛，虛風內動；復遇精神刺激，情緒波動及學習緊張等因素導致耗神傷精，陰血虧虛，出現肌肉筋脈失養、言語欠聰，諸癥逢生。治療以養心柔肝、熄風止痙原則。

寧動顆粒由黨參、麥冬、白芍、龍骨、牡蠣、地龍、甘草等組成。實驗研究表明寧動顆粒對提高患兒免疫力有明顯作用。有關研究表明黨參多糖對體液免疫有較強促進作用，并在小劑量給藥時對細胞免疫有促進作用［5］；地龍肽激活并促進自然殺傷細胞殺傷靶細胞，對溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌有抑制作用［6］；白芍具有抗炎作用；甘草配伍有較強的協同作用。白芍總苷對金葡菌、溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎球菌、傷寒桿菌均有不同程度抑制作用，且抗菌作用強，抗菌譜廣［7］。藥理學實驗證明寧動顆粒有鎮靜、拮抗APO引起的攀爬行為增強并有一定的助睡眠作用，并能降低腦內DA含量；毒理學表明安全、低毒，為寧動顆粒的臨床應用提供了藥理學依據及安全保障。