【摘要】 目的 觀察脾腎兩助顆粒對小鼠潰瘍性結腸炎模型的影響，為臨床用藥的有效性提供實驗依據。方法 采用番瀉葉致小鼠腹瀉，觀察脾腎兩助顆粒對小鼠腹瀉的影響；利用三硝基苯磺酸(TNBS)和50%乙醇局部灌腸相結合造成小鼠潰瘍性結腸炎模型，觀察脾腎兩助顆粒對小鼠免疫球蛋白IgG、IgM的影響。結果 脾腎兩助顆粒能明顯減少番瀉葉所致的小鼠腹瀉次數，與對照組比較差異具有顯著性意義(P<0.01)；脾腎兩助顆粒能降低小鼠IgG、IgM水平。結論 脾腎兩助顆粒治療潰瘍性結腸炎療效顯著。

【關鍵詞】 脾腎兩助顆粒；潰瘍性結腸炎；小鼠

Abstract：Objective To observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on the ulcerative colitis model， and provide experimental proof for the efficiency of clinical practices. Methods To induce mouse to diarrhea by Fanxieye， then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets. Ulcerative colitis on mouse was caused by partial bowel-enema of TNBS and 50% ethanol， then observe the effect of Spleen-kidney Bi-remedial Pellets on IgG and IgM. Results Spleen-kidney Bi-remedial Pellets was capable to obviously reduce the diarrhea on mouse by Fanxieye， with a remarkable difference to the comparative group (P<0.01). The Spleen-kidney Bi-remedial Pellets decreased the level of IgG and IgM of mouse. Conclusions Spleen-kidney Bi-remedial Pellets has remarkable effect on ulcerative colitis.Key words：Spleen-kidney Bi-remedial Pellets；ulcerative colitis；mice脾腎兩助顆粒是我院用于治療慢性潰瘍性結腸炎(UC)取得較好療效的中藥復方制劑，為了給臨床用藥提供科學依據，我們對其進行了相關的藥效學研究?，F報道如下。

1 實驗材料

1.1 動物昆明種小鼠，(20±2)g，♂、♀兼用，普通級，由山西中醫藥研究院實驗動物室提供，1999年引自中國醫學科學院實驗動物繁育所。動物符合GB-14922-94Ⅱ級標準，動物合格證號：晉動(證)字第A00-001號。

1.2 藥物與試劑

脾腎兩助顆粒以六君子湯加黃芪、補骨脂、郁金等組成，每克相當于原藥材5 g，山西醫科大學第二醫院中藥制劑室提供，批號020309。50%番瀉葉煎液、50%乙醇、乙醚，山西醫科大學第二醫院中藥制劑室提供。思密達，博福-益普生(天津)制藥集團生產，批號H20000690；柳氮磺吡啶，山西三九同達藥業有限公司生產，批號H14022874。脾腎兩助顆粒、思密達、柳氮磺吡啶，用蒸餾水配制一定濃度溶液，灌胃備用。三硝基苯磺酸，美國Sigma公司生產，批號042K5002。IgG試劑盒，批號LoNoE110-100-7；IgM試劑盒，批號LoNoE110- 128-11，均由美國Bedlyl公司生產。

1.3 實驗條件

室溫(22±1)℃，相對濕度(50±5)%。

2 方法和結果

2.1 脾腎兩助顆粒對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

取小鼠50只，♂、♀各半，隨機分為5組：空白對照組，脾腎兩助顆粒小、中、大劑量組及思密達組，每組10只。用藥組按劑量給藥，每天2次，連續7 d；除空白對照組外，分別用脾腎兩助顆粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及思密達1.35 g/(kg?d)灌胃。實驗前動物禁食6 h，給藥1 h后，空白對照組用同體積蒸餾水灌胃；各組小鼠分別用50%番瀉葉煎液0.2 mL/10 g灌胃致瀉，用漏斗把小鼠罩在鋼絲網上，網下放上濾紙，連續觀察3 h，記錄小鼠排便次數及稀便腹瀉情況(糞便每粒為1次，稀便每堆為1次)。所有數據用SAS8.2統計軟件包處理，兩組間行方差齊性檢驗，組間用方差分析，組內用重復測量的方差分析(下同)。結果見表1。 表1 脾腎兩助顆粒對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響（略）注：與空白對照組比較，*P<0.01，**P<0.001，***P<0.0001。

2.2 脾腎兩助顆粒對UC小鼠免疫球蛋白指標變化的影響

取小鼠60只，♂、♀各半，隨機分為6組：空白對照組、模型對照組、柳氮磺吡啶組及脾腎兩助顆粒小、中、大劑量組，每組10只，禁食12 h。用藥組按劑量給藥，空白對照組用同體積蒸餾水灌胃，每天2次，連續7 d。除空白對照組外，其他各組分別用脾腎兩助顆粒0.45、0.9、1.8 g/(kg?d)及柳氮磺吡啶0.9 g/(kg?d)或等容積生理鹽水灌胃，1 h后乙醚輕度麻醉小鼠，用直徑2 mm的灌腸器從肛門處插入結腸約4 cm處，注入生理鹽水或2%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1 mL，并保持小鼠水平狀態約30 s， 7 d后再次灌入1%三硝基苯磺酸(+50%乙醇)0.1mL。第1次和末次給藥30 min后，乙醚輕度麻醉小鼠， 取鼠尾靜脈或眼眶靜脈叢血20 μL，采用ELISA法測定免疫球蛋白IgG、IgM含量。結果見表2。表2 實驗小鼠IgG、IgM指標變化（略）注：與同組治療前比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；與空白對照組比較，**P<0.001；與模型對照組比較，★P<0.05，★★P<0.01，★★★P<0.001。 3 討論

現代醫學認為，UC發病主要與免疫以及遺傳有關，而遺傳素質和免疫失調與中醫脾腎關系密切。腎藏精，主生殖，先天稟賦差異主要歸于腎，而腎特別是腎陽與神經內分泌密切相關；脾為氣血生化之源，機體免疫功能與脾的功能狀態相關?，F代研究表明，通過長期健脾補腎，可以影響神經內分泌免疫系統，調節激素、神經遞質、細胞因子的變化與基因表達，從而影響活性物質的釋放，改善機體免疫失衡狀態[1]。脾腎兩助顆粒由黃芪、補骨脂、郁金加六君子湯等組成，全方健脾益氣、滋補肝腎，標本兼治，不寒不燥，為治療慢性泄瀉之良方。

現代研究表明：UC的組織學改變顯示有B淋巴細胞和T淋巴細胞混合浸潤。正常腸組織的淋巴細胞以IgA分泌型B細胞為主，而UC腸組織中IgG分泌型B細胞明顯增加。在腸道疾病中，當免疫復合物IgG大量增多或沉淀在腸道中時，造成局部腸黏膜損傷[2]。UC患者在腸黏膜受到炎癥侵犯時，其腸黏膜具有多種抗原如結腸上皮細胞抗原、酵母菌抗原、O14型大腸桿菌酯多糖抗原等可能刺激機體免疫B細胞產生IgM。UC患者免疫學檢查可見血清免疫球蛋白IgG和IgM在活動期增高[3]。實驗給予小鼠脾腎兩助顆粒治療后，其血清IgG和IgM明顯下降，提示脾腎兩助顆粒可調節機體體液免疫功能，減輕腸道組織損傷。綜上而言， 脾腎兩助顆粒可以調節UC模型小鼠失衡的免疫水平，減輕自身免疫反應，減少特異性或非特異性炎癥分子的釋放，緩解腸道免疫破壞作用。

現代中藥藥理學研究表明，黃芪提取成分F3為免疫增強劑，F2有很強的免疫抑制作用，因此，黃芪具有免疫雙向調節作用；六君子湯對腸肌運動具有明顯的雙向調節作用，對興奮狀態的腸肌運動有抑制能力，對抑制狀態的腸肌運動有興奮功能，能調節免疫功能；補骨脂有細胞毒樣作用；郁金對特異性免疫和非特異性免疫均有明顯的抑制作用[4]。因此，脾腎兩助顆粒治療潰瘍性結腸炎療效顯著。

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