作者：施薇，王淑敏，鄭友蘭，劉志強(qiáng)

【摘要】 目的優(yōu)選黃連生藥中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝 。方法 以水作為提取溶劑，通過正交實(shí)驗(yàn)，高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量為指標(biāo)，考察提取溶劑體積、提取時(shí)間以及提取次數(shù)對(duì)提取效果的影響，優(yōu)選出最佳的提取工藝。結(jié)果黃連生藥中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝為藥材加入8倍量水，回流提取2次，1.5h/次，測(cè)得鹽酸小檗堿含量為6.5499％。 結(jié)論該提取工藝條件科學(xué)，成本較低，提取得到的鹽酸小檗堿含量較高，具有一定的實(shí)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 黃連； 鹽酸小檗堿； 正交實(shí)驗(yàn)； 提取工藝； 高效液相色譜

Abstract：ObjectiveTo optimize the of extract process of berberine hydrochloride in Rhizoma Copotidis by L9(34) orthogonal method. MethodsWith water as extraction solvent， the contents of berberine hydrochloride determined by HPLC as the index， the effects of volume of extraction solvent， time of refluxing and extraction times were investigated and the L9(34) orthogonal experiment was adopted to optimize the process.ResultsThe optimum extraction process was achieved with addition of water as extraction solvent (8 times raw herb in volume) into materials，refluxing 1.5hours and extracting for 2 times. The contents of berberine hydrochloride was 6.5499%.ConclusionThe optimum extraction process for berberine hydrochloride is scientific， cost is comparatively low， the contents of berberine hydrochloride is high. This method has wider practical value in production .

Key words： Berberine Hydrochloride ; Orhogonal experiment; Extraction process; HPLC 黃連為毛茛科（Ranunculaceae）植物黃連Coptis chinensis Franch，三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y. Cheng et Hsiao 或云連Coptis teeta wall.的干燥根莖。藥材依次習(xí)稱為“味連”“雅連”“云連”［1］。黃連性寒，味苦，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。黃連中主要成分為小檗堿，具有抗腹瀉、抗炎、免疫促進(jìn)、降血壓、抗心律失常、降血糖等作用。本文主要通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選水提取鹽酸小檗堿的最佳工藝，并且利用高效液相色譜法［2～4］ 對(duì)鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定，為其工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2690 高效液相色譜儀，2996 UV diode detector 檢測(cè)器（美國Waters 公 司產(chǎn)品）；SanoriusBS110S十萬分之一分析天平（北京賽多利斯有限公司產(chǎn)品）； KQ－500DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品）。

1.2 試藥

黃連（購于四川江油中壩附子科技發(fā)展有限公司， 由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)王淑敏教授鑒定為雅連）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（供含量測(cè)定，批號(hào)：110713-200208，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為分析純；超純水、乙腈、磷酸均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

稱取生藥30 g，以水為提取溶劑。取提取溶劑體積，回流提取時(shí)間，提取次數(shù)3個(gè)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，按L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)提取物進(jìn)行考察，以鹽酸小檗堿含量為考察指標(biāo)。表1 因素水平（略）

2.2 提取工藝的優(yōu)選

2.2.1 色譜條件

色譜柱為iamonsil C18（5 μm， 4.6 mm×250 mm），柱溫35℃；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（20∶80）；流速1 ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)228 nm。

2.2.2 供試液制備

精密稱取不同提取條件下的黃連提取浸膏0.2 g，置于具塞三角瓶中，加入25 ml甲醇，精密稱取重量，超聲30 min，放冷，補(bǔ)足重量，濾過，精密量取0.5 ml 濾液置于5 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.2.3 方法學(xué)考察 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品2.01 mg置于10 ml的量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（0.201 mg·ml-1）。在上述色譜條件下，分別精密吸取1，4，6，8，12 μl注入色譜儀，以鹽酸小檗堿質(zhì)量X（mg）對(duì)吸收峰面積Y回歸，得回歸方程：Y＝3.913X-0.179 3，r=0.999 9，在0.201～2.412 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4 樣品鹽酸小檗堿的含量測(cè)定精密吸取正交實(shí)驗(yàn)各供試品溶液10 μl，注入色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果見表3～4。 表3 L9（34）正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表4 方差分析（略）。

根據(jù)方差分析表明，提取次數(shù)對(duì)提取工藝的影響具有顯著性意義，為主要影響因素。各因素作用主次順序?yàn)镃﹥A﹥B，確定最佳提取工藝為A1B2C2，即藥材加8倍量水，提取2次，回流提取1.5h/次。

2.2.5 最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)為考察上述優(yōu)選提取工藝的穩(wěn)定性，取黃連3份，每份30 g，按優(yōu)選出的最佳提取工藝進(jìn)行提取，在上述色譜條件下測(cè)定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果見表5 。 表5 鹽酸小檗堿含量（略） 按正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，3次結(jié)果均處于最高水平，證明該提取工藝穩(wěn)定、可靠。

3 討論 本實(shí)驗(yàn)通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)選了黃連的提取工藝，以提取所得浸膏中的小檗堿的含量為考察指標(biāo)，確定了最佳的提取工藝：藥材加入8倍量水，回流提取2次，1.5 h/次。按照優(yōu)選出的最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，穩(wěn)定性較理想，與其他的提取工藝相比較，其提取成本低廉，工藝簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)生產(chǎn)，有一定的實(shí)用價(jià)值。