“匹多莫德”片劑的藥物動力學和相對生物利用度研究
劉 蕓 王曼麗 郭紅
摘要本實驗采用HPLC法，以意大利普利化學工業公司生產的普利莫口服液（400mg/支）為對照品，對多肽藥物研究所生產的匹多莫德片劑（400mg/片）的相對生物利用度和藥物動力學參數迸行了測定。本實驗選取健康男性志愿者18名，采用自身對照法，交叉單劑量口服意大利普利化學工業公司生產的普利莫口服液及多肽藥物研究所生產的匹多莫德片劑各800mg，在規定的取樣點取血，血樣經過提取后迸HPLC，測定血藥濃度。其數據經統計處理，結果顯示匹多莫德片劑的半衰期T1/2為4.34±3.90h，達峰時間Tmax為2.50±0.34h，平均滯留時間MRT為5.25±0.89h，達峰濃度Cmax為6.20±2.41g/ml，藥時曲線下面積AUC為27.7±8.20h.μg/ml，樣品與對照品的相對生物利用度F為100.73±18.91％。 關鍵詞：匹多莫德藥物動力學相對生物利用度HPLC
匹多莫德片劑的主要活性成份是吡酮莫特（pidotimod），是一種全合成的免疫刺激調節劑，通過刺激和調節細胞免疫產生效應。成人預防量為每次800mg，每日一次。本實驗的目的是以意大利普利化學工業公司生產的普利莫口服液（400mg/支）為對照品利用健康志愿者驗證多肽藥物研究所生產的匹多莫得片劑（200mg/片）的相對生物利用度和藥物動力學特征。 1實驗儀器與試藥： 1.1儀器 Shimadzu 6A系列高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）； IKA minishaker馬來西亞產；80—2B型高心機（4000r/m）；TDx高速離心機（美固ABBOTT公司）；AP—01溶劑過濾器（奧特賽恩斯［天津］儀器有限公司）；TP200B超聲波清洗機（天鵬電子新技術[北京]有限公司） 1.2藥品及試劑 藥品：標準品：匹多莫德（99.9％），多肽藥物研究所提供；樣品：匹多莫得片劑（200mg/片），多肽藥物研究所生產；對照品：普利莫口服液（400mg/支），意大利普利化學工業公司生產。試劑：甲醇乙腈（均為色譜純）KH2PO4磷酸（均為分析純） 2血藥濃度測定方法的建立： 2.1色譜條件： 色譜柱：ALLTIMA NH2 5μ柱 250mm×4.6mm；預拄：4mm× 2mmNH2柱；流動相：乙腈：0.02MpH3.2磷酸鹽緩沖液=75:25；流速：1.0ml/min；檢測器：Shimadau SPD-6AV UV 檢測器；檢測波長：210nm。 2.2受試者的選擇及試驗方法： 2.2.1受試者的選擇： 本試驗選用健康男性志愿者18名，年齡18～35歲，體重為53～ 80公斤。受試者均先經充分的體檢，并由生化、尿液、血相等檢查確認其健康狀態。受試者在試驗前應詳細告知以試驗內容、試驗藥物的作用和可能發生的副反應、受試者的權利和義務，并簽署同意書之后，方可參加試驗。 2.2.2試驗方法： 本實驗采用雙處理、兩周期隨機交叉實驗投計，將受試者隨機分成兩組，每組9人。第一組于第一周期單劑量口服多肽藥物研究所生產的匹多莫德片劑800mg，于第二周期單劑量口服意大利普利工業公司生產的普利莫口服液800mg，第二組于第一周期單劑量口服意大利普利化學工業公司生產的普利莫口服液80Omg，于第二周期單劑量口服多肽藥物研究所生產的匹多莫德片劑800mg，清洗期為一周。每次給藥之前，每名受試者均先經過夜禁食十小時以上，然后給藥。服藥前先取一空白血，然后每名受試者均統一以200ml水口服給予匹多莫德片劑或普利莫口服液 800mg，并于服藥后0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0，8.0，12.0，24.0小時前臂取血3ml，肝素抗凝，分離血漿，測定其血藥濃度，求出Tmax，Cmax，T1/2，MRT，AUC0_∞，F等，樣品匹多莫德片劑與對照普利莫口服液比較，求出相對生物利用度，并對其藥物動力學參數進行統計學分析。
表１生物利用度交叉實驗設計表
2.3標準曲線的制備： 2.3.1標準溶液的配制： 精密稱取100mg匹多莫德標準品，用蒸餾水定容至100ml，得濃度為1mg/ml的標準液。精密吸取10ml、7.5ml、5ml、2.5ml、1ml的標準液，用蒸餾水定容至100ml，分別得濃度為100μg/ml、75μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、10μg/ml的標準液。 2.3.2標準曲線的制備： 取空白血漿6份各500μl，分置6個具塞離心管中，分別加入不同量的匹多莫德標準液，使其血漿濃度分別為0，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0μg/ml，加入500μl乙晴，渦旋振蕩1分鐘，高速離心（10000rpm）10分鐘。取上清液20μl進HPLC。每個濃度各做5次；取平均值，以濃度對蜂面積進行線性回歸，得回歸方程如下：Conc（μg/ml）=7.18×10-5×Area+0.023 （γ= 0.9997） 2.4血漿樣品的測定： 取樣品血漿500μl，加入乙晴500μl，渦旋振蕩1分鐘，高速離心（10000rpm）10分鐘，取上清液20μl進HPLC． 2.5方法評價： 2.5.1最低檢測濃度：0.0144μg/m1（以儀器所能檢測的最小蜂面積帶入濃度－面積公式計算）
濃度（μg/ml）
回收率%（X±SD）
RSD（%）
10.0
91.00%±4.99%
5.49%
5.0
86.76%±7.72%
8.90%
1.0
79.52%±7.51%
9.45%
平均回收率%
86.99%±7.68%
2.5.3 方法回收率： 取3份空白血漿各500μl，加入不同濃度的匹多莫德標準液，使其濃度分別為1.0μg/ml，50μg/ml，按標準曲紅制備項下方法進行提取測定，重復5次，并與由標準工作曲線回歸方程計算出的濃度進行比較，計算方法回收率。
加入量 (μg/ml)
檢出量 (μg/ml)
回收率 （%）
平均回收率 (%)
RSD （%）
1.0
0.960 0.946 0.846 0.969 0.780
96.0 94.6 84.6 96.6 78.0
90.0
9.2
5.0
5.41 5.23 4.80 4.98 4.28
108.2 104.6 96.0 99.6 85.6
98.8
8.8
10.0
10.03 10.59 9.64 9.12 9.95
100.3 105.9 96.4 91.2 9905
98.7
2.5.4精密度： 取3份空白血漿各500μl，加入不同濃度的匹多莫德標準液，使其濃度分別為1.0μg/ml，5.0μg/ml，10.0g/ml，同標準曲線制備項下方法進行提取測定，每一濃度在同一天內提取、測定5次，計算日內精密度及變異系數；另每一濃度每天各提取測定1次，共5天，計算其日間精密度及變異系數。結果見表4
濃度 (μg/ml）
日內精密度（n=5）
日間精密度（n=5）
(XSD)(μg/ml)
RSD%
(XSD)(μg/ml)
RSD%
1.0
0.90±0.08
9.25
1.00±0.09
9.41
5.0
4.94±0.44
8.83
5.07±0.43
8.58
10.0
9.87±0.54
5.47
9.24±0.40
4.31
3實驗結果： 3.1藥物動力學參數 根據血藥濃度時間數據，進行統計學處理。曲線下面積按梯形法汁算，達峰時間Tmax、Cmax按實測值計算。 3.1.1以意大利普利化學工業公司的普利莫口服液為對照品計算單劑量口服多肽藥物研究所的匹多莫德片劑的藥動學參數以及相對生物利用度。 3.1.3多肽藥物研究所的匹多莫德片劑與意大利普利化學工業公司的普利莫口服液生物等效性比較將試驗品和對照品的藥動學參數進行方差分析和雙單側t檢驗，比較生物等效性，結果見表6－表9。
方差來源
自由度
離差平方和
均方
F值
P值
個體間
17
2.263
0.133
14.646
0.000
周期間
1
0.027
0.027
3.011
0.102
制劑間
1
0.005
0.005
0.510
0.485
誤差
16
0.145
0.009
總變異
35
2.441
試驗品均值：
3.175
對照品均值
3.198
誤差均方的平方根： t1： 90%置信區間：
0.095 6.301 92.46%-103.32%
t（0.05，16） t2：
1.746 7.741
方差來源
自由度
離差平方和
均方
Ｆ值
Ｐ值
個體間
17
3.300
0.194
8.479
0.000
周期間
1
0.009
0.009
0.373
0.550
制劑間
1
0.008
0.008
0.349
0.563
誤差
16
0.366
0.023
總變異
35
3.683
試驗品均值：
1.763
對照品均值：
1.733
誤差均方的平方根：
O.151
t（O.05，16）
1.746
t1：
5.016
t2:
3.832
90%置信區間：94.34%-112.51%
