作者：何宇新， 李 玲， 李玉峰， 楊文宇

【關(guān)鍵詞】 腦康膠囊

摘要：目的對(duì)腦康膠囊中丹參、川芎、葛根進(jìn)行薄層色譜定性鑒別，并測(cè)定腦康膠囊中葛根素的含量。方法采用薄層色譜法（TLC）對(duì)上述3味藥材進(jìn)行鑒別，展開劑分別為苯醋酸乙酯(19∶1)、正己烷醋酸乙酯(9∶1)、氯仿甲醇水(78∶35∶10)的下層液；采用反相高效液相色譜法測(cè)定葛根素的含量，Diamonsil C18色譜柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)，以甲醇0.015%磷酸溶液(23∶77)為流動(dòng)相，流速為1.2 ml/min，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)249 nm，測(cè)定。結(jié)果HPLC測(cè)定的線性范圍為0.02～0.12 μg，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9；膠囊中葛根素的平均回收率為98.53%，RSD=1.08%，n=6；精密度(RSD＜2%)良好。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，適用于腦康膠囊中主要藥材的定性鑒別和葛根素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：葛根素； 腦康膠囊； 薄層色譜法； 高效液相色譜法

腦康膠囊系由葛根、川芎、丹參等藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有補(bǔ)益肝腎、填精補(bǔ)髓、活血通脈的功效。主要用于治療腦動(dòng)脈硬化癥肝腎精虧兼瘀血阻絡(luò)證，癥見頭暈頭痛，神疲健忘，胸悶或痛，口干目澀，腰膝酸軟，虛煩少寐等。為了控制本品的質(zhì)量，筆者采用TLC法對(duì)制劑中所含的川芎、丹參、葛根等3味藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)，并采用HPLC法測(cè)定本品中葛根素的含量。經(jīng)方法學(xué)研究表明，該方法具有簡(jiǎn)便易行、結(jié)果可靠、靈敏度高、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，可作為腦康膠囊質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

美國(guó)Waters高效液相色譜儀(2690溶劑輸送系統(tǒng)，996二極管陣列檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，Millenium32數(shù)據(jù)管理系統(tǒng))：葛根素、丹參酮ⅡA、川芎對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)；腦康膠囊和各種陰性膠囊由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥藥劑學(xué)教研室提供(批號(hào)為：040902，040906，040910)；硅膠G(薄層層析用，青島海洋化工廠)：甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法

2.1 TLC鑒別實(shí)驗(yàn)

2.1.1 丹參的鑒別取本品內(nèi)容物5 g，加乙醚30 ml，置水浴中加熱回流1 h。濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右掖?.5 ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺丹參的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液，另取丹參酮ⅡA對(duì)照品，加乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法［1］實(shí)驗(yàn)。吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯醋酸乙酯(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與丹參酮ⅡA對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品無(wú)此斑點(diǎn)。見圖1。

2.1.2 川芎的鑒別取本品內(nèi)容物5 g，加乙醚20 ml，置水浴上加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴? ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺川芎的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液。另取川芎對(duì)照藥材1 g同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法［1］實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品無(wú)此斑點(diǎn)。見圖2。

2.1.3 葛根的鑒別取樣品5 g，置索氏提取器中，加乙醚30 ml置50 ℃水浴上回流提取2 h，棄去乙醚液；殘?jiān)?0 ml甲醇回流提取4 h，提取液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水飽和的正丁醇液萃取兩次，20 ml/次，合并正丁醇液，濃縮至干，殘?jiān)蛹状? ml溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(內(nèi)徑1.5 cm，填充高度約15 cm)上，用水80 ml洗脫，收集水洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml溶解，作為供試品溶液。同法缺葛根的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液。另取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法［1］實(shí)驗(yàn)。吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇水(78∶35∶10)的下層液(15 ℃以下放置過(guò)夜)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的淡藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。見圖3。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件色譜柱Diamonsil C18(5 μm，150 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相 甲醇0.015%磷酸溶液(23∶77)；流速 1.2 ml/min；柱溫 35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為249 nm；靈敏度0.001AUFS。在選定條件下，葛根素和樣品中其它分色譜峰可基線分離，葛根素與其相鄰色譜峰的分離度大于1.50；按葛根素峰計(jì)算，理論板數(shù)(N)為3 000以上，拖尾因子(T)為1.03［1］。

2.2.2 測(cè)定方法供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物適量，研勻，取0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50 ml，稱定重量，置水浴上回流45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。 陰性樣品溶液的制備：取腦康陰性膠囊(缺葛根)內(nèi)容物適量，研勻，取0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50 ml，稱定重量，置水浴上回流45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。對(duì)照品溶液的制備：精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含10 mg的溶液。測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，根據(jù)葛根素對(duì)照品的峰面積，計(jì)算出樣品的含量。

2.2.3 測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取葛根素對(duì)照品溶液(10 μg/ml)2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積值(A)對(duì)進(jìn)樣量(C)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：C=2.591 4×107A＋1.935 9×103，r=0.999 9。結(jié)果表明，葛根素在0.02～0.12 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取上述對(duì)照品溶液5 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，葛根素峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)＜2%，結(jié)果表明，精密度良好。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取樣品供試液分別于0，2，4，8，12 h進(jìn)樣10 μl，測(cè)得樣品中葛根素峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2%，結(jié)果表明，樣品供試液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：按擬定的含量測(cè)定方法，取同一批樣品五份，分別制備樣品供試液，測(cè)得峰面積值及含量，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2%，結(jié)果表明，重復(fù)性好。回收率實(shí)驗(yàn)：取6份已知含量的樣品約0.2 g，分別加入葛根素對(duì)照品溶液(10 mg/ml)75，150，225 μl照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果，3種水平6次實(shí)驗(yàn)的加樣回收率測(cè)定結(jié)果均在95%～105%之間，其平均值為98.53%，RSD為1.08%。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果測(cè)定（略）

樣品測(cè)定：照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，對(duì)三批腦康膠囊樣品進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果mg批 （略）

3 討論

各薄層鑒別經(jīng)做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明除了被檢出藥味外，腦康膠囊中其它藥味對(duì)主斑點(diǎn)無(wú)干擾，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便，可作為該品的定性控制指標(biāo)。含量測(cè)定經(jīng)做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，結(jié)果腦康膠囊中其它藥味對(duì)葛根素的含量測(cè)定無(wú)干擾，表明本法專屬性強(qiáng)，可作為該品的定量控制指標(biāo)。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:158，附錄ⅥB.