作者：潘文，胡海波，崔明超，潘金火，歐陽強

【摘要】 目的 確定鴉膽子油亞納米乳注射液的處方和制備工藝。方法 以精制鴉膽子油為油相，蛋黃卵磷脂和泊洛沙姆188為復(fù)合乳化劑，優(yōu)選了鴉膽子油、乳化劑和穩(wěn)定劑的用量，并用正交設(shè)計優(yōu)化了制備工藝。結(jié)果 最優(yōu)處方為10%油相，1.2%乳化劑，0.1%穩(wěn)定劑；最優(yōu)工藝為水相和油相在70 ℃混合，10 000 r/min高速剪切20 min，在900 bar壓力下高壓均質(zhì)6次。結(jié)論 制得的鴉膽子油亞納米乳注射液物理穩(wěn)定性良好。

【關(guān)鍵詞】 鴉膽子油；亞納米乳；處方研究；制備工藝；穩(wěn)定性

Abstract：Objective To optimize the prescription and technology of Brucea javanica oil subnanoemulsion injection. Methods Using superfine Brucea javanica oil as oil phase， yolk lecithin and poloxamer 188 as the complex emulsifying agents. The dosage of oil， emulsifier and stabilizer were optimized and the preparation was optimized by orthogonal experiments. Results The optimum precription was 10% oil phase， 1.2% emulsifier and 0.1% stabilizer. The optimum technology was that aqueous phase and oil phase mixed at 70 ℃， sheared 20 min by high speed shearing machine and then passed the ultra-high pressure nano homogenizer 6 times under the pressure of 900 bar. Conclusion The physical stability of Brucea javanica oil subnanoemulsion injection is good. Key words：Brucea javanica oil；subnanoemulsion；prescription；preparation technology；stability

鴉膽子油是苦木科植物鴉膽子的干燥成熟果實用石油醚提取所得的脂肪油，具有抗癌作用，主要用于肺癌、肺癌腦轉(zhuǎn)移及消化道腫瘤[1]。目前雖有注射用乳劑上市，但因粒徑較大，在貯運及使用過程中易發(fā)生破乳分層現(xiàn)象，且較難吸收。而亞納米乳制劑具有粒徑較小、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，可以充分發(fā)揮注射用乳劑的靶向作用，減少靜脈炎和血管栓塞等不良反應(yīng)的發(fā)生，延長藥物使用的有效期。筆者以蛋黃卵磷脂和泊洛沙姆188為復(fù)合乳化劑、甘油為等滲調(diào)節(jié)劑、油酸鈉為穩(wěn)定劑，將鴉膽子油制備成亞納米乳注射液，以穩(wěn)定性參數(shù)為主要指標(biāo)考察了其處方及制備工藝，所制得的注射液物理穩(wěn)定性良好，從而為進一步的研究奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；LXJ-ⅡB離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)；PHS-3C PH計(上海雷磁儀器廠)；JA1003分析天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；Nicomp380/ZLS激光粒度/動電電位分析儀(美國PSS公司)； B25高速剪切機(上海貝而特機電設(shè)備科技有限公司)；AH110D高壓勻質(zhì)機(加拿大ATS工業(yè)系統(tǒng)公司)。 精制鴉膽子油(自制)；注射用蛋黃卵磷脂E80(德國Lipoid)；注射用泊洛沙姆188(德國BASF公司)；注射用甘油(德國BASF公司)；注射用水(蘇中藥業(yè)集團股份有限公司)。其他試劑和試藥均為分析純。

2 處方研究

2.1 基本處方

在

2.2 乳化劑選擇 采用不同比例的蛋黃卵磷脂和泊洛沙姆188作為乳化劑制備亞納米乳，4 000 r/min離心15 min后觀察外觀，并測定穩(wěn)定性參數(shù)Ke。Ke＝(A0－A)/A0×100%，式中A0、A分別為乳劑離心前后測得的吸收度，Ke值越小，亞納米乳越穩(wěn)定。結(jié)果見表1。表1 不同比例乳化劑對亞納米乳穩(wěn)定性的影響（略） 從穩(wěn)定性參數(shù)Ke可以看出，處方2、3的穩(wěn)定性均較好，但考慮到泊洛沙姆188為合成乳化劑，不是體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)，在能夠保證滅菌穩(wěn)定性和存放穩(wěn)定性的前提下，其加入量越少越好，所以選用處方2。

2.3 油相比例選擇

固定處方中其他組分的量，以Ke值為指標(biāo)，考察不同油相比例對亞納米乳穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明，當(dāng)油相比例為5%和10%時，制得的亞納米乳都很穩(wěn)定，但考慮到載藥量和臨床使用的療效，故將油相的比例確定為10%。

2.4 穩(wěn)定劑油酸鈉用量的考察

固定處方中其他組分的量，以Ke值和Zata電位為指標(biāo)，考察不同比例的油酸鈉對亞納米乳穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明，油酸鈉的加入對亞納米乳的穩(wěn)定性起著重要的作用，當(dāng)加入0.1%的油酸鈉后，Ke值和Zeta電位都顯示其穩(wěn)定性得到顯著提高。故最終確定處方為：精制鴉膽子油100 mL，蛋黃卵磷脂8 g，泊洛沙姆188 4 g，甘油22.5 g，油酸鈉1 g，加注射用水適量，制成1 000 mL。

3 制劑工藝考察

3.1 基本制備工藝

按處方量稱取蛋黃卵磷脂、泊洛沙姆188與甘油，加適量的注射用水于燒杯中，在適宜溫度下進行混合，轉(zhuǎn)入高速剪切機10 000 r/min剪切3次，每次2 min，制得水相；稱取處方量的精制鴉膽子油，在適宜溫度下邊攪拌邊將其緩慢滴入水相中，轉(zhuǎn)用高速剪切機10 000 r/min剪切20 min，制得粗乳，加注射用水定容至1 000 mL，再轉(zhuǎn)用高壓均質(zhì)機，采用高壓勻化的方法制成細乳；加油酸鈉1 g，并用NaOH調(diào)節(jié)pH，充氮氣，加塞，加鋁蓋密封。115 ℃旋轉(zhuǎn)滅菌30 min，即得成品。

3.2 正交優(yōu)選 亞納米乳的質(zhì)量與乳化技術(shù)有很大的相關(guān)性。為尋求最優(yōu)制劑工藝，并結(jié)合大生產(chǎn)的實際，采用正交設(shè)計法考察初乳溫度、均質(zhì)壓力、均質(zhì)次數(shù)和pH值這4個因素不同水平對亞納米乳粒徑的影響，以0.5 μm以下粒子所占百分數(shù)φ和Ke值作為指標(biāo)。因素水平及試驗結(jié)果見表2～表5。表2 L9(34)因素水平表（略）表3 L9(34)試驗設(shè)計及結(jié)果（略）表4 試驗結(jié)果φ值的方差分析（略）注：*差異有統(tǒng)計學(xué)意義(下同)表5 試驗結(jié)果Ke值的方差分析（略） 由R1值可以看出，各因素對亞納米乳劑粒徑影響大小順序依次為D＞A＞B＞C，即pH值＞初乳溫度＞均質(zhì)壓力＞均質(zhì)次數(shù)。由以上結(jié)果直觀分析，較好的制備工藝為A2B3C3D2，從方差分析來看，A、D差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其余均無統(tǒng)計學(xué)意義。而且從直觀分析來看，均質(zhì)6次較均質(zhì)3次粒徑變化較明顯，而均質(zhì)9次與均質(zhì)6次粒徑變化很小。由R2值可以看出，各因素對穩(wěn)定性參數(shù)Ke值影響大小順序依次為A＞B＞C＞D，即初乳溫度＞均質(zhì)壓力＞均質(zhì)次數(shù)＞pH值。由以上結(jié)果直觀分析，較好的制備工藝為A2B3C2D3。從方差分析來看，A、B差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其余均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)合生產(chǎn)實際，決定采用A2B3C2D2作為最終制備工藝，即：初乳溫度70 ℃，均質(zhì)壓力900 bar，次數(shù)6次，pH值7.5。 3.3 驗證試驗 鴉膽子油亞納米乳注射液處方：精制鴉膽子油100 mL，蛋黃卵磷脂8 g，泊洛沙姆188 4 g，甘油22.5 g，油酸鈉1 g，注射用水適量，制成1 000 mL。 制備工藝：按處方量稱取蛋黃卵磷脂、泊洛沙姆188與甘油，加適量注射用水于燒杯中在70 ℃下進行混合，轉(zhuǎn)入高速剪切機，以10 000 r/min剪切3次，每次2 min，制得水相；稱取處方量的精制鴉膽子油，在70 ℃下邊攪拌邊將其緩慢滴入水相中，轉(zhuǎn)用高速剪切機以10 000 r/min剪切20 min，制得粗乳，加注射用水定容至1 000 mL，再轉(zhuǎn)用高壓均質(zhì)機，均質(zhì)壓力900 bar，均質(zhì)6次，勻化制得細乳；加油酸鈉1 g，并用NaOH調(diào)節(jié)pH 7.5，充氮氣，加塞，加鋁蓋密封，115 ℃旋轉(zhuǎn)滅菌30 min，即得成品。

按上述方法制得3批樣品，檢測各項指標(biāo)，結(jié)果見表6。表6 驗證試驗結(jié)果（略）

4 討論

提高亞納米乳的穩(wěn)定性是本處方優(yōu)選的關(guān)鍵之一。在本試驗中，當(dāng)乳化劑為蛋黃卵磷脂∶泊洛沙姆188＝2∶1時，所制得到亞納米乳穩(wěn)定性最好，其原因可能是形成復(fù)合凝聚膜，使得乳化膜強度增大，乳劑不易破乳。

文獻[3]指出，蛋黃卵磷脂在高壓滅菌時會降解產(chǎn)生少量的游離脂肪酸，使得乳劑在滅菌前后pH值有明顯變化，而pH值的變化則會導(dǎo)致Zeta電位迅速降低。綜合以上因素并根據(jù)相關(guān)要求，將正交試驗中pH值的水平選定在6.5、7.5、8.5。 亞納米乳穩(wěn)定性評價的指標(biāo)很多，如粒徑大小、離心分離時間、Zata電位的測定、粘度的測定、電導(dǎo)法及穩(wěn)定性參數(shù)的測定等。穩(wěn)定性參數(shù)Ke的測定對設(shè)備要求較低，且可以簡單快速的評價亞納米乳的穩(wěn)定性，因此，用其篩選處方具有一定的優(yōu)勢。但穩(wěn)定性參數(shù)Ke也有一定的局限性，測定結(jié)果誤差較大，因此，應(yīng)取多個樣品、多次測量來減少誤差，并盡可能結(jié)合其他評價指標(biāo)作出正確的評價。

采用優(yōu)化后的處方及制備工藝制得的鴉膽子油亞納米乳注射液，外觀呈乳白色，將其4 000 r/min離心15 min未見分層也無小油滴析出，符合2005年版《中華人民共和國藥典》對注射用乳劑的要求，適合于靜脈注射使用。