作者：路薇薇，吳敏，奚政君，姚俊宇

【摘要】 目的 觀察納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)鼻黏膜纖毛的毒性。方法 以生理鹽水和鹽酸麻黃堿為陰性對(duì)照，采用離體法觀察納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)蛙上腭黏膜纖毛維持自身擺動(dòng)的持續(xù)時(shí)間，采用在體法及電鏡技術(shù)觀察納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)大鼠鼻黏膜的局部毒性。結(jié)果 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)蛙上腭黏膜纖毛的活性影響較低，對(duì)大鼠鼻黏膜毒性較小。結(jié)論 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)黏膜無(wú)明顯毒性作用。

【關(guān)鍵詞】 納米；辛夷；鼻黏膜；蛙上腭黏膜；過(guò)敏性鼻炎

Influence of Magnolia Biondii Pamp Volotile Oil Nanometer Bangosome on Nasal Membrane and Ciliary LU Wei-wei， WU Min， Xi Zheng-jun， et alXinhua Hospital， Medical College of Shanghai Jiaotong University， Shanghai 200092， ChinaAbstract：Objective To investigate the toxicity of nasal membreane and ciliary of the Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome. Methods Toad palate and rat nasal membrane were used as experimental material， physiological saline and hydrochloride ephedrine as negative control. The Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome on ciliary movement were carried out using in vitro and electron microscope technique. Results The Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome had little cilitoxicity to toad palate and rat nasal membrane. Conclusion The Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome had little cilitoxicity to membrane.Key words：nanometer bangosome；Magnolia biondii Pamp；nasal membrane；toad palate；allergic rhinitis過(guò)敏性鼻炎是臨床常見(jiàn)病，以鼻癢、噴嚏、鼻分泌亢進(jìn)、鼻黏膜腫脹為主要特點(diǎn)，常伴發(fā)哮喘、鼻竇炎和分泌性中耳炎等上、下氣道疾病，影響患者生活質(zhì)量，增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。滴鼻劑、噴霧劑在治療中起著重要的作用，但有些藥物在鼻腔局部給藥后，會(huì)影響鼻腔黏膜纖毛系統(tǒng)的功能[1]。辛夷具有散風(fēng)寒、通鼻竅之功，主要有效成分是揮發(fā)油。本課題組在前期研究中采用納米技術(shù)成功的制備了包含辛夷揮發(fā)油的納米脂質(zhì)體，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體有抗炎、抗過(guò)敏作用。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討其對(duì)蛙口腔黏膜纖毛活動(dòng)的影響及對(duì)大鼠鼻黏膜毒性作用。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物及分組蛙48只，體重30～40 g，雌雄不拘，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院動(dòng)物中心提供，使用許可證號(hào)：SYXK(滬)2003-0031。隨機(jī)分為6組(每組8只)：氯化鈉溶液組、1%鹽酸麻黃堿組、辛夷揮發(fā)油(相當(dāng)于原藥材55.6 g/mL)組、大劑量納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體(5.01 mg/mL)組、小劑量納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體(2.505 mg/mL)組、酮替酚組。清潔級(jí)SD大鼠16只，6～8周齡， 250 g左右，雄性，隨機(jī)分為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，每組8只。1.2 儀器和試劑光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS BX51TF，Japan)，電鏡(飛利浦CM- 120)，眼科剪，止血鉗，注射器，蛙板，生理鹽水，1%鹽酸麻黃堿，辛夷花(上海華清中藥飲片公司，批號(hào)2004102802)，納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體(自制，5.01 mg/mL)，酮替酚滴鼻液(山東魯杭辰欣藥業(yè)有限公司，批號(hào)0506271)等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)蛙上腭黏膜纖毛活性的影響[2-3]

將蛙仰臥固定在蛙板上，牽開(kāi)蛙口，用眼科剪分離并剪下3 mm×3 mm上腭黏膜，用0.9%氯化鈉溶液洗凈表面的血液和粘液，黏膜面向上平鋪于載玻片上，于黏膜表面滴0.2 mL實(shí)驗(yàn)藥液，輕輕蓋上蓋玻片，在室溫下置40倍光學(xué)顯微鏡下觀察并記錄從點(diǎn)藥開(kāi)始至纖毛停止搖動(dòng)所經(jīng)過(guò)的時(shí)間。在此期間要不斷從蓋玻片與載玻片的縫隙中滴加藥液，使纖毛始終浸泡在藥液中，總量不超過(guò)0.5 mL。計(jì)算各組纖毛自身擺動(dòng)時(shí)間的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并做組間比較。

2.2 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)大鼠鼻黏膜毒性試驗(yàn)

滴鼻給藥，每日3次，共15 d。給藥劑量：實(shí)驗(yàn)組用納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體(5.01 mg/mL)滴鼻3次，每次0.2 mL；對(duì)照組用氯化鈉溶液滴鼻3次，每次0.2 mL。第15天實(shí)驗(yàn)結(jié)束，取1 mm3鼻中隔黏膜置于4%戊二醛緩沖液及鋨酸進(jìn)行固定、脫水、包埋，超薄切片及電子染色后，電鏡觀察。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 蛙上腭黏膜纖毛自身擺動(dòng)時(shí)間 計(jì)算各組纖毛自身擺動(dòng)時(shí)間的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并做組間比較。

2.3.2 電鏡觀察大鼠鼻黏膜

取1 mm3鼻中隔黏膜置于4%戊二醛緩沖液及鋨酸中進(jìn)行固定、脫水、包埋，超薄切片及電子染色后，電鏡觀察。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)各組均數(shù)做組間t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)蛙上腭黏膜纖毛活性的影響

(見(jiàn)表1)表1 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)蛙上腭纖毛運(yùn)動(dòng)的影響 (略)注：與生理鹽水組比較，＊P<0.05；與1%鹽酸麻黃堿組比較，＃P<0.05；與酮替酚滴鼻液組比較，★P<0.05；與小劑量納米辛夷組比較，◆P<0.05；與辛夷揮發(fā)油組比較，■P<0.05。

3.2 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)大鼠鼻黏膜毒性實(shí)驗(yàn) 納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)大鼠鼻黏膜毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)圖1。從圖1可以看出，對(duì)照組給予生理鹽水15 d后，電鏡下可見(jiàn)纖毛細(xì)胞結(jié)構(gòu)良好，胞質(zhì)內(nèi)線粒體等結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞間連接良好。實(shí)驗(yàn)組給予納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體15 d后，電鏡下可見(jiàn)超微結(jié)構(gòu)與對(duì)照組基本相似，纖毛內(nèi)部結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)存在。在上皮區(qū)域可見(jiàn)較多散在杯狀細(xì)胞，在上皮細(xì)胞表面可見(jiàn)排列密集一致的纖毛。

4 討論

辛夷用于鼻炎的治療[4-5]臨床療效確切，其主要成分為揮發(fā)油，具有廣泛的藥理活性，治療的靶點(diǎn)較多，它可以通過(guò)抗組胺、抗過(guò)敏、抗炎和對(duì)肥大細(xì)胞的保護(hù)作用等多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)生影響。但由于其易揮發(fā)、吸收少、有一定刺激性、藥物作用的靶向性不明了而限制了其在臨床上的推廣應(yīng)用和療效的發(fā)揮。納米脂質(zhì)體具有高效、低毒、可生物降解、生物膜通透性高的特點(diǎn)[6]，成為中藥納米化最理想的載體材料之一。

本課題組發(fā)揮中醫(yī)特色，多年來(lái)對(duì)中藥辛夷做了充分的研究[7-8]，在納米砂仁揮發(fā)油脂質(zhì)體[9]研制的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研制出了納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體，以期達(dá)到增強(qiáng)療效、增進(jìn)穩(wěn)定性、減少鼻黏膜刺激性等目的。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體有抗炎、抗過(guò)敏作用。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討其對(duì)蛙口腔黏膜纖毛活動(dòng)的影響及對(duì)大鼠鼻黏膜毒性作用。 鼻腔作為藥物的給藥部位日益受到關(guān)注，鼻腔給藥后可獲得滿意的生物利用度，但必須注意對(duì)鼻纖毛的毒性作用。鼻腔黏膜表面覆蓋著一層柱狀纖毛，正常情況下，纖毛協(xié)調(diào)一致擺動(dòng)，可以清除進(jìn)入鼻腔的異物，起到保護(hù)作用。鼻腔給藥后，纖毛運(yùn)動(dòng)受到不同程度的影響，從而影響鼻腔正常生理功能。藥物對(duì)鼻黏膜的毒性主要表現(xiàn)為對(duì)黏膜纖毛的毒性，首先是對(duì)纖毛擺動(dòng)的影響。而纖毛的毒性大小，受藥物本身及其濃度大小、藥物的滲透壓、pH值等很多因素的影響。評(píng)價(jià)藥物或輔料對(duì)鼻黏膜纖毛毒性的方法有在體動(dòng)物模型試驗(yàn)法和離體動(dòng)物模型試驗(yàn)法，選用動(dòng)物模型主要有雞胚胎氣管黏膜纖毛、大鼠鼻黏膜纖毛和蛙或蟾蜍上腭黏膜纖毛，均與哺乳動(dòng)物鼻黏膜纖毛相似。大鼠鼻黏膜和蛙或蟾蜍上腭黏膜模型法材料易得，操作簡(jiǎn)便，故應(yīng)用較廣。

本實(shí)驗(yàn)以生理鹽水和鹽酸麻黃堿為陰性對(duì)照，采用蛙上腭黏膜及大鼠鼻黏膜，考察納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)黏膜纖毛毒性。結(jié)果顯示，生理鹽水、1%鹽酸麻黃堿、酮替酚及小劑量納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)纖毛擺動(dòng)的抑制作用低于大劑量納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體，但大劑量納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)纖毛擺動(dòng)的抑制作用明顯低于辛夷揮發(fā)油(P<0.05)；電鏡結(jié)果顯示，納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體對(duì)大鼠鼻黏膜的結(jié)構(gòu)無(wú)明顯影響。本制劑為中藥揮發(fā)油納米制劑，主要成分為臨床上常用辛夷揮發(fā)油，由于辛夷揮發(fā)油刺激性很大，嚴(yán)重影響了臨床應(yīng)用，本課題組運(yùn)用納米技術(shù)成功制備了納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體，解決了這一難題。但是，納米辛夷揮發(fā)油脂質(zhì)體仍具有一定的粘稠度，其滲透壓很難與生理鹽水相等，這可能是對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)有抑制的主要原因。另外，分離黏膜時(shí)不可避免的會(huì)破壞粘液層，同時(shí)離體黏膜自身的缺血缺氧也是影響纖毛運(yùn)動(dòng)的重要原因。

【