基于掃描電化學(xué)顯微鏡技術(shù)研究細(xì)胞實(shí)時(shí)釋放ROS
摘要:本研究利用掃描電化學(xué)顯微鏡(SECM)技術(shù)考察了十四烷酰佛波醇乙酸酯(PMA)刺激肺癌細(xì)胞(A549)活性氧物種(ROS)的實(shí)時(shí)變化。以過(guò)氧化氫(H2O2)為目標(biāo)檢測(cè)物,獲得了細(xì)胞氧化應(yīng)激的電化學(xué)響應(yīng)圖像。以氯化六氨基合釕(Ru(NH3)6Cl3)為體系介質(zhì),利用電流負(fù)反饋技術(shù)獲得細(xì)胞形貌的清晰圖像,同時(shí)優(yōu)化獲得探針與基底之間的最佳檢測(cè)距離。將探針電位設(shè)定為過(guò)氧化氫的還原電位(-0.65V)時(shí),通過(guò)電流成像圖可觀察到ROS實(shí)時(shí)釋放,實(shí)現(xiàn)了A549細(xì)胞被PMA即時(shí)刺激時(shí)ROS釋放的實(shí)時(shí)檢測(cè)。擴(kuò)大掃描區(qū)域,獲得了不同個(gè)體細(xì)胞ROS釋放的SECM圖像,實(shí)現(xiàn)了SECM對(duì)ROS信號(hào)的實(shí)時(shí)捕捉及再現(xiàn)性。結(jié)果顯示:PMA可破壞細(xì)胞含氧物種的動(dòng)態(tài)平衡,誘發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激響應(yīng)。將探針?lè)胖迷诩?xì)胞ROS釋放位點(diǎn),檢測(cè)其電流隨時(shí)間變化,可觀察到電流隨時(shí)間呈現(xiàn)波動(dòng)狀態(tài),推測(cè)ROS的胞外釋放是一個(gè)動(dòng)態(tài)的脈動(dòng)過(guò)程。
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