水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白gE在昆蟲細胞中的表達鑒定及其晶體培養
摘要：目的利用桿狀病毒-昆蟲表達系統建立純化水痘帶狀皰疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,篩選gE蛋白的晶體培養條件,以期用于結構解析。方法將VZV糖蛋白gE基因序列克隆至桿狀表達載體pAcgp67B載體中,利用High FiveTM昆蟲細胞表達gE蛋白并進行TALON親和層析純化;利用WAVE生物波浪反應器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶體結構解析中利用單波長或多波長異常散射進行相位解析;通過分子排阻色譜、分析超離,差示掃描量熱法和酶聯免疫吸附試驗等分析gE蛋白的理化性質;利用結晶試劑盒對gE498和gE354蛋白的結晶條件進行初篩。結果獲得的gE498和gE354蛋白純度約為90%、產量為8~10 mg/L。理化分析顯示兩種gE蛋白在溶液中主要以均一穩定的單體形式存在,并呈現出良好的反應原性。在gE354晶體初篩中獲得3個結晶條件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。結論建立了VZV糖蛋白gE表達和純化方法,制備的蛋白純度高,且具有反應原性,并篩選出CrystalH3、PEGH12和IndexB10這3個結晶條件,為gE糖蛋白的結構與功能研究及新型疫苗開發奠定了基礎。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系中國病原生物學雜志社
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