不同基因型草魚呼腸孤病毒通用RT-PCR檢測方法的建立及應用
摘要：根據GenBank登錄的草魚呼腸孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)不同基因型毒株編碼VP2蛋白的S2節段保守序列,設計1對簡并引物,通過優化反應條件及靈敏度和特異性評價,建立了一種能同時檢測三種基因型GCRV的通用RT-PCR檢測方法。結果顯示:該方法在三種基因型GCRV中均擴增出大小約590 bp的特異性條帶;靈敏度試驗結果顯示,該方法對于I、Ⅱ、Ⅲ型GCRV的檢測限分別為380、250和380拷貝/μL。該方法可特異性地檢測目前已知的三種基因型GCRV,而在大鯢虹彩病毒(GSIV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、鯉皰疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鯉春病毒血癥病毒(SVCV)和傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)中無擴增產物。利用該方法檢測49份草魚出血病疑似樣品,結果顯示均為GCRV陽性,其中I型陽性率為8.2%,Ⅱ型陽性率為85.7%,Ⅲ型陽性率為2%,I、Ⅱ型混合感染陽性率為4.1%,其他類型的混合感染未檢測到。結果表明,本研究建立的針對I、Ⅱ和Ⅲ型GCRV的RT-PCR檢測方法具有通用性好、省時高效的突出特點,同時還兼具較高的靈敏度和特異性。
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