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摘要：目的通過(guò)基因分型、基因測(cè)序與蛋白免疫印跡法鑒定MARCO基因敲除小鼠模型。方法將經(jīng)成簇的規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列（CRISPR）/CRISPR相關(guān)蛋白9（Cas9）技術(shù)獲得16種堿基敲除的MARCO^-/-親代C57BL/6小鼠（雌、雄鼠各8只）與MARCO^＋/＋的親代C57BL/6雌性小鼠（8只）合籠繁殖,獲得子一代MARCO^0＋/-小鼠;再以MARCO^0＋/-小鼠自交得到MARCO^-/-足夠數(shù)量的純合小鼠。采用基因測(cè)序?qū)π∈蠡蛐瓦M(jìn)行鑒定,采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)MARCO蛋白相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果經(jīng)過(guò)1年的合籠繁殖,共繁殖5代,有5種敲除不同堿基數(shù)（-11、-25、-36、-46、-61 bp）的MARCO^-/-基因型穩(wěn)定遺傳;MARCO^-/-、MARCO^0＋/-、MARCO^＋/＋基因型比例約為1∶2∶1,符合孟德?tīng)栠z傳定律。以MARCO（-11 bp）為例,共獲得子五代（F5代）MARCO^-/-小鼠42只,MARCO^0＋/-小鼠92只,MARCO^＋/＋小鼠48只;上述3種基因型F5代小鼠出生后第4、6和8周的體質(zhì)量分別比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〉0.05）。與MARCO^＋/＋小鼠和MARCO^-/-（-36 bp）、MARCO^-/-（-61 bp）小鼠比較,MARCO^-/-（-11 bp）和MARCO^-/-（-46 bp）小鼠的MARCO蛋白相對(duì)表達(dá)水平均下調(diào)（P〈0.05）,選擇該2種小鼠模型作為MARCO基因敲除小鼠模型。結(jié)論成功鑒定MARCO基因敲除小鼠模型,為深入研究MARCO基因在小鼠矽肺纖維化中的作用及調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

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