惡性瘧原蟲自噬相關蛋白8基因原核重組表達及多克隆抗體制備
摘要：目的通過pET-41 Ek/LIC載體在大腸桿菌工程菌中重組表達惡性瘧原蟲自噬相關蛋白8(PfAtg8)基因的重組蛋白GST-PfAtg8-6×His,并用蛋白免疫法制備小鼠抗自噬相關蛋白8(PfAtg8)的多克隆抗體,并驗證其效價。方法體外培養惡性瘧原蟲3D7株,并提取DNA,PCR擴增PfAtg8序列全長,與pET-41 Ek/LIC載體通過基因重組直接連接,在大腸桿菌Rosetta^TM(DE3)PLysS工程菌中誘導表達重組蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制備鼠抗PfAtg8的多克隆抗體并用Western blots和酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)進行效價驗證。結果PCR擴增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC載體,轉化入大腸桿菌。誘導表達并純化重組蛋白,進而利用該蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體,經驗證該抗體可對重組蛋白進行特異性識別,且效價可達1∶100000。結論成功表達、純化了GST-PfAtg8-6×His重組蛋白,并免疫小鼠獲得多克隆抗體血清。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系中國熱帶醫學雜志社
相關推薦
更多
