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克隆、原核表達(dá)和鑒定牛重組SHH蛋白

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摘要：Sonic Hedgehog(SHH)是Hedgehog家族的一員,其不僅參與胚胎發(fā)育的基本過程,同時(shí)也參與脂肪生成和肌肉生成。SHH在動(dòng)物肌肉和脂肪沉積上的雙向作用提示它是調(diào)控肌內(nèi)脂肪含量(IMF)的重要候選基因。本研究中,使用重疊PCR法克隆了去除信號(hào)肽序列的牛SHH(btSHH)基因,然后在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)了btSHH蛋白。使用鎳親和層析試劑盒純化了原核表達(dá)的btSHH,并用Western blot驗(yàn)證了目標(biāo)蛋白的正確性。將純化后的btSHH添加到前脂肪細(xì)胞3T3-L1的培養(yǎng)基中,并誘導(dǎo)細(xì)胞分化后表明,重組btSHH蛋白能夠顯著地抑制脂肪沉積過程。本研究結(jié)果為未來肉牛生產(chǎn)中應(yīng)用btSHH提供理論基礎(chǔ)。

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