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桃果實(shí)PpARF1蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體制備

管丹; 史夢(mèng)雅; 胡曉; 關(guān)偉; 劉悅萍 北京農(nóng)學(xué)院植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院; 北京102206; 北京農(nóng)學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院/農(nóng)業(yè)部華北都市農(nóng)業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 北京102206; 北京市平谷區(qū)人民政府果品辦公室; 北京101200

摘要：【目的】為了探討轉(zhuǎn)錄因子ARF1(AuxinResponseFactor)對(duì)桃果實(shí)發(fā)育調(diào)控的機(jī)制.【方法】以'24號(hào)'桃果實(shí)為試驗(yàn)材料,構(gòu)建桃ARF1基因的原核表達(dá)載體pET32a-PpARF1,轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)菌體蛋白,篩選出重組蛋白的最適表達(dá)條件,按照最適條件大量搖菌誘導(dǎo)表達(dá)蛋白,并進(jìn)行重組蛋白的純化,最后用純化誘導(dǎo)后的重組蛋白制備多克隆抗體及WB檢測(cè).【結(jié)果】SDS-PAGE電泳檢測(cè)得到pET32a-PpARF1重組蛋白的位置大約在95.0kD,在37℃,轉(zhuǎn)速250r/min,IPTG0.10mmol/L,誘導(dǎo)4h,誘導(dǎo)出的蛋白表達(dá)量最大.免疫印跡試驗(yàn)顯示所得抗血清能很好檢測(cè)到目的蛋白.【結(jié)論】ARF轉(zhuǎn)錄因子參與生長(zhǎng)素調(diào)控桃果實(shí)發(fā)育成熟的過(guò)程.

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