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虉草ISSR-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化與引物篩選

張永亮; 劉鵬; 駱秀梅; 劉楊 內(nèi)蒙古民族大學(xué); 內(nèi)蒙古通遼028042

摘要：22個虉草基因組DNA為ISSR-PCR擴增模板,采用單因素試驗方法,對影響PCR擴增體系中dNTP、引物濃度、Taq酶和模板DNA用量4個因素及引物退火溫度進行梯度試驗,優(yōu)化得到最佳的ISSR-PCR反應(yīng)體系,即20μL反應(yīng)體系中分別加入0.3μL Taq DNA聚合酶（5U/μL）,2μL 10×PCR Buffer（mg2＋plus）,1.5μL dNTP（2.5mmol/L）,1.5μL引物（10pmol/μL）,50ng模板DNA,ddH2O補足體積。以此體系對24條引物進行篩選,最終獲得了多態(tài)性高,重復(fù)性好的引物12條。引物UBC808、809、811、815、818、820、826的適宜退火溫度為55℃,引物835,841和842的適宜退火溫度為56℃,而引物810和834的適且退火溫度分別為52℃和54℃。12條引物共擴增總條帶數(shù)192條,其中,多態(tài)性條帶數(shù)173條,多態(tài)位點百分率89.81%。

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