基于RT-HDA等溫擴增技術快捷檢測H7N9禽流感病毒的方法研究
摘要：常規PCR方法不適宜于實驗條件不足的基層現場檢測H7N9禽流感病毒,不利于疑似病例的及時診治。本研究旨在建立一種快速簡便、高靈敏度、低成本的H7N9禽流感病毒快速核酸檢測技術。選用H7N9禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因作為靶標區域設計引物,采用FITC和Biotin標記上下游引物,通過逆轉錄解旋酶依賴性等溫擴增(Reverse transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)技術擴增病毒RNA,輔以膠體金免疫層析試紙檢測核酸擴增產物,建立H7N9禽流感病毒等溫擴增檢測方法。采用H7N9禽流感病毒質粒和病毒培養物對該方法的靈敏性、特異性和重復性進行評價,結果顯示:病毒最低檢測限20個拷貝數/μL,與常規PCR方法相比較無明顯差異,重復性試驗一致,與其他型別的禽流感、流感病毒無交叉反應。本研究建立的RT-HDA聯合膠體金免疫層析試紙檢測H7N9禽病毒檢測方法具有較好的靈敏度、特異性和重復性,特別適用于現場條件下檢測H7N9禽流感病毒快速簡便的檢測。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系病毒學報雜志社
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